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    高分子修飾/無(wú)機(jī)晶體固定化酶研究進(jìn)展

    2018-01-23 00:45:15白云岫
    生物加工過(guò)程 2018年1期
    關(guān)鍵詞:脂肪酶催化活性復(fù)合物

    白云岫,曹 遜,戈 鈞

    (清華大學(xué) 化學(xué)工程系 工業(yè)生物催化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100084)

    相比于傳統(tǒng)催化劑,酶具有催化速率快、區(qū)位和立體選擇性高、反應(yīng)條件溫和等特點(diǎn),在化工制造、食品生產(chǎn)、醫(yī)藥合成以及分析檢測(cè)等領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用[1]。然而,天然酶存在穩(wěn)定性差和難以重復(fù)使用的問(wèn)題,同時(shí)在有機(jī)溶劑中容易發(fā)生團(tuán)聚,引起失活,應(yīng)用范圍受到了較大限制。

    在過(guò)去的幾十年里,許多研究采用蛋白質(zhì)工程、酶化學(xué)修飾/固定化技術(shù)等方法,提高了酶的活性、穩(wěn)定性、有機(jī)溶劑耐受性和底物親和力等[1]。其中,酶固定化可以使酶分子與載體之間形成多點(diǎn)連接,有效提高蛋白分子空間構(gòu)象的穩(wěn)定性,因此是一種有效提高酶穩(wěn)定性的方法,但同時(shí)可能會(huì)帶來(lái)酶催化活性的較大損失。近年來(lái),研究者開(kāi)發(fā)出了很多新的酶固定化方法[2-7]。與傳統(tǒng)固定化方法相比,采用新型功能高分子修飾[8]和無(wú)機(jī)納米晶體包埋等方法[9-10],可以制備具有高催化活性的固定化酶,甚至可以獲得高于自由酶的表觀活性,同時(shí)顯著提高酶在高溫和有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性。

    本文中,筆者將主要從功能高分子修飾、無(wú)機(jī)晶體包埋以及金屬有機(jī)骨架化合物(metal-organic frameworks,MOFs)晶體包埋3個(gè)方面介紹近年來(lái)固定化酶領(lǐng)域的一些研究進(jìn)展。

    1 酶-Pluronic結(jié)合物

    很多酶催化反應(yīng)需要利用有機(jī)溶劑溶解反應(yīng)物,同時(shí)抑制副反應(yīng)發(fā)生,以降低水產(chǎn)生的副作用。然而,大多數(shù)在生物體內(nèi)有著很高催化活性的酶在有機(jī)相中的催化活性會(huì)大幅度降低。這種現(xiàn)象的產(chǎn)生很大程度上是由于酶分子在有機(jī)溶劑中難以溶解,以懸浮聚集體形式進(jìn)行催化,使得酶的活性位點(diǎn)難以與反應(yīng)底物有效接觸。針對(duì)此問(wèn)題,Zhu等[8]研究了采用聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物(Pluronic)[11]共價(jià)修飾酶分子來(lái)制備酶-Pluronic結(jié)合物的方法。利用酶-Pluronic結(jié)合物良好的有機(jī)溶劑相容性,在常規(guī)反應(yīng)溫度范圍內(nèi)(20~40 ℃),結(jié)合物可以溶解于常見(jiàn)有機(jī)溶劑(如甲醇、甲苯和四氫呋喃等),進(jìn)行均相催化,降低了有機(jī)相酶催化反應(yīng)的傳質(zhì)阻力,從而使有機(jī)溶劑中酶催化的表觀活性比天然酶提高了幾個(gè)數(shù)量級(jí)。同時(shí),由于酶-Pluronic結(jié)合物在有機(jī)相中受溫度影響的特性,即當(dāng)酶催化反應(yīng)完成后,降低體系溫度至4 ℃就可以使得酶-Pluronic結(jié)合物形成沉淀,從而方便對(duì)其進(jìn)行回收和重復(fù)使用。

    在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行了酶-Pluronic結(jié)合物在有機(jī)相酶催化合成醫(yī)藥化學(xué)品中的應(yīng)用探索[12-14]。例如,Zhang等[12]報(bào)道了在甲基異丁基酮溶劑中,以脂肪酶-Pluronic結(jié)合物為催化劑,采用化學(xué)-酶法催化合成抗癌藥物戊柔比星的方法,結(jié)果發(fā)現(xiàn):脂肪酶-Pluronic結(jié)合物在有機(jī)相中的催化速率達(dá)到了天然酶的11倍,底物轉(zhuǎn)化率達(dá)到94%,戊柔比星純度可達(dá)98%以上。并且,在重復(fù)使用7次之后,脂肪酶-Pluronic結(jié)合物催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率仍然能達(dá)到80%以上。Wu等[13]研究了脂肪酶-Pluronic結(jié)合物在甲基叔丁基醚中催化外消旋化苯基甘氨酸甲酯的氨解反應(yīng)、合成R-苯基甘氨酸酰胺的反應(yīng)過(guò)程,結(jié)果發(fā)現(xiàn),脂肪酶-Pluronic結(jié)合物的表觀催化活性達(dá)到了天然酶的11倍。

    但是,對(duì)于表面含有較少賴氨酸殘基的酶分子,用醛基化的Pluronic共價(jià)修飾酶分子時(shí)的修飾反應(yīng)效率較低,難以形成酶-Pluronic結(jié)合物。為解決此問(wèn)題,Wu等[15]報(bào)道了在反膠束體系中合成酶-Pluronic結(jié)合物,以醛基化的Pluronic作為反應(yīng)型表面活性劑,在反膠束限域空間中進(jìn)行酶的高效修飾反應(yīng)。這種方式可以有效提高賴氨酸較少的酶分子的修飾效率,如辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),合成的HRP-Pluronic結(jié)合物在有機(jī)相中的表觀催化活性是天然酶的10倍。

    2 酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物

    無(wú)機(jī)晶體材料具有很好的結(jié)構(gòu)剛性,可以提高包埋在其中的酶分子的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,同時(shí)晶體中的金屬離子等成分還有可能賦予固定化酶新的功能特性。然而,如何把酶分子包埋到無(wú)機(jī)晶體中是一個(gè)重要挑戰(zhàn)。Ge等[9]報(bào)道了一種基于共沉淀過(guò)程將酶分子包埋到無(wú)機(jī)晶體中的方法:將CuSO4水溶液加入到含有酶分子的磷酸鹽緩沖液中,蛋白分子誘導(dǎo)磷酸銅晶體形成并輔助其生長(zhǎng),在磷酸銅晶體生成沉淀的過(guò)程中,酶分子被包埋到磷酸銅晶體中,得到如圖1所示的具有花狀微納結(jié)構(gòu)的酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物。經(jīng)研究最終發(fā)現(xiàn):包埋在磷酸銅無(wú)機(jī)晶體中的漆酶催化活性是天然酶的5~7倍。同時(shí),在室溫水溶液環(huán)境下,60 d后,漆酶-磷酸銅晶體復(fù)合物的活性仍然保持95%以上,而天然酶在相同條件下會(huì)喪失50%以上的活性。該工作引起很多研究者對(duì)共沉淀方法構(gòu)建酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物的興趣,出現(xiàn)了很多類型酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物的制備研究工作[16-23]。Li等[24]采用該方法制備了辣根過(guò)氧化物酶(HRP)-葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOx)雙酶共包埋的酶-磷酸銅無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物,并通過(guò)反應(yīng)流程控制使得GOx分布在復(fù)合物的外層,HRP分布于復(fù)合物的內(nèi)部,結(jié)果發(fā)現(xiàn):磷酸銅無(wú)機(jī)晶體共包埋提供的雙酶鄰近效應(yīng)和區(qū)域化效應(yīng)提高了雙酶催化總活性,達(dá)到了天然酶的3倍。同時(shí),在水溶液中常溫保存7 d后,雙酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物的總活性仍然可以保持90%以上,而天然雙酶體系相同條件下在1 d后就喪失80%的活性。

    圖中右上角的插圖是高分辨率掃描電鏡照片,左上角為自然界中花在不同生長(zhǎng)階段的照片圖1 不同的蛋白濃度下合成的蛋白-磷酸銅無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物的掃描電鏡照片F(xiàn)ig.1 SEM images of hybrid nanoflowers made from BSA-Cu3(PO4)2·3H2O under diffirent protein concentrations

    Li等[25]在采用共沉淀法制備具有高催化活性和良好穩(wěn)定性的脂肪酶-磷酸銅晶體復(fù)合物的基礎(chǔ)上,通過(guò)原位還原的策略,制備了脂肪酶(CandidaAntarcticalipase B,CALB)-銅納米顆粒復(fù)合物。在原位還原過(guò)程中,加入聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)可以有效保護(hù)酶的活性,得到的CALB@PVP@Cu復(fù)合物保持了82%的酶活。CALB@PVP@Cu復(fù)合物中的銅納米顆粒相比于傳統(tǒng)的納米銅材料,具有粒徑更小、比表面積更高的優(yōu)點(diǎn),可提高脂肪酶-銅級(jí)聯(lián)催化反應(yīng)的效率。

    除磷酸銅晶體外,其他晶體材料如磷酸鋅[26-27]、磷酸鈷[28]和磷酸氫鈣[29]等也被證實(shí)可以用于酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物的構(gòu)建。Zhang等[27]制備了脂肪酶-磷酸鋅復(fù)合物,其催化活性比天然酶提高147%。晶體包埋作用可很好地提高酶的穩(wěn)定性,使固定化的酶能夠更好地耐受pH、高溫等條件,同時(shí)具有長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

    以蛋白復(fù)合物代替單一蛋白分子,同樣能夠起到誘導(dǎo)晶核形成、輔助結(jié)晶的作用。Ye等[29]利用刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)對(duì)糖蛋白先進(jìn)行特異性結(jié)合,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步構(gòu)建了Con A-轉(zhuǎn)化酶-磷酸氫鈣(ConA-invertase-CaHPO4)復(fù)合物,用于檢測(cè)食品中的大腸桿菌O157:H7(EscherichiacoliO157:H7)。該方法的檢測(cè)線性范圍可以達(dá)到10~105CFU/mL,最低檢測(cè)限為10 CFU/mL,檢測(cè)精度比其他大腸桿菌檢測(cè)方法提高了1~2個(gè)數(shù)量級(jí)。

    此外,采用無(wú)機(jī)晶體材料作為固定化酶載體,除了能夠提高酶的穩(wěn)定性之外,還能為酶催化劑帶來(lái)新的功能。例如,Li等[30]采用水溶液共沉淀法制備了酶-水膽礬晶體復(fù)合物(copper hydroxysulfate nanocrystals,CHNs),對(duì)不同酶的效率有所不同,如:細(xì)胞色素c(Cyt c)-CHNs復(fù)合物在水溶液中的活性是天然酶的143倍,HRP-CHNs復(fù)合物的活性是天然酶的1.1倍。更為有趣的是,水膽礬晶體材料的引入使得復(fù)合物產(chǎn)生了抗菌功能,該復(fù)合物在水溶液中可以有效殺滅細(xì)菌,防止水相反應(yīng)體系染菌。同時(shí),作為一種具有自抗菌能力的生物催化劑,酶-水膽礬晶體復(fù)合物在工業(yè)生物催化中防止體系染菌、生物傳感器中防止器件表面染菌等方面具有潛在應(yīng)用價(jià)值。

    3 酶-MOFs晶體復(fù)合物

    金屬-有機(jī)骨架化合物(metal-organic frameworks,MOFs)[31-32]是一類新型的多孔無(wú)機(jī)晶體材料,在氣體儲(chǔ)存[33-34]、催化劑[35]、吸附分離[36-38]以及蛋白功能構(gòu)型變化機(jī)制研究[39-40]等方面都有著廣泛應(yīng)用。近年來(lái),將MOFs應(yīng)用于酶固定化也得到了研究者的廣泛關(guān)注。多孔硅作為常用的固定化酶納米材料,具有孔徑大、孔隙率高、孔結(jié)構(gòu)規(guī)則等特點(diǎn)。然而,由于其一維的孔道結(jié)構(gòu)以及缺乏與酶的有效相互作用,會(huì)出現(xiàn)酶泄露與聚集的情況[41-44];而MOFs可以通過(guò)有機(jī)組分與酶分子的相互作用有效地固定酶分子,因?yàn)镸OFs具有更小的孔徑,這也在一定程度上避免了酶分子的泄露與聚集。

    采用MOFs進(jìn)行酶固定化主要有以下3種不同的制備方法。第1種方法是先進(jìn)行介孔MOFs材料的合成,再將酶分子直接吸附固定于MOFs孔道中[45-48]。Lykourinou等[45]將過(guò)氧化物酶(microperoxidase-11,MP-11)吸附固定化于由鋱與2,4,6-三(4-羧基苯基)-1,3,5-三嗪構(gòu)成的介孔MOFs(Tb-4,4′,4″-(1,3,5-trianze-2,4,6-triyl)tribenzoic acid,Tb-TATB)中,而Chen等[39]則研究了Cyt c吸附于Tb-TATB過(guò)程中酶分子的構(gòu)象變化。Lian等[49]采用一種具有3種不同孔徑結(jié)構(gòu)的特殊MOFs材料PCN-888,通過(guò)分步包埋的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)2種不同大小酶分子GOx和HRP的分區(qū)定點(diǎn)固定化,構(gòu)建級(jí)聯(lián)反應(yīng)的納米反應(yīng)器。Li等[47]將有機(jī)磷水解酶(organophosphorus acid anhydrolase,OPAA)包埋于介孔MOFs材料PCN-128y中,包埋后的OPAA催化二異丙基氟磷酸(diisopropylfluorophosphate,DFP)水解的活性接近天然酶的20%,轉(zhuǎn)化率達(dá)到80%~90%。OPAA@PCN-128y有很好的熱穩(wěn)定性和長(zhǎng)期使用穩(wěn)定性,在70 ℃下仍然能保持70%以上的活性;而在同樣條件下,天然酶只能維持不到20%的活性;室溫放置3 d,天然酶催化水解反應(yīng)最高只能達(dá)到25%的轉(zhuǎn)化率,而OPAA@PCN-128y催化反應(yīng)能夠達(dá)到90%的DFP轉(zhuǎn)化率。

    最近的研究中,Zhang等[50]報(bào)道了一種構(gòu)建介孔MOFs用于酶的吸附固定化的新方法。先將聚苯乙烯(PS)納米小球包埋到ZIF-8晶體中,再除去PS小球,從而構(gòu)建介孔,介孔用于吸附酶分子進(jìn)行固定化。采用該方法可以制備介孔-微孔復(fù)合ZIF-8(mesoZIF-8),Cyt c分子可以被吸附于mesoZIF-8的介孔內(nèi)部,mesoZIF-8的微孔可增強(qiáng)反應(yīng)底物傳質(zhì)。相比于天然酶,所制備的Cyt c@mesoZIF-8的活性提高了128%,米氏常數(shù)Km降低了50%,應(yīng)用于絲網(wǎng)印刷酶電極檢測(cè)過(guò)氧化氫時(shí),檢測(cè)靈敏度提高了1.4倍。

    第2種方法同樣是先合成MOFs材料,然后再將酶分子吸附或者共價(jià)結(jié)合在MOFs的表面進(jìn)行固定化。Jung等[51]將CALB通過(guò)共價(jià)結(jié)合的方法固定在一、二、三維結(jié)構(gòu)MOFs材料表面,催化高立體選擇性的酯交換反應(yīng)。在有機(jī)溶劑中,三維MOFs材料表面結(jié)合的CALB催化活性是自由CALB的近1 000倍。同時(shí),其催化酯交換反應(yīng)的立體選擇性也達(dá)到甚至超過(guò)了天然CALB的水平。酶在MOFs表面的固定化研究也引起了其他研究者的關(guān)注[52-56]。Xia等[56]在氨基功能化修飾的MOFs材料UiO-66-NH2表面利用谷氨酸鋅與磁性納米顆粒修飾,合成了特殊的金屬-生物分子網(wǎng)絡(luò),并在其表面吸附黑曲霉脂肪酶(Aspergilllusnigerlipase,ANL),酶負(fù)載量為118.0 mg/g,保持了天然酶82%的活性。該固定化脂肪酶在廣泛的pH與溫度范圍內(nèi)具有很好的可操作性,并且可以通過(guò)磁場(chǎng)方便地對(duì)催化劑進(jìn)行回收和重復(fù)使用。

    上述2種制備酶-MOFs復(fù)合物的方法也還存在一些問(wèn)題。例如,制備過(guò)程相對(duì)較復(fù)雜,需要先合成一些特殊的具有較大孔徑或表面官能化的MOFs材料,或者酶分子和MOFs載體結(jié)合不夠牢固,酶分子仍然易從MOFs載體上脫落。

    第3種方法是共沉淀法制備酶-MOFs復(fù)合物。受到酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物研究的啟發(fā),Lyu等[10]提出采用共沉淀法將酶直接包埋于ZIFs內(nèi)(圖2),將2-甲基咪唑與含有酶的水溶液混合,再加入到鋅鹽水溶液中,在Zn2+與2-甲基咪唑自組裝形成ZIF-8的過(guò)程中,酶分子會(huì)與該結(jié)構(gòu)發(fā)生共沉淀,形成酶-ZIF-8晶體復(fù)合物。包埋后的Cyt c的活性是天然酶的10倍,米氏常數(shù)Km也由天然酶蛋白的15 mmol/L降至2 mmol/L。ZIF-8包埋的酶分子對(duì)有機(jī)溶劑有很好的耐受能力,在甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺和二甲基亞砜等蛋白變性溶劑中,天然酶基本完全喪失活性,而包埋在ZIF-8中的酶分子能夠保持催化活性不變[58]。該共沉淀方法制備酶-MOFs復(fù)合物具有簡(jiǎn)便、高效且能夠適用于不同種酶體系的特點(diǎn)[59],是一種有效提高酶穩(wěn)定性的固定化方法。共沉淀法由于其簡(jiǎn)單和較為通用的特點(diǎn)受到研究者的關(guān)注,采用該方法,Liang等[60]、Shieh等[61]、Li等[62]、He等[63]和Cui等[64]分別探索了辣根過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶、病毒衣殼蛋白和脂肪酶等在ZIF-8晶體中的包埋,進(jìn)一步證實(shí)該方法可以很好地提高多種酶體系在高溫、有機(jī)溶劑和寬泛pH范圍等容易導(dǎo)致酶失活環(huán)境下的穩(wěn)定性。

    圖2 采用共沉淀法制備Cytc-ZIF-8晶體復(fù)合物[10]Fig.2 Protein molecules directly embedded in metal-organic frameworks by a coprecipitation method

    在進(jìn)一步研究中,Wu等[65]報(bào)道了采用共沉淀法制備雙酶-MOFs晶體復(fù)合物,在ZIF-8中同時(shí)包埋葡萄糖氧化酶(GOx)和辣根過(guò)氧化物酶(HRP),合成了GOx&HRP-ZIF-8復(fù)合物,探索MOFs晶體中的雙酶級(jí)聯(lián)催化機(jī)制,結(jié)果發(fā)現(xiàn):基于ZIF-8晶體中雙酶鄰近效應(yīng),中間產(chǎn)物過(guò)氧化氫易擴(kuò)散到HRP附近被催化,GOx&HRP-ZIF-8復(fù)合物的催化總活性為GOx-ZIF-8復(fù)合物與HRP-ZIF-8復(fù)合物混合體系的2倍。同時(shí),雙酶-MOFs晶體復(fù)合物的穩(wěn)定性提高,在常溫水溶液中放置7 d,復(fù)合物的活性仍然能保持80%,而在相同條件下,天然雙酶體系的活性低于初始酶活的50%。

    為了進(jìn)一步提高酶-MOFs晶體復(fù)合物的重復(fù)使用性能,Wu等[66]利用聚多巴胺(polydopamine,PDA)將酶-MOFs晶體復(fù)合物進(jìn)行共價(jià)交聯(lián),形成微米級(jí)的PDA@GOx-ZIF-8復(fù)合物。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn):復(fù)合物保持了50%的酶活,并且可以更為便捷地通過(guò)離心對(duì)酶催化劑進(jìn)行分離和重復(fù)使用;經(jīng)過(guò)10次重復(fù)使用,復(fù)合物的活性保持不變。

    在溶液中一步共沉淀法制備蛋白-MOFs復(fù)合物研究的基礎(chǔ)上,Hou等[67]采用市售彩色噴墨打印機(jī)在多種可打印介質(zhì)(如紙張等)上實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)-MOFs復(fù)合物的原位圖案化合成。基于共沉淀法的原理,該工作將蛋白質(zhì)溶液、合成MOFs所需的金屬離子溶液和有機(jī)配體溶液分別裝入噴墨打印機(jī)的不同墨盒中,通過(guò)設(shè)計(jì)打印圖案和配色,可以對(duì)打印位置和比例進(jìn)行精確控制。在可打印介質(zhì)表面上,發(fā)生蛋白溶液和合成MOFs前驅(qū)體溶液的微液滴融合,在液滴中形成蛋白質(zhì)-MOFs復(fù)合物,并固載在介質(zhì)表面。在生物傳感器、生物電子器件等很多生物醫(yī)學(xué)工程應(yīng)用中,通常需要在材料表面上進(jìn)行生物大分子的圖案化固定,噴墨打印原位構(gòu)建蛋白質(zhì)-MOFs復(fù)合物的方法為介質(zhì)表面上生物大分子的圖案化固定提供了新策略,有望推動(dòng)其在生物傳感器、可穿戴生物電子器件、人造仿生膜和組織工程等領(lǐng)域的進(jìn)一步深入研究。

    4 結(jié)論與展望

    酶固定化是提高酶催化劑重復(fù)使用次數(shù)、增強(qiáng)酶穩(wěn)定性的有效手段,但是傳統(tǒng)的固定化方法經(jīng)常會(huì)帶來(lái)較大的酶活損失,使得固定化酶的表觀活性遠(yuǎn)低于天然酶,并且固定化方法適用范圍有限,難以用于多酶體系的可控固定化。開(kāi)發(fā)新型的固定化載體材料和方法,利用簡(jiǎn)便、通用和易規(guī)?;苽涞姆椒ㄟM(jìn)行酶固定化,同時(shí)兼顧固定化酶的表觀活性和穩(wěn)定性是該領(lǐng)域研究者追求的目標(biāo)。

    本文中,筆者總結(jié)了近年來(lái)在利用功能高分子修飾酶、共沉淀法制備酶-無(wú)機(jī)晶體復(fù)合物方面的一些工作。采用功能高分子(Pluronic)修飾能夠顯著提高酶在有機(jī)溶劑中的表觀催化活性,同時(shí)方便酶催化劑的重復(fù)使用;采用共沉淀法可以簡(jiǎn)便合成多種酶-無(wú)機(jī)晶體/MOFs晶體復(fù)合物,在獲得很好的酶穩(wěn)定性的同時(shí)兼顧酶的表觀活性,并且該方法可以實(shí)現(xiàn)雙酶的可控共固定化,提高雙酶催化總效率。新型酶固定化或酶修飾材料的研究為提高酶在實(shí)際應(yīng)用中的性能提供了豐富的可能,為高效酶催化劑的設(shè)計(jì)和可控制備提供了新的解決方案,通過(guò)納米技術(shù)、材料科學(xué)和生物技術(shù)的最新發(fā)展推動(dòng)生物化工研究的進(jìn)步。未來(lái),在面向?qū)嶋H應(yīng)用體系的酶-納米材料界面問(wèn)題研究、固定化載體上酶分子結(jié)構(gòu)的清晰表征和控制、新型固定化酶規(guī)?;苽浼夹g(shù)等方面的深入探索將進(jìn)一步推進(jìn)該領(lǐng)域的快速發(fā)展,為綠色化工過(guò)程、高效檢測(cè)體系提供穩(wěn)定、高活性和豐富功能性的酶催化劑。

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