體外評估十株乳桿菌對免疫細(xì)胞活性的影響

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(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實驗室,黑龍江哈爾濱 150030)

乳酸菌是一種能夠發(fā)酵糖類產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的統(tǒng)稱[1],是人體腸道中最重要的益生菌,它們對維持人體腸道環(huán)境的微生態(tài)平衡和提高機(jī)體免疫力起著關(guān)鍵作用[2-5]。乳酸菌表面存在肽聚糖、脂磷壁酸、表層蛋白和其他細(xì)胞壁相關(guān)多糖[6-7],另外,乳酸菌可以向胞外分泌具有免疫調(diào)節(jié)作用的物質(zhì),如胞外多糖和分泌蛋白。這些表面成分可以參與免疫調(diào)節(jié)或直接引起免疫應(yīng)答[8-10]。因此,通過實驗篩選出具有較高免疫活性的乳酸菌,能夠為開發(fā)新的微生物資源提供理論支撐。

采用動物實驗的方法可以篩選出具有免疫活性的乳酸菌[11-12],但因其周期較長、耗費(fèi)較大,實際運(yùn)用效率不高。而細(xì)胞模型能夠彌補(bǔ)動物模型的上述不足,可以較快篩選出具有功能性成分的乳酸菌。免疫細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,是機(jī)體發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的主要來源,細(xì)胞免疫功能主要是通過免疫細(xì)胞本身及其分泌出的細(xì)胞因子和抗體來完成的[13]。脾淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是機(jī)體主要的免疫細(xì)胞,脾淋巴細(xì)胞增殖活性的高低在評價細(xì)胞免疫功能強(qiáng)弱中具有重要意義[14],巨噬細(xì)胞在機(jī)體非特異性和特異性免疫功能中扮演著重要角色,具有吞噬、殺傷、遞呈抗原,分泌生物活性物質(zhì)以及抑制腫瘤等多種功能[15-18]。因此通過研究乳酸菌與脾淋巴細(xì)胞、乳酸菌與巨噬細(xì)胞的體外相互作用,可以篩選出具備較高免疫活性的乳酸菌。

本實驗從脾淋巴細(xì)胞體外增殖、巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力和巨噬細(xì)胞能量代謝水平三方面來評價十株乳酸菌對免疫細(xì)胞功能和代謝的影響,以獲得具有良好調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活性的乳桿菌,為研究益生菌調(diào)節(jié)免疫機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

鼠李糖乳桿菌(KLDS 1.0205、KLDS 1.0911、KLDS 1.0912)、植物乳桿菌(KLDS 1.0386、KLDS 1.0344、KLDS 1.0317、KLDS 1.0318)、嗜酸乳桿菌(KLDS 1.1003)、瑞士乳桿菌(KLDS 1.0903)、副干酪乳桿菌(KLDS 1.0351) 均由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實驗室從內(nèi)蒙古傳統(tǒng)乳制品中分離純化并保藏；BALB/c小鼠,雌性,清潔級,6～8周齡 北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司；鼠房保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度(23±2) ℃,每天人工燈光照明12 h,標(biāo)準(zhǔn)小鼠飼料喂養(yǎng),自由飲用蒸餾水；Man-Rogosa-Sharp(MRS)培養(yǎng)基。具體配制方法參照文獻(xiàn)[19]；RPMI-1640培養(yǎng)液 美國Hyclone公司;胎牛血清 Vitrocell公司;刀豆蛋白(ConA)、臺盼藍(lán)染色液、中性紅染色液、紅細(xì)胞裂解液、Hank’s液 Solarbio公司;CCK-8 日本同仁化學(xué)研究所;蛋白胨、酵母粉、牛肉膏、葡萄糖等均為生化分析純。

DHP-9272型電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司;LDZF-50KB-II立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠;HF90型CO2培養(yǎng)箱 香港力康發(fā)展有限公司;Model 680型酶標(biāo)儀 美國Beckman公司;PL2002型及AL104型電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;20～200、100～1000 μL可調(diào)定量移液槍 德國Eppendorf公司;96孔培養(yǎng)板 美國NEST公司;AE-30倒置生物顯微鏡 麥克奧迪實業(yè)集團(tuán)有限公司;VD-1320型潔凈工作臺 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司;LD4-2型低速離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠。

1.2實驗方法

1.2.1 菌懸液的制備 將實驗菌株以2%的接種量接種至MRS培養(yǎng)基中,37 ℃培養(yǎng)至生長穩(wěn)定期(16 h),將菌液在4 ℃條件下3000 r/min離心10 min后,用無菌0.01 mol/L、pH7.4的PBS重懸菌沉淀,重復(fù)兩次,棄去上清液,用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液重懸菌沉淀,調(diào)整各菌株的菌懸液濃度為108CFU/mL,4 ℃冷藏備用[20]。

1.2.2 小鼠脾淋巴細(xì)胞的制備 固定小鼠,摘眼球放血,頸椎脫臼處死小鼠后,將其放入盛有75%乙醇的燒杯中浸泡3～5 min,在超凈臺上沿腹腔中線剪開小鼠胸腔,無菌取出脾臟,將其置于200目不銹鋼網(wǎng)篩,網(wǎng)篩中央浸沒于盛有Hank’s液的平皿中,用無菌注射器芯研磨脾臟組織,用Hank’s液把網(wǎng)上剩余組織吹洗掉,收集脾臟組織懸液于無菌離心管中,1000 r/min離心5 min,棄去上清液,加入2～3 mL紅細(xì)胞裂解液到洗過的細(xì)胞中,混勻后靜置2～3 min,待紅細(xì)胞完全破碎,再以1000 r/min離心5 min后棄上清液,以除去血紅細(xì)胞,再用RPMI-1640不完全培養(yǎng)基離心洗滌細(xì)胞2次。收集細(xì)胞,含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,細(xì)胞懸液用臺盼藍(lán)染色后,血球計數(shù)板計數(shù),確保活細(xì)胞比例不小于95%,計數(shù)后用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基調(diào)整脾細(xì)胞濃度為1×106個/mL備用[21]。

1.2.3 乳酸菌體外對脾淋巴細(xì)胞增殖的影響 在無菌96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,設(shè)空白調(diào)零組(只加培養(yǎng)液200 μL/孔)、陰性對照組(終濃度為1×106個/mL的淋巴細(xì)胞懸液180 μL/孔,20 μL培養(yǎng)液/孔)、陽性對照組(淋巴細(xì)胞懸液180 μL/孔和20 μL/孔終濃度為5 μg/mL的ConA)、乳酸菌對照組(培養(yǎng)液180 μL/孔和20 μL/孔終濃度為107CFU/mL以及108CFU/mL的待測菌懸液)、實驗組(加淋巴細(xì)胞懸液180 μL/孔,20 μL/孔終濃度為107CFU/mL和108CFU/mL待測菌懸液,即使不同乳酸菌與細(xì)胞以10∶1、100∶1比例共同培養(yǎng))[22-23]。所有實驗均重復(fù)3次。加樣混勻后,置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)48 h后,加入新鮮配制成CCK-8溶液20 μL/孔,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,振蕩混勻,然后用酶標(biāo)儀在450 nm波長處測定光密度值,根據(jù)下列公式計算脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值和脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)。

脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值=OD1-OD2

式(1)

式中:OD1為實驗組OD值;OD2為陰性對照組OD值。

式(2)

式中:OD1為實驗組OD值;OD2為陽性對照組OD值;OD3為乳酸菌OD值;PI>1時提示促進(jìn)增殖;PI<1時提示抑制增殖。

1.2.4 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力測定 腹腔巨噬細(xì)胞的制備[24-25]:小鼠眼球放血,頸椎脫白處死后,置于75%乙醇溶液中浸泡5 min以消毒皮膚,暴露出腹膜壁,酒精擦洗腹部后,用無菌注射器抽10 mL Hank’s液,注入腹腔中,輕柔敲打2 min,使腹腔巨噬細(xì)胞盡可能多地懸浮在液體中;另取一支注射器抽出腹腔懸液,收集于無菌離心管中,1000 r/min離心5 min,棄上清液;用RPMI-1640完全培養(yǎng)液吹打細(xì)胞使其成為單細(xì)胞懸液,血球計數(shù)板計數(shù),確?；罴?xì)胞比例不小于95%,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個/mL用于實驗。

巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力測定[20]:將巨噬細(xì)胞接種于96孔板(100 μL/孔),細(xì)胞在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h,棄去上清液,貼壁細(xì)胞即為巨噬細(xì)胞。在每孔重新加入含10%血清的RPMI-1640培養(yǎng)液和終濃度分別為107CFU/mL和108CFU/mL的菌懸液各100 μL,使不同乳酸菌與細(xì)胞以10∶1、100∶1比例共同孵育,對照組加等體積的無菌水。細(xì)胞在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,棄去上清液,加入0.1%中性紅染色液100 μL/孔,繼續(xù)培養(yǎng)30 min,棄去中性紅染色液,用PBS清洗3次以除去未被吞噬的中性紅溶液,之后加入200 μL/孔細(xì)胞裂解液(冰醋酸∶無水乙醇=1∶1,v/v),繼續(xù)培養(yǎng)2 h,振蕩混勻,用酶標(biāo)儀在540 nm處測定吸光值。

1.2.5 腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平的測定 將巨噬細(xì)胞接種于96孔板(100 μL/孔),細(xì)胞在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h,棄去上清液,貼壁細(xì)胞即為巨噬細(xì)胞。在每孔重新加入含10%的血清RPMI-1640培養(yǎng)液100 μL,再加入100 μL含不同乳酸菌的菌懸液RPMI-1640完全培養(yǎng)液,使菌懸液終濃度分別為107～108CFU/mL。細(xì)胞在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,加入20 μL/孔CCK-8溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,振蕩混勻;然后在酶標(biāo)儀上450 nm處測定各孔吸光值。結(jié)果以O(shè)D 值表示腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平[24]。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計

所有實驗均進(jìn)行3次重復(fù)實驗,采用Excel 2007軟件處理實驗數(shù)據(jù)及制圖,并用統(tǒng)計軟件包SPSS 22對實驗結(jié)果進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1十株乳桿菌對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

2.1.1 十株乳桿菌對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值的影響 當(dāng)乳桿菌與細(xì)胞比例為1∶1時,乳桿菌的免疫效果較弱[22],所以本實驗將各乳桿菌與小鼠脾細(xì)胞的比例設(shè)置為10∶1和100∶1。

淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值的高低可以直接反應(yīng)淋巴細(xì)胞活性的強(qiáng)弱,因此淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值可以作為測定T淋巴細(xì)胞免疫功能的關(guān)鍵指標(biāo)之一[23]。由圖1可知,隨著乳桿菌活菌數(shù)的增加,脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化值也隨之增大,表明十株乳桿菌對脾細(xì)胞的增殖具有劑量依賴性。乳桿菌與脾細(xì)胞的比例為10∶1和100∶1時,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值均高于陽性對照組且差異顯著(p<0.05)。組內(nèi)比較結(jié)果表明,當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)與細(xì)胞的比例為10∶1時,植物乳桿菌KLDS 1.0344和KLDS 1.0318的增殖效果顯著高于其他菌株(p<0.05),當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)與細(xì)胞的比例為100∶1時,各組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值均有所增加,但以植物乳桿菌KLDS 1.0318的增殖效果最好。

圖1 十株乳桿菌對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值的影響Fig.1 Effect of ten lactobacillus strains on the transformation of spleen lymphocytes in mice注:不同小寫字母代表各菌株差異性不同(p<0.05),字母相同代表無差異(p>0.05)，圖2～圖4同。

圖2 十株乳桿菌對脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)的影響Fig.2 Effect of ten lactobacillus strains on proliferation index(PI)of spleen lymphocytes

2.1.2 十株乳桿菌對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)的影響 由圖2中數(shù)據(jù)可以看出:當(dāng)各乳桿菌與脾細(xì)胞以100∶1的比例共同孵育時,除鼠李糖乳桿菌KLDS 1.0912和副干酪乳桿菌KLDS 1.0351外,其它乳桿菌的增殖指數(shù)均大于1,即能直接促使脾淋巴細(xì)胞的增殖,從而可以提高機(jī)體脾淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答能力。當(dāng)不同乳桿菌與脾細(xì)胞的比例為10∶1時,除了植物乳桿菌KLDS 1.0318外,其它菌株的PI值均小于1,說明植物乳桿菌KLDS 1.0318具有更好提高脾淋巴細(xì)胞增殖的能力。

2.2十株乳桿菌對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力的影響

本研究采用巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的方法,評估十株乳桿菌對巨噬細(xì)胞吞噬作用的影響,結(jié)果如圖3所示。由圖中數(shù)據(jù)可以看出:當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)與細(xì)胞的比例為10∶1時,十株乳桿菌均可以明顯提高巨噬細(xì)胞的吞噬作用(p<0.05)。當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)與細(xì)胞以100∶1的比例共同孵育時,巨噬細(xì)胞的吞噬作用比10∶1時增強(qiáng)，且植物乳桿菌KLDS 1.0318對于巨噬細(xì)胞吞噬中心紅能力的誘導(dǎo)作用最強(qiáng),說明該菌株能夠增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活性,從而可以參與到機(jī)體非特異性免疫反應(yīng)當(dāng)中。

圖3 十株乳桿菌對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力的影響Fig.3 Effect of ten lactobacillus strains on phagocytosis of neutral red in abdominal macrophages of mice

圖4 十株乳桿菌對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平的影響Fig.4 Effect of ten lactobacillus strains on energy metabolism of abdominal macrophages in mice

2.3十株乳桿菌對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平的影響

由圖4數(shù)據(jù)結(jié)果表明,相較于空白組,十株乳桿菌的兩個劑量組對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平均有不同程度的提高,且差異顯著(p<0.05)。當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)與細(xì)胞的比例為10∶1時,植物乳桿菌KLDS 1.0318對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平的影響最明顯。當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)與細(xì)胞的比例為100∶1時,各組巨噬細(xì)胞能量代謝水平隨活菌數(shù)的增加均有不同程度的增加。

3 討論

3.1乳酸菌對免疫細(xì)胞活性的影響

因為動物實驗周期長、耗費(fèi)大,所以采用動物實驗篩選具有免疫活性的乳酸菌效率不高[12]。免疫細(xì)胞是參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞等。根據(jù)淋巴細(xì)胞的發(fā)育部位、表面、抗原、受體及功能等不同,可將淋巴細(xì)胞分為T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)和殺傷細(xì)胞(K細(xì)胞)。脾臟是T淋巴細(xì)胞定居繁殖、接受抗原激活,產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞行使免疫功能的重要場所[24]。T淋巴細(xì)胞參與細(xì)胞免疫包括直接與靶細(xì)胞特異性結(jié)合破壞細(xì)胞膜殺傷靶細(xì)胞和釋放淋巴因子使免疫效應(yīng)擴(kuò)大兩種方式,淋巴細(xì)胞增殖實驗是檢測淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)的有效方法之一[27-28]。王婷婷等[29]研究了三株乳桿菌對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果表明瑞士乳桿菌KLDS 1.8701對脾淋巴細(xì)胞的增殖效果最好。本實驗利用CCK-8法測定乳桿菌對T淋巴細(xì)胞增殖活性的影響,結(jié)果表明,十株乳桿菌均可以不同程度提高T淋巴細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)化能力,其中植物乳桿菌KLDS 1.0318對脾淋巴的調(diào)節(jié)活性最高,說明了乳桿菌可以改變T淋巴細(xì)胞活性,誘導(dǎo)其增殖和分化,從而增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。單核吞噬細(xì)胞包括分散在全身各器官組織中的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞及幼稚單核細(xì)胞。單核細(xì)胞由骨髓中的單核細(xì)胞前體發(fā)育分化而成,在血液中停留12～24 h,然后進(jìn)入結(jié)締組織發(fā)育成熟為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞表面有較多的MHCII類分子,MHCII類分子可以反應(yīng)細(xì)胞外部情況,如果組織中有細(xì)菌侵入,巨噬細(xì)胞進(jìn)行吞食后,通過MHC提示把細(xì)菌碎片給輔助T細(xì)胞,啟動機(jī)體免疫反應(yīng)。巨噬細(xì)胞表面還有MHCI類分子,MHCI類分子可以提供細(xì)胞內(nèi)狀況,當(dāng)細(xì)胞遭受病毒感染,病毒外膜碎片的氨基酸鏈透過MHC提示,可以提供殺手CD8+T細(xì)胞等辨識,以進(jìn)行撲殺[30]。通常情況下,巨噬細(xì)胞處于休眠狀態(tài),吞噬作用不強(qiáng)。但巨噬細(xì)胞被免疫增強(qiáng)劑激活后,可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長、增強(qiáng)吞噬作用和胞飲作用[31]。有研究表明巨噬細(xì)胞參與機(jī)體先天免疫反應(yīng),它和中性粒細(xì)胞作為宿主防御的第一道防線,在宿主防止微生物入侵中發(fā)揮重要作用[32]。本研究通過巨噬細(xì)胞吞噬中性紅實驗得出十株乳桿菌均可以明顯提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力。此外,本研究還利用CCK-8法測定乳桿菌對巨噬細(xì)胞能量代謝水平的影響,結(jié)果顯示十株乳桿菌均可以不同程度刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平的提高,其中植物乳桿菌KLDS 1.0318對于提高巨噬細(xì)胞吞噬活性顯著高于其余菌株。

3.2乳酸菌劑量的選擇

調(diào)節(jié)免疫活性需要的乳酸菌濃度一直備受關(guān)注。李艾黎[22]等將乳桿菌的劑量調(diào)整至高、中、低三個濃度,發(fā)現(xiàn)不論是活性乳桿菌還是熱致死乳桿菌,其對小鼠脾臟細(xì)胞的增殖作用都隨菌濃度的增加而提高,表現(xiàn)出劑量依賴性?；钚院蜔嶂滤廊闂U菌劑量為107CFU/mL(即細(xì)菌與細(xì)胞的比例為10∶1)的效果最為明顯(p<0.05),且活菌制劑的免疫調(diào)節(jié)作用優(yōu)于熱致死菌體(p<0.05)。而本實驗將細(xì)菌與細(xì)胞的比例提高到了100∶1,結(jié)果表明了在此條件下,十株乳桿菌對脾淋巴細(xì)胞增殖活性作用和對巨噬細(xì)胞吞噬作用以及對巨噬細(xì)胞能量代謝水平的影響相較于細(xì)菌與細(xì)胞的比例為10∶1條件下能夠更好表現(xiàn)出菌株差異性,但具體的有效劑量可能會因為多種因素的影響而存在較大差異,包括菌種差異、菌的活性、個體差異、生理特性、其他膳食因素等,因此尚待進(jìn)一步的研究。

3.3乳酸菌免疫調(diào)節(jié)活性成分

乳酸菌表面有肽聚糖、胞壁磷壁酸、脂磷壁酸、表層蛋白以及細(xì)胞壁相關(guān)多糖。此外,乳酸菌還可以向細(xì)胞外分泌一些具有免疫調(diào)節(jié)活性的物質(zhì),如胞外多糖和其他分泌蛋白[33]。這些表面成分參與免疫調(diào)節(jié)或直接引起免疫應(yīng)答,因而構(gòu)成了乳桿菌發(fā)揮益生功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。多糖類的成分可以激活巨噬細(xì)胞,增強(qiáng)其吞噬功能,分泌細(xì)胞因子,幫助機(jī)體抵抗病原菌與病毒的感染[34]。另外,乳酸菌的免疫調(diào)節(jié)活性具有一定的菌株特異性。Kimoto等[35]研究了16株乳酸乳球菌的免疫調(diào)節(jié)活性,其中有6株球菌能誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生IL-12、IL-6和TNF-α。RYU等[36]認(rèn)為革蘭氏陽性菌免疫刺激作用強(qiáng)弱的差別在于其細(xì)胞壁上的脂磷壁酸結(jié)構(gòu)不同,因此造成了對TOLL樣受體的激活能力有差異。也有人認(rèn)為是乳酸菌細(xì)胞壁表面其他成分,如疏水性、表層蛋白、胞外多糖等對免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮著關(guān)鍵作用[37]。本研究以完整菌體與免疫細(xì)胞共同孵育,結(jié)果顯示在細(xì)菌與細(xì)胞的比例為100∶1條件下,十株乳桿菌對小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖具有不同程度的促進(jìn)作用,同時增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞吞噬活性及其能量代謝水平,其中植物乳桿菌KLDS 1.0318的免疫調(diào)節(jié)活性最高,說明該菌具有調(diào)節(jié)動物機(jī)體免疫功能的潛力。但具體的有效成分及其對免疫細(xì)胞因子的影響還有待研究。

4 結(jié)論

十株乳桿菌均可以在不同程度上誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖,其中植物乳桿菌KLDS 1.0318對脾淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)活性較高,在乳桿菌活菌數(shù)為107CFU/mL和108CFU/mL時,其增殖指數(shù)均大于1,顯著高于其余菌株,表現(xiàn)出更強(qiáng)的刺激增殖作用。十株乳桿菌均可在一定程度上提高巨噬細(xì)胞活性,當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)為108CFU/mL時,十株乳桿菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力與空白對照組有顯著性差異(p<0.05),表明它們能夠顯著提高巨噬細(xì)胞吞噬能力。當(dāng)乳桿菌活菌數(shù)為107CFU/mL和108CFU/mL時,相較于空白對照組,十株乳桿菌均可以刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能量代謝水平的提高,且差異顯著(p<0.05)。其中植物乳桿菌KLDS 1.0318表現(xiàn)出了較強(qiáng)的調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性的能力。

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