薰衣草殘渣中黃酮的超聲輔助提取工藝及其抗氧化活性

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(1.南京林業(yè)大學(xué)輕工與食品學(xué)院,江蘇南京 210037；2.重慶第二師范學(xué)院食品安全與營養(yǎng)研究所，重慶 400067；3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 737100；4.重慶第二師范學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院,重慶 400067)

薰衣草(LavandulaangustifoliaMill.)是一種名貴而重要的天然香料植物,在新疆伊犁種植面積達3萬多畝(1畝=666.7平方米)。薰衣草花穗提制的精油芳香宜人,具有殺菌、松弛平滑肌、鎮(zhèn)靜、催眠等作用,因此廣泛用于日用化妝品工業(yè)中[1]。我國每年的薰衣草精油年產(chǎn)量已超過10萬公斤,薰衣草精油僅占薰衣草干花含量的1.5%左右[2],因此工業(yè)上提取薰衣草花精油后剩余的殘渣中仍含有大量的其它成分,有研究表明殘渣中主要含有大量蛋白質(zhì)、糖類、黃酮、微量元素等物質(zhì),若直接扔棄將造成極大的資源浪費[3-4]。

黃酮類化合物是一種存在于植物中的天然產(chǎn)物,屬于天然抗氧化劑,藥理學(xué)研究表明從植物莖葉、花卉中通過溶劑萃取、超臨界流體萃取、微波提取等方法提取黃酮,如蕎麥殼、銀杏葉、蜜柚葉等,具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等多種生物活性[5-8]。薰衣草殘渣中因化學(xué)組成復(fù)雜難于有效提取黃酮,本實驗利用超聲波的空化效應(yīng)、熱效應(yīng)以及機械效應(yīng)等作用,將薰衣草組織細(xì)胞中的黃酮有效釋放后提取,該方法簡便有效、設(shè)備的維護和保養(yǎng)方便,若能將殘渣中的黃酮進行有效利用,既可以解決薰衣草精油生產(chǎn)過程中的廢渣處理問題,又可使其得到充分利用,這對于挖掘薰衣草的潛在價值,擴大薰衣草產(chǎn)業(yè)無疑是一個重要途徑。目前鮮見對薰衣草殘渣的深入研究與開發(fā),本研究對薰衣草殘渣中黃酮類物質(zhì)的提取條件進行優(yōu)化,并通過總抗氧化能力、DPPH自由基清除能力、鐵離子螯合能力和總還原能力四個方面考察黃酮純化物的抗氧化能力,為開發(fā)綜合利用薰衣草資源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

DPPH、ABTS+、Ferrozine溶液 國藥集團化學(xué)試劑有限公司,上海；薰衣草殘渣(固體)水蒸氣蒸餾薰衣草干花提取精油后的剩余物,真空冷凍干燥后備用 由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。

XO-2B型超聲波提取器 南京先歐儀器制造有限公司;800B型離心機 上海安亭科學(xué)儀器廠制造;HL-2B型恒流泵 上海滬西分析儀器廠有限公司;電腦全自動部分收集器 上海琪特分析儀器有限公司;BUCHI R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 南京賀而頓儀器公司;DK-S26型電熱恒溫水浴鍋 上海右一儀器公司制造;UVmini-1240型紫外分光光度計 北京艾飛博科技有限公司制造;LABCONCO型冷凍干燥機 無錫凱派克斯科技有限公司;V700型真空泵 南京賀而頓儀器公司。

1.2實驗方法

1.2.1 薰衣草殘渣超聲輔助提取 薰衣草殘渣→粉碎→乙醇溶劑超聲波提取→黃酮粗提液→聚酰胺樹脂柱層析法純化→黃酮純化物。

將干燥后的薰衣草殘渣進行粉碎,過60目篩,按照一定料液比加入乙醇進行超聲波提取,將提取液離心3000 r/min,上清液即為黃酮粗提液。黃酮粗提液的純化采用聚酰胺樹脂柱層析法進行,將黃酮粗提液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇,然后采用真空冷凍干燥,得到粉末,備用。將該粉末以一定體積1∶5 (w/v)溶于蒸餾水中,采用聚酰胺樹脂吸附柱(15 mm× 50 cm)純化以除去多糖類、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。吸附及洗脫條件為:上樣流速為0.5 mL/min,按水、乙醇水溶液20%(v/v)、70%(v/v)的順序洗脫,洗脫流速為1 mL/min。

1.2.2 單因素實驗

1.2.2.1 乙醇濃度的影響 固定料液比為1∶10 (w/v),超聲波功率為100 W,溫度為45 ℃,提取時間為55 min,以50%、60%、70%、80%、90% 濃度的乙醇作為溶劑,考察不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對黃酮提取率的影響。

1.2.2.2 提取時間的影響 固定料液比為1∶10 (w/v),超聲波功率為100 W,溫度為45 ℃,以體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液為提取溶劑,分別將提取時間設(shè)定為50、60、70、80、90、100、110 min,考察不同提取時間對黃酮提取率的影響。

1.2.2.3 料液比的影響 固定超聲波功率為100 W,提取溫度為45 ℃,提取時間為90 min,以體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液,設(shè)置料液比分別為1∶6、1∶7、1∶8、1∶9、1∶10、1∶11,考察不同提取料液比對黃酮提取率的影響。

1.2.2.4 提取溫度的影響 固定提取時間90 min,料液比1∶10,超聲波功率100 W,乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,提取溫度分別為:30、35、40、45、50、55、60 ℃,考察不同溫度對黃酮提取率的影響。

1.2.2.5 超聲功率的影響 固定提取時間90 min,提取溫度45 ℃,料液比1∶10 (w/v),乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,分別設(shè)置超聲波功率為50、60、70、80、90、110 W,考察不同超聲波功率對黃酮提取率的影響。

1.2.3 響應(yīng)面實驗 參照李珍等[9]根據(jù)響應(yīng)面 Box-Behnken,在單因素實驗的基礎(chǔ)上,選取乙醇濃度X1、提取時間X2、料液比X3、提取溫度X4共4個因素對黃酮提取影響顯著的因子,以黃酮提取率為響應(yīng)值,采用4因子3水平的響應(yīng)面分析法,得到二次回歸方程,并找出最佳工藝參數(shù)。實驗設(shè)計如表1所示。

表1 響應(yīng)面設(shè)計實驗因子與水平Table 1 The experimental factors and level of RSM test

1.2.4 黃酮含量的測定 準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品200 mg,用70%乙醇溶解,定容至100 mL容量瓶中搖勻。移取10 mL于25 mL容量瓶中,用蒸餾水定容,得到0.8 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,分別置于10 mL容量瓶中,加入5%亞硝酸鈉0.4 mL,放置6 min后,再加入10%硝酸鋁0.4 mL,放置6 min后,再加入4%氫氧化鈉4 mL,加蒸餾水至刻度線,搖勻,放置15 min后,進行全波長掃描,在510 nm處有最大吸收波長。在此波長下測定,得出蘆丁濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(Y=10.364X+0.0016,R2=1.0000)。準(zhǔn)確吸取粗提液1.0 mL,置于25 mL容量瓶中定容,再從中吸取1 mL于10 mL容量瓶中,加5%亞硝酸鈉0.4 mL,按與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的方法測定吸光值,以標(biāo)準(zhǔn)曲線計算黃酮質(zhì)量。黃酮提取率為黃酮質(zhì)量與薰衣草殘渣質(zhì)量之比的百分率。

1.2.5 黃酮純化物的總抗氧化能力 參照Annapandian等[10]的方法略作改動。將5 mL 7 mmol/L ABTS+和88 μL 140 mmol/L過硫酸鉀混合,配制ABTS+自由基儲備液,避光保存?zhèn)溆谩Ｈ?.1 mL不同濃度待測液,加入3.9 mL ABTS+工作液,振蕩30 s,室溫下靜置6 min后,以無水乙醇為對照,在734 nm處測吸光值變化,采用VC作參照。按式(1)計算ABTS+自由基清除率:

式(1)

式(1)中:Ai為加入待測液的吸光值;Aj為待測液的本底值;A0為不加待測液的對照值。

1.2.6 清除DPPH·能力 參照Xie等[11]的方法略有改動。用無水乙醇配制濃度為0.2 mmol/L DPPH·溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配。取2 mL不同濃度的待測液,最后加入2 mL DPPH·溶液,在室溫避光靜置30 min,以無水乙醇為對照,在517 nm處測吸光值變化,采用VC作參照。按式(2)計算DPPH·清除率:

式(2)

式(2)中:Ai為加入待測液的吸光值;Aj為待測液的本底值;A0為不加待測液的對照值。

1.2.7 還原力 參照Wu等[12]的方法略有改動。 取0.5 mL待測液加入pH6.6的PBS緩沖液2.0 mL和1%鐵氰化鉀溶液2.5 mL,混合后在50 ℃下水浴加熱20 min,加入10%的三氯乙酸溶液2.5 mL,3000 r/min離心10 min,取上清液2.5 mL,加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL 0.1%三氯化鐵溶液,混勻,靜置10 min,在700 nm處測定吸光度,以PBS溶液作對照,采用VC作參照。還原力按式(3)計算:

還原力A700=A-A0

式(3)

式(3)中:A為加入樣品的吸光值,A0為不加樣品的對照組吸光值。

1.2.8 鐵離子螯合能力 參照 Boonsong[13]的方法略有改動。具體操作方法為取待測樣品1 mL,加入1 mmol/L的FeCl2·4H2O溶液0.1 mL,混合均勻靜置15 min加入0.5 mmol/L Ferrozine溶液0.2 mL,加蒸餾水補足至5 mL充分振蕩均勻,室溫靜置20 min,以蒸餾水為參比于 562 nm測定吸光度,對照以等體積蒸餾水取代樣品,其余操作完全相同,采用VC作參照。螯合能力按式(4)計算:

式(4)

式(4)中:A:樣品的吸光度;A0:為不加樣品的對照組吸光值。

1.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 所有實驗重復(fù)3次,最終結(jié)果為測定的數(shù)據(jù)取平均值,應(yīng)用Excel2007、SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理。

2 結(jié)果與討論

2.1單因素實驗結(jié)果與分析

從薰衣草殘渣中提取黃酮受乙醇濃度、時間、料液比、溫度及超聲波功率等因素的影響,結(jié)果如圖1所示。

由圖1A可知,殘渣在乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%～70%范圍內(nèi),隨著體積分?jǐn)?shù)的增加,薰衣草殘渣提取液吸光度顯著上升,超過70%后提取液吸光度呈下降趨勢,說明在乙醇體積分?jǐn)?shù)為 70%時薰衣草殘渣黃酮得率最大,因此確定乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%,這可能因為薰衣草殘渣中黃酮的極性與乙醇溶液相似,黃酮類物質(zhì)易于從殘渣組織中釋放。

由圖1B可知隨超聲波提取時間的增加提取率呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,即開始隨時間延長吸光度逐漸升高,提取率增大,在90 min時吸光度達到最大值,但時間過長會造成乙醇蒸發(fā)過快,黃酮結(jié)構(gòu)遭到破壞,導(dǎo)致得率下降,因此,最佳提取時間選取90 min。

由圖1C可知,在一定范圍內(nèi),隨著溶劑體積的增加,溶質(zhì)與溶劑接觸的表面積增大,黃酮提取率逐漸增大,但是當(dāng)料液比超過1∶10 (w/v)后,吸光度沒有顯著的變化,此時黃酮物質(zhì)已基本完全從組織釋放至溶劑中,再增加溶劑和物料的比例會造成乙醇的浪費,因此確定料液比為1∶10為宜。

由圖1D可知,殘渣中黃酮提取率隨提取溫度的增加呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,在45 ℃時提取率達到最大值,因此確定提取溫度在45 ℃。隨著溫度的升高,提取率增大,但過高的溫度會造成乙醇蒸發(fā)過快,黃酮的結(jié)構(gòu)遭到破壞,導(dǎo)致得率下降。

由圖1E可知,在60～100 W的功率范圍內(nèi),殘渣中黃酮純化物吸光度與功率成正比,在100 W時達到最大值,超過100 W后提取得率呈下降趨勢。功率過低,超聲波的能量低,分子運動慢,影響黃酮物質(zhì)的提取。過高的功率會產(chǎn)生高溫,從而導(dǎo)致黃酮物質(zhì)被破壞,降低了黃酮提取得率,因此確定提取的超聲波功率為100 W。

圖1 提取條件對薰衣草殘渣中黃酮提取率的影響Fig.1 The effect of extraction condition on flavonoids extraction efficacy注：A:乙醇濃度,B:提取時間,C:料液比,D:提取溫度,E:超聲波功率。

由此可見,采用單因素提取時間、溫度、乙醇濃度、料液比等因素對黃酮提取率的影響,確定超聲波輔助提取法的工藝條件為:料液比1∶10 (w/v),溫度45 ℃,時間90 min,濃度70%,功率100 W。固定功率100 W，將其余因素進行響應(yīng)面優(yōu)化。

2.2響應(yīng)面實驗結(jié)果與分析

2.2.1 響應(yīng)面回歸模型的建立與分析 在單因素實驗的基礎(chǔ)上,采用Box-Behnken 中心組合進行四因素三水平的實驗設(shè)計。實驗設(shè)計及結(jié)果如表2,以黃酮提取率Y 為響應(yīng)值,進行響應(yīng)面分析實驗。

表2 響應(yīng)面實驗設(shè)計與結(jié)果Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

應(yīng)用Design Expert進行回歸擬合分析,可得到提取條件與黃酮提取率之間的二次多項式模型為:Y=3.01+0.12X1+0.088X2-0.039X3+0.052X4-0.062X1X2+0.11X1X3-0.12X1X4-0.064X2X3-0.094X2X4+0.087X3X4-0.26X12-0.14X22-0.083X32-0.047X42。

由表3回歸方程各項方差分析表明,回歸模型p值=0.0037,具有高度的顯著性(p<0.01),此模型擬合良好,可靠性強。因素X1、X2、X12、X22對薰衣草殘渣中黃酮提取率有顯著的影響,X3、X4、X1X2、X1X3、X1X4、X2X3、X2X4、X3X4、X32、X42對薰衣草殘渣中黃酮提取率沒有顯著的影響。各因子對薰衣草殘渣黃酮提取率的影響大小依次是X1>X2>X4>X3。

表3 回歸的方差分析Table 3 Analysis of variance in regression

圖2 因素間相互作用對提取率的影響Fig.2 The effect of interaction between factors on flavonoids extraction efficacy

2.2.2 兩因子間交互作用分析 回歸分析結(jié)果的響應(yīng)面圖及其等高線圖中曲面坡度的陡峭和等高線形狀可反映交互作用的強弱趨勢[14-18],如圖2所示。圖2a為提取時間和乙醇濃度對黃酮提取率的交互作用。響應(yīng)面圖開口向下,存在極大值點,交互作用顯著。當(dāng)乙醇濃度一定時,黃酮提取率受提取時間影響大,坡度陡。當(dāng)提取時間一定時,黃酮提取率受乙醇濃度影響顯著。

圖2b為料液比和乙醇濃度對黃酮提取率的交互作用。由圖可知,當(dāng)乙醇濃度一定時,黃酮提取率受料液比影響較大,坡度較陡。當(dāng)料液比一定時,黃酮提取率受乙醇濃度呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢,特別是在較高區(qū)域曲面坡度陡,影響顯著。

圖2c為提取溫度和乙醇濃度對黃酮提取率的交互作用,乙醇濃度一定時,黃酮提取率隨提取溫度呈增加趨勢。當(dāng)提取溫度一定時,黃酮提取率隨乙醇濃度的增大,呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢,整體曲面坡度平緩,顯著性較弱。

圖3 黃酮純化物的抗氧化能力Fig.3 Antioxidant activity of flavonoids extracts

從圖2d提取時間和料液比對黃酮提取率的交互作用可知,當(dāng)料液比一定時,隨著提取時間的延長,黃酮取率先平緩上升再呈平緩下降趨勢。提取時間一定時,隨料液比的增大,黃酮提取率先增大后減小,曲面整體坡度較平緩,顯著性差。

圖2e為提取時間和提取溫度對黃酮提取率的交互作用?？梢?當(dāng)提取溫度一定時,隨著提取時間的延長,黃酮提取率先增大后趨于平穩(wěn)。當(dāng)提取時間一定時,隨著提取溫度的增大,黃酮提取率先增大再平緩的減小,曲面整體坡度較平緩,顯著性較差。

圖2f為提取溫度和料液比對黃酮提取率的交互作用,當(dāng)提取溫度一定時,隨著料液比的變化,黃酮提取率緩慢下降。當(dāng)料液比一定時,隨提取溫度的增大,黃酮提取率整體坡度較為平緩,呈現(xiàn)出較弱的顯著性。

該模型的最優(yōu)工藝條件為:提取時間92 min、乙醇濃度74%、提取溫度48 ℃、料液比1∶10 (w/v),預(yù)測值為3.1132 mg/g。在此條件下實際測定的黃酮提取率可達到(3.1125±0.2010) mg/g,與預(yù)測值3.1132 mg/g誤差小,可見該模型能準(zhǔn)確用于薰衣草殘渣中黃酮的提取,可靠性強。

2.3薰衣草殘渣中黃酮純化物的抗氧化能力

從圖3A可以看出,黃酮純化物的總抗氧化能力隨著黃酮濃度的增大而增大,當(dāng)濃度在0.5～1.5 mg/mL之間時,總抗氧化能力隨著濃度的增大顯著增大,當(dāng)濃度大于1.5 mg/mL后開始趨于平緩,在測定濃度范圍內(nèi),總抗氧化能力達到80%以上,說明其抗氧化能力較強。由圖3B可知,黃酮純化物清除DPPH自由基的能力隨著黃酮濃度的增大而上升。當(dāng)濃度達到6 mg/mL時清除率為81.11%。黃酮類化合物對鐵離子具有很強的還原能力[19-22],它們提供的電子能夠?qū)?Fe3+還原為Fe2+。由圖3C所示,抗氧化能力的大小和溶液的吸光度值呈正相關(guān),吸光度值越高,樣品的還原能力越強,抗氧化性越高。

金屬鐵是許多自由基產(chǎn)生過程的催化劑。Fe2+可介導(dǎo)脂質(zhì)過氧化,同時還是·OH等產(chǎn)生的媒介物。FeCl2與Ferrozine溶液混合在562 nm有吸收峰,當(dāng)加入鐵離子螯合劑時,其吸光度會下降[19-23],根據(jù)吸光度的變化可以判斷樣品螯合鐵離子的能力。鐵離子螯合率與抗氧化能力呈正相關(guān),螯合率越高,則抗氧化能力越強。如圖3D所示,隨著黃酮濃度的增大,螯合率顯著增大。綜合4個方面的評價結(jié)果可見,薰衣草殘渣中的黃酮具有較強抗氧化能力。

3 結(jié)論

本文以薰衣草殘渣為研究對象,采用單因素和響應(yīng)面法對薰衣草殘渣中黃酮的超聲輔助提取工藝進行優(yōu)化,最佳工藝條件為提取時間92 min、乙醇濃度74%、提取溫度48 ℃、料液比1∶10 (w/v)。在此優(yōu)化條件下實際測定的黃酮提取率可達到(3.1125±0.2010) mg/g,與預(yù)測值3.1132 mg/g誤差小,可見該模型能準(zhǔn)確用于薰衣草殘渣中黃酮的提取,可靠性強。同時從總抗氧化能力、DPPH自由基清除能力、還原力和鐵離子螯合能力這4個方面考察了黃酮純化物的抗氧化能力,結(jié)果顯示出黃酮純化物具有較強的抗氧化能力,可將薰衣草殘渣中的黃酮進行綜合開發(fā)利用,應(yīng)用于食品配料工業(yè)、化妝品業(yè)。這不僅提升了薰衣草殘渣的附加值,同時還有助于減少資源浪費,減輕環(huán)境壓力。

[1]丁潔,余國新. 伊犁薰衣草產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀,問題與對策建議——基于對伊犁薰衣草的研究為例[J]. 中國管理信息化,2014(2):46-47.

[2]胡星麟. 薰衣草精油品質(zhì)評價及雜花薰衣草精油蒸餾殘渣化學(xué)成分的研究[D]. 南京:南京師范大學(xué),2014.

[3]任雪艷,梁卓,王慧敏,等. 薰衣草精油對櫻桃番茄采后黑斑病的抑制活性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2014,30(5):1015-1020.

[4]符繼紅,唐軍,廖享,等. 基于抑菌活性成分的薰衣草精油組效關(guān)系研究[J]. 質(zhì)譜學(xué)報,2015,36(5):403-410.

[5]Jiang S,Liu Q,Xie Y,et al. Separation of five flavonoids from tartary buckwheat(Fagopyrumtataricum(L.)Gaertn)grains via off-line two dimensional high-speed counter-current chromatography[J]. Food Chemistry,2015,186:153-159.

[6]Li H,Zhang Y,Liu Q,et al. Preparative separation of phenolic compounds from Chimonanthus praecox flowers by high-speed counter-current chromatography using a stepwise elution mode[J]. Molecules,2016,21(8):1016.

[7]Jin C,Wei X,Yang S,et al. Microwave-assisted Extraction and Antioxidant Activity of Flavonoids from Sedum aizoon Leaves[J]. Food Science and Technology Research,2017,23(1):111-118.

[8]李紫薇,張藝,歐陽艷,等. 薰衣草葉子化學(xué)成分分析與抗氧化活性[J]. 廣州化工,2016,44(10):64-66.

[9]李珍.蘋果皮渣黃酮提取、純化及抗氧化活性研究[D].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué),2014:31-34.

[10]Annapandian V M,Rajagopal S S. Phytochemical Evaluation andInvitroAntioxidant Activity of Various Solvent Extracts of Leucas aspera(Willd.)Link Leaves[J]. Free Radicals & Antioxidants,2017,7(2).

[11]Xie J H,Dong C,Nie S P,et al. Extraction,chemical composition and antioxidant activity of flavonoids fromCyclocaryapaliurus(Batal.)Iljinskaja leaves[J]. Food Chemistry,2015,186:97-105.

[12]Wu P,Ma G,Li N,et al. Investigation ofinvitroandinvivoantioxidant activities of flavonoids rich extract from the berries ofRhodomyrtustomentosa(Ait.)Hassk[J]. Food Chemistry,2015,173:194-202.

[13]Boonsong S,Klaypradit W,Wilaipun P. Antioxidant activities of extracts from five edible mushrooms using different extractants[J]. Agriculture and Natural Resources,2016,50(2):89-97.

[14]侯學(xué)敏,李林霞,張直峰,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化薄荷葉總黃酮提取工藝及抗氧化活性[J]. 食品科學(xué),2013,34(6):124-128.

[15]胡衛(wèi)成,王新風(fēng),沈婷,等. 響應(yīng)面實驗優(yōu)化蓮蓬殼總黃酮超聲提取條件及其抗氧化活性[J]. 食品科學(xué),2015,36(24):51-56.

[16]吳現(xiàn)芳,趙成愛,余梅燕,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化八寶景天葉總黃酮的超聲提取工藝[J]. 食品工業(yè)科技,2013,34(1):224-228.

[17]張黎明,李瑞超,郝利民,等. 響應(yīng)面優(yōu)化瑪咖葉總黃酮提取工藝及其抗氧化活性研究[J]. 現(xiàn)代食品科技,2014,30(4):233-239.

[18]陳彩薇,吳暉,賴富饒,等. 米糠中不同存在形態(tài)酚類物質(zhì)的抗氧化活性研究[J]. 現(xiàn)代食品科技,2015,31(2):42-46.

[19]張曉茹,李星,王彬,等. 紅松松仁膜衣提取物體外抗氧化活性研究[J]. 食品工業(yè)科技,2016,6(1):26-30.

[20]鐘怡平,夏道宗,黃嵐,等. 蓮房多酚提取工藝優(yōu)化及其抗氧化活性研究[J]. 食品工業(yè)科技,2015,36(6):235-239.

[21]張靜.黃酮提取純化[D].無錫:江南大學(xué),2010:24-28.

[22]張明.幾種體外抗氧化檢測方法的評價研究[D].西安:陜西師范大學(xué),2010.

[23]鄭義,邵穎,陳安徽,等. 益智仁總黃酮超聲輔助提取工藝優(yōu)化及其抗氧化活性[J]. 食品科學(xué),2014,35(6):44-49.