電針對(duì)帕金森病模型大鼠黑質(zhì)內(nèi)Bip、CHOP蛋白表達(dá)的影響

馬駿,王中明,王述菊,余沛豪,王彬,王琪

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電針對(duì)帕金森病模型大鼠黑質(zhì)內(nèi)Bip、CHOP蛋白表達(dá)的影響

馬駿,王中明,王述菊,余沛豪,王彬,王琪

(湖北中醫(yī)藥大學(xué),武漢 430065)

觀察電針對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的帕金森病(PD)模型大鼠黑質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。將120只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分正常組、假手術(shù)組、模型組、電針預(yù)治療組、電針治療7 d組、電針治療14 d組、電針治療21 d組、電針治療28 d組,每組15只,采用頸背部皮下注射魚藤酮法制備PD模型,假手術(shù)組只注射不含魚藤酮的等量葵花油乳化液。正常組、假手術(shù)組、模型組不做任何治療;電針治療組在造模完成后選取風(fēng)府、太沖穴給予電針治療;電針預(yù)治療組電針治療7 d后再造模。運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)大鼠黑質(zhì)內(nèi)TH、a-syn的陽性表達(dá),并用Western blot法檢測(cè)大鼠中腦黑質(zhì)區(qū)內(nèi)Bip、CHOP蛋白表達(dá)的變化。模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的PD癥候群特征,電針干預(yù)后大鼠行為學(xué)評(píng)分明顯降低(＜0.01);與正常組和假手術(shù)組相比,模型組大鼠黑質(zhì)區(qū)a-syn的陽性表達(dá)與Bip、CHOP蛋白的表達(dá)均顯著提高,大鼠黑質(zhì)區(qū)TH的陽性表達(dá)均顯著降低 (＜0.01);與模型組相比,電針治療各組大鼠黑質(zhì)區(qū)a-syn的陽性表達(dá)以及Bip、CHOP蛋白的表達(dá)均顯著降低 (＜0.01),大鼠黑質(zhì)區(qū)TH的陽性表達(dá)顯著提高(＜0.01)。電針防治PD的機(jī)制可能與電針能明顯抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá),保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元有關(guān)。

針刺療法;帕金森病;電針;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白;CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白;大鼠

帕金森病(Parkinson’s disease, PD),又稱震顫麻痹,是中老年常見的一種以黑質(zhì)紋狀體通路功能減退為主要特征的神經(jīng)退行性疾病,其主要的臨床癥狀為肌肉僵直、四肢震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩以及步態(tài)不穩(wěn)。病理表現(xiàn)為黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺神經(jīng)元變性壞死伴胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體--路易小體(1ewy body, LB)的形成路易小體的主要成分是a-突觸核蛋白(a-synuclein,a-syn)[1-2]。a-syn異常聚集可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。PD的發(fā)病原因尚未完全明了,相關(guān)研究表明,氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、泛素蛋白酶系統(tǒng)損傷、異常蛋白沉積等均與PD發(fā)病有關(guān)。內(nèi)質(zhì)應(yīng)激是細(xì)胞凋亡的重要途徑之一,相關(guān)研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在PD發(fā)病過程起重要作用[3]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(binding immunoglobulin heavy chain protein, Bip)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer- binding protein homologous protein, CHOP)是ERS的兩個(gè)經(jīng)典標(biāo)志物,GRP78表達(dá)上調(diào)可減輕ER蛋白負(fù)荷,對(duì)細(xì)胞起保護(hù)作用,而CHOP表達(dá)上調(diào)則激活細(xì)胞死亡,啟動(dòng)細(xì)胞凋亡途徑[4-5]。本研究通過觀察電針對(duì)PD模型大鼠Bip及凋亡因子CHOP的影響,探討電針治療PD的可能作用機(jī)制,旨在為PD發(fā)病機(jī)制及治療靶點(diǎn)研究提供一定的理論基礎(chǔ),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)健康雄性SD大鼠120只,體重(180±20)g,由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)[SCXK(鄂)2014-0004]。所有動(dòng)物均在通風(fēng)良好的條件下分籠飼養(yǎng),自由攝食及飲水。隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、電針預(yù)治療組、電針治療7 d組、電針治療14 d組、電針治療21 d組、電針治療28 d組,每組15只。

1.2 主要試劑及儀器

魚藤酮、葵花油(購于Sigma公司);兔抗Bip(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司,11587-1-AP);兔抗CHOP(santa cruz,sc-575);顯影定影試劑盒(武漢巴菲爾生物技術(shù)有限公司);丙烯酰胺(Amresco公司);電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司,CPA);電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);微量移液器(北京六一儀器廠,DYY-7C);垂直電泳槽(北京六一儀器廠,DYCZ-24DN);電轉(zhuǎn)儀(北京六一儀器廠,DYCZ-40);水平搖床(江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司,TS-1);X光膠片(柯達(dá),XBT-1);0.30 mm×13 mm不銹鋼毫針(北京中研太和醫(yī)療器械有限公司);G6805電針治療儀(青島鑫升實(shí)業(yè)有限公司)。

1.3 動(dòng)物模型制備及鑒定

所有大鼠適應(yīng)環(huán)境1星期后,采用頸背部皮下注射魚藤酮法制備PD大鼠模型[6-7],模型組和電針治療組給予魚藤酮(2 mg/kg,溶解于葵花油,濃度2 mg/mL)頸背部皮下注射,每日1次,連續(xù)28 d;正常組不做任何處理;假手術(shù)組方法同模型組,但只注射不含魚藤酮的等量葵花油乳化液(溶劑);電針預(yù)治療組先對(duì)正常大鼠電針治療7 d,然后造模。

造模后觀察大鼠的行為學(xué)改變,參照陳忻等[8]的行為學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),對(duì)各組大鼠進(jìn)行評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下,1分為大鼠出現(xiàn)拒捕行為減弱、弓背、豎毛、毛發(fā)變黃變臟、主動(dòng)活動(dòng)減少;2分為有1分的表現(xiàn),且主動(dòng)活動(dòng)減少更加明顯,并伴有震顫、動(dòng)作遲緩、或有步態(tài)不穩(wěn);4分為有2分的表現(xiàn),且步態(tài)不穩(wěn),或不能直線行走、或行走時(shí)向一側(cè)旋轉(zhuǎn);6分為向單側(cè)斜臥,單側(cè)前肢或后肢癱瘓,行走困難,進(jìn)食困難;8分為單側(cè)肢體(前肢或后肢)完全癱瘓,四肢拘攣,體重大幅減輕,不能進(jìn)食;10分為瀕死狀態(tài)或死亡。本研究在行為學(xué)評(píng)分達(dá)2～8分的大鼠中隨機(jī)抽取6只大鼠以TH免疫組織化學(xué)技術(shù)作組織學(xué)鑒定。

1.4 電針干預(yù)方法

大鼠造模成功后,給電針治療各組大鼠穿上自制的鼠衣固定,參照余曙光等[9]主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》中大鼠常用的針灸穴位,取風(fēng)府、太沖穴進(jìn)行電針治療。用0.30 mm×13 mm不銹鋼針灸針,進(jìn)針約4 mm,然后接G6805電針治療儀,正極接風(fēng)府穴,負(fù)極接太沖穴,采用連續(xù)波,刺激強(qiáng)度以大鼠腿部輕微抽動(dòng)為度。每只大鼠治療20 min,每日1次。正常組、假手術(shù)組、模型組大鼠每日在相同時(shí)間抓取固定,但不給予電針治療,各組動(dòng)物同步喂養(yǎng)。

1.5 標(biāo)本采集

造模完成后,排除死亡、行為學(xué)評(píng)分不合格(評(píng)分＜2分或＞8分)的大鼠,每組均有12只納入標(biāo)本采集。將大鼠稱重后用10%水合氯醛行腹腔注射麻醉,劑量為0.2 mL/100 g。各組大鼠隨機(jī)選取6只行左心室多聚甲醛做內(nèi)固定,取大鼠中腦黑質(zhì)部組織塊,并用4%多聚甲醛固定過夜,作石蠟包埋切片,用于形態(tài)學(xué)觀察。另外6只大鼠待其完全麻醉后快速斷頭,于冰面上迅速取出腦組織并分離出中腦黑質(zhì)組塊,將分離的黑質(zhì)組塊用錫紙包裹放入液氮中速凍,然后取出組織放置在凍存管中于-80℃冰箱中保存,以備檢測(cè)。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 黑質(zhì)TH、a-syn的陽性表達(dá)

采用免疫組化法檢測(cè)黑質(zhì)TH、a-syn的陽性表達(dá)。將上述切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟處理,切片依次放入二甲苯Ⅰ-二甲苯Ⅱ-無水乙醇Ⅰ-無水乙醇Ⅱ-95%乙醇-90%乙醇-80%乙醇-70%乙醇,然后入蒸餾水浸泡2 min。采用微波進(jìn)行抗原修復(fù);用蒸餾水新鮮配置的3%H2O2滴加于切片組織上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,PBS沖洗3次,每次3 min;加一抗于4℃濕盒中孵育過夜;加二抗,37℃孵育20 min,PBS沖洗切片3次,每次3 min;加DAB顯色液,Harris蘇木素復(fù)染,然后脫水,封片,在顯微鏡下觀察,采集圖像。

1.6.2 BIP、CHOP蛋白的表達(dá)

采用免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)BIP、CHOP蛋白的表達(dá)。取-80℃冰箱中冷凍保存的黑質(zhì)組塊,加入RIPA裂解液勻漿5 min,于4℃溫度下,轉(zhuǎn)速12000 r/min,離心30 min后,取上清液。用Bradford法測(cè)定蛋白濃度后,各個(gè)待檢測(cè)樣品取50mg的總蛋白,上樣后PAGE凝膠電泳,根據(jù)各待檢樣品分子量的不同,BIP用8%的PAGE膠,CHOP用10%的PAGE膠。轉(zhuǎn)膜(濕轉(zhuǎn)法),轉(zhuǎn)膜條件,BIP采用200 mA,120 min; CHOP采用300 mA,150 min。封閉用含5% 脫脂奶粉的TBST(封閉液)浸泡PVDF膜,室溫?fù)u床封閉2 h。用封閉液稀釋相應(yīng)的一抗(BIP采用1:300稀釋,CHOP采用1:200稀釋),使PVDF膜浸泡于一抗孵育液中,4℃孵育過夜。然后孵育二抗,用封閉液稀釋相應(yīng)的HRP標(biāo)記二抗(1:50000稀釋),使PVDF膜浸泡于二抗孵育液中,室溫?fù)u床孵育2 h。顯色曝光,TBST充分洗滌PVDF膜5～6次,每次5 min。每張膜滴加適量的ECL底物液,孵育數(shù)分鐘。待熒光帶明顯后,用濾紙吸去多余的底物液,覆上保鮮膜,X光膠片壓片后依次放入顯影液顯影、定影液定影。采用BandScan軟件對(duì)目標(biāo)圖像進(jìn)行灰度分析,得出BIP、CHOP與b-action的相對(duì)吸光度值,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用-分析,繼用-檢驗(yàn)。以＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠行為學(xué)評(píng)分比較

表1 各組大鼠行為學(xué)評(píng)分比較 (±s,分)

注:與正常組、假手術(shù)組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01

造模完成后,排除死亡、行為學(xué)評(píng)分不合格(評(píng)分＜2分或＞8分)的大鼠,每組均有12只納入檢測(cè)統(tǒng)計(jì)。行為學(xué)評(píng)分結(jié)果顯示,模型組大鼠評(píng)分較正常組和假手術(shù)組明顯升高(＜0.01),電針治療組和電針預(yù)治療組大鼠評(píng)分較模型組顯著降低(＜0.01),提示經(jīng)魚藤酮造模后的PD大鼠模型可出現(xiàn)明顯的行為學(xué)改變,而通過電針干預(yù)能夠明顯改善其PD癥狀。詳見表1。

2.2 各組大鼠黑質(zhì)TH、a-syn平均光密度比較

使用IPP6.0軟件對(duì)免疫組化照片進(jìn)行光密度分析,每張切片選取3張400倍照片,計(jì)算其平均光密度進(jìn)行比較分析。結(jié)果顯示,與正常組和假手術(shù)相比,模型組大鼠黑質(zhì)區(qū)TH陽性表達(dá)顯著降低(＜0.01),a-syn陽性表達(dá)顯著升高(＜0.01);與模型組相比,電針預(yù)治療組和電針治療7 d、14 d、21 d、28 d組大鼠黑質(zhì)區(qū)TH陽性表達(dá)顯著升高(＜0.01),a-syn陽性表達(dá)顯著減少(＜0.01)。正常組和假手術(shù)組大鼠黑質(zhì)TH、a-syn陽性表達(dá)水平未見明顯差異(＞0.05)。詳見表2。

表2 各組大鼠黑質(zhì)內(nèi)TH、a-syn平均光密度比較 (±s)

注:與正常組、假手術(shù)組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01

2.3 各組大鼠黑質(zhì)內(nèi)BIP、CHOP蛋白表達(dá)比較

表3 各組大鼠黑質(zhì)內(nèi)BIP、CHOP蛋白表達(dá)比較 (±s)

注:與正常組、假手術(shù)組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01

注:1為正常組;2為假手術(shù)組;3為模型組;4為電針預(yù)治療組;5為電針治療7 d組;6為電針治療14 d組;7為電針治療 21 d組;8為電針治療28 d組

Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,模型組中腦黑質(zhì)BIP、CHOP蛋白表達(dá)較正常組和假手術(shù)組顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01)。與模型組相比,電針預(yù)治療組和電針治療7 d、14 d、21 d、28 d組BIP和CHOP蛋白表達(dá)水平顯著降低(＜0.01)。正常組和假手術(shù)組BIP、CHOP蛋白表達(dá)水平未見明顯差異(＞0.05)。詳見表3、圖1。

3 討論

帕金森病是中老年人常見的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,雖然目前PD的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,但大量研究結(jié)果表明PD是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果。其典型的病理特征是中腦黑質(zhì)致密部DA能神經(jīng)元的變性缺失與殘余神經(jīng)元內(nèi)嗜酸性包涵體LB的形成。TH是DA合成過程中的限速酶,其在黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)中的質(zhì)量與DA能神經(jīng)元密切相關(guān),因此TH可以反映DA能神經(jīng)元的狀況[10]。LB的主要成分是a-syn,研究發(fā)現(xiàn)黑質(zhì)神經(jīng)元中a-syn蛋白的聚集與沉淀參與了PD的病理過程[1]。正常情況下a-syn的存在形式是可溶性的,它可以經(jīng)過細(xì)胞自身的降解方式而清除,而PD患者黑質(zhì)神經(jīng)元中由于異常折疊或未折疊而聚集和沉淀的a-syn蛋白是不可溶的,因此也很難降解。這些異常的a-syn聚集過多時(shí)就會(huì)損壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài),引起ERS[2]。

BIP是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白,在輔助蛋白質(zhì)加工合成、調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)中扮演著重要的角色。在一般生理情況下,BIP與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白結(jié)合在一起,使它們處于失活狀態(tài)。當(dāng)各種因素誘發(fā)ERS時(shí),BIP便會(huì)與跨膜蛋解離優(yōu)先與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)集聚的錯(cuò)誤折疊蛋白或未折疊蛋白結(jié)合以幫助新合成蛋白的正確折疊,減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)負(fù)荷,試圖恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)。當(dāng)ERS過強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過長,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)無法恢復(fù)時(shí),細(xì)胞就會(huì)啟動(dòng)凋亡程序,促使細(xì)胞凋亡[4-5]。CHOP是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)促凋亡蛋白,在正常細(xì)胞中表達(dá)很低,但在ERS時(shí)被大量誘導(dǎo)表達(dá),激活細(xì)胞凋亡途徑[11-13]。CHOP廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞,其編碼的蛋白與多種細(xì)胞功能活動(dòng)(如增殖、分化、凋亡等)相關(guān)。Ji C等[14]通過灌喂乙醇實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),CHOP缺失型小鼠的肝細(xì)胞凋亡現(xiàn)象與野生型小鼠相比明顯減少,另外一些與凋亡相關(guān)的基因也出現(xiàn)了變化,如CHOP野生型小鼠中下調(diào)的Jun D與Bc-l xl和Gadd45的上調(diào)。所有這些都證明CHOP基因在ER應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中具有重要作用,通過檢測(cè) CHOP蛋白表達(dá)的變化可以直觀判斷細(xì)胞凋亡的程度。

PD屬中醫(yī)學(xué)“顫證”范疇,中醫(yī)學(xué)認(rèn)為此證為本虛標(biāo)實(shí)之證,以肝腎虧虛,髓海不足為本,實(shí)以風(fēng)、火、痰、瘀為標(biāo)。本病患者以中老年人居多,概因中老年患者年老體衰,肝腎不足,髓海空虛,不能濡養(yǎng)四肢所致。故“筋脈失養(yǎng),風(fēng)氣內(nèi)動(dòng)”是本病的基本病機(jī),治療宜采取滋補(bǔ)肝腎,填精益髓,柔肝舒筋,祛風(fēng)止顫之法。《素問·至真要大論》:“諸暴強(qiáng)直,皆屬于風(fēng)”“諸風(fēng)掉眩,皆屬于肝”。因此,本實(shí)驗(yàn)取風(fēng)府與太沖相伍。風(fēng)府歸屬督脈,為治療內(nèi)風(fēng)之要穴,誠如《行針指要賦》:“或針風(fēng),先向風(fēng)府?！鼻叶矫}為十二經(jīng)脈之海,總督一身陽氣,督脈從風(fēng)府穴處入屬于腦,故針刺風(fēng)府不僅可以直達(dá)病所,祛風(fēng)止顫,還有填精益髓之妙。太沖歸屬足厥陰肝經(jīng),為肝經(jīng)之原穴,自古肝腎同源,故針刺太沖可有滋補(bǔ)肝腎、柔肝舒筋之效。

現(xiàn)在西藥治療PD主要以左旋多巴類藥物為主,其短期療效明顯,但長期應(yīng)用不僅療效減弱,且毒副反應(yīng)明顯[15]。反觀針灸在改善PD的運(yùn)動(dòng)癥狀、延緩病情進(jìn)展、減輕藥物的毒副反應(yīng)、提高患者的生存質(zhì)量方面有一定的優(yōu)勢(shì)[16]。本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)電針可以保護(hù)PD模型大鼠中腦黑質(zhì)神經(jīng)元,抑制星型膠質(zhì)細(xì)胞的活化,改善泛素-蛋白酶體系統(tǒng)功能,減輕谷氨酸釋放引起的細(xì)胞毒作用,降低中腦黑質(zhì)區(qū)炎性介質(zhì)的表達(dá)[17-20]。本實(shí)驗(yàn)選用頸背部皮下注射魚藤酮的方法制作PD模型,由于該模型能夠選擇性地引起黑質(zhì)DA能神經(jīng)元變性死亡和復(fù)制胞質(zhì)內(nèi)路易小體,因而較之MPTP等模型更好地模擬了PD的行為和病理特征[21]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠黑質(zhì)內(nèi)a-syn陽性神經(jīng)元數(shù)量與BIP、CHOP蛋白的表達(dá)較正常組和假手術(shù)組顯著增高,TH陽性神經(jīng)元數(shù)量顯著降低,說明在PD的發(fā)病過程中存在ERS相關(guān)信號(hào)的激活,并引起了DA能神經(jīng)元的損傷。而在經(jīng)過電針干預(yù)后,黑質(zhì)內(nèi)a-syn陽性神經(jīng)元數(shù)量與BIP、CHOP蛋白的表達(dá)水平均顯著降低,TH陽性神經(jīng)元數(shù)量顯著提高,說明電針風(fēng)府、太沖穴可以有效抑制ERS相關(guān)蛋白的活性,保護(hù)DA能神經(jīng)元。因此,電針防治PD的機(jī)制可能與電針能明顯抑制ERS相關(guān)蛋白的表達(dá),保護(hù)DA能神經(jīng)元免于凋亡有關(guān)。

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Effect of Electroacupuncture on BiP and CHOP Expressions in the Substantia Nigra in a Rat Model of Parkinson Disease

,-,-,-,,.

,430065,

To investigate the effect of electroacupuncture on the expressions of endoplasmic reticulum stress-related proteins in the substantia nigra in a rat model of rotenone-induced Parkinson disease.One hundred and twenty healthy male SD rats were randomized to normal, sham operation, model, electroacupuncture pretreatment, and 7-day, 14-day, 21-day and 28-day electroacupuncture treatment groups, 15 rats each. A model of Parkinson disease was made by subcutaneous injection of rotenone in the nape. The sham operation group received an injection of equal volume of sunflower oil emulsion. The normal, sham operation and model groups were not treated. The electroacupuncture treatment group received electroacupuncture at points Fengfu (GV 16)and Taichong (LR 3) after model making. The electroacupuncture pretreatment group received model making after 7 days of electroacupuncture treatment. TH anda-syn positive cells expressions in rat substantia nigra were determined by immunohistochemical method. BiP and CHOP expressions in rat substantia nigra were examined by Western blotting.The model group rats had obvious syndrome characteristic of PD and rat behavior score decreased significantly after electroacupuncture intervention (＜0.01).a-syn positive cells expression and BiP and CHOP expressions in rat substantia nigra increased significantly and TH positive cells expression in rat substantia nigra decreased significantly in the model group compare with the normal and sham operation groups (＜0.01).a-syn positive cells expression and BiP and CHOP expressions in rat substantia nigra decreased significantly and TH positive cells expression in rat substantia nigra increased significantly in every electroacupuncture treatment group compare with the model group (＜0.01).The mechanism of electroacupuncture prevention and treatment of Parkinson disease may be related to its significant inhibition of the expressions of endoplasmic reticulum stress-related proteins and protection of dopaminergic neurons.

Acupuncture therapy; Parkinson disease; Electroacupuncture; Endoplasmic reticulum stress; Immunoglobulin heavy chain binding protein; CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein; Rats

1005-0957(2018)01-0086-06

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2018.01.0086

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81473788,81403456);湖北省武漢市科學(xué)技術(shù)局高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃項(xiàng)目(2014072704021262)

馬駿(1964—),女,教授,博士,研究方向?yàn)獒樉姆乐文X病及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究,Email:mj-1964@163.com

王述菊(1977－),女,教授,博士,研究方向?yàn)獒樉姆乐文X病及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究,Email:361786273@qq.com

2017-08-21