血清中4種天皰瘡抗體在天皰瘡診斷及鑒別診斷中的價(jià)值

李云珍，李 玲，劉 勇，姚少濠

廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣東廣州 510005

天皰瘡是一組累及皮膚和黏膜的自身免疫性表皮內(nèi)大皰病，不同類型的天皰瘡臨床癥狀相似，在鑒別診斷中較為困難。落葉型天皰瘡(PF)是一種皮膚系統(tǒng)自身免疫性發(fā)皰類疾病，臨床表現(xiàn)為松弛性小水泡和鱗狀痂皮糜爛，病理角度分析認(rèn)為是由于角化細(xì)胞喪失細(xì)胞黏附力而引起表皮內(nèi)水泡形成?；糚F的患者血清中可檢測出抗橋粒芯蛋白1(Dsg1)自身抗體IgG，這種抗體是PF中水泡形成的病原物質(zhì)。尋常型天皰瘡(PV)約60%的患者血清中也可檢測到Dsg1抗體IgG。PV是一種致命的皮膚和黏膜系統(tǒng)自身免疫性發(fā)皰類疾病，臨床表現(xiàn)為松弛性水泡和分布廣泛的疼痛性糜爛，病理角度分析認(rèn)為是由于角化細(xì)胞喪失細(xì)胞黏附力而引起表皮內(nèi)水泡形成?；糚V的患者血清中可檢測到Dsg3抗體IgG，這種抗體是PV中水泡形成的病原物質(zhì)。PF患者血清中則無Dsg3抗體IgG。大皰性類天皰瘡(BP)是一種慢性發(fā)癢的發(fā)皰類疾病，主要發(fā)病人群為老年人，表現(xiàn)為頻繁發(fā)作的緊張狀水泡和紅斑，此類患者血清中可檢測到IgG基底膜區(qū)域抗體，損傷部位基底膜區(qū)域可檢測到線性IgG或C3沉積。BP患者血清中自身抗體的靶抗原是BP180和BP230。本研究通過檢測疑為天皰瘡患者血清中Dsg1、Dsg3、BP180和BP230 4種自身抗體，探討4種天皰瘡抗體在天皰瘡診斷及鑒別診斷中的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本中心2018年6月至2020年7月臨床疑為“天皰瘡”的880例患者作為研究對(duì)象，其中男427例，女453例；年齡最小6 d，最大97歲，中位年齡58歲。采集所有患者血標(biāo)本對(duì)4種天皰瘡抗體(Dsg1抗體、Dsg3抗體、BP 180 抗體、BP 230 抗體)進(jìn)行檢測。

1.2儀器與試劑 儀器：瑞士TecanSunrise RC光吸收酶標(biāo)儀；試劑：日本MBL。

1.3方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血清中的抗體，把相關(guān)抗原固相化在微孔中，添加標(biāo)本，使之發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，洗滌后，添加酶標(biāo)記抗體(過氧化酶標(biāo)記抗人IgG多克隆抗體)，使之發(fā)生反應(yīng)，生成抗原-抗體-酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物。再次洗滌，添加底物并進(jìn)行孵育后加入終止液。利用酶標(biāo)儀讀取吸光度值，量化檢測結(jié)果。結(jié)果判定：Dsg1>20 U/mL為陽性，14～20 U/mL為不確定，<14 U/mL為陰性；Dsg3>20 U/mL為陽性,7～20 U/mL為不確定,<7 U/mL為陰性；BP 180、BP 230≥9 U/mL為陽性,<9 U/mL為陰性。結(jié)果判定陽性標(biāo)準(zhǔn)：Dsg1陽性符合PF的臨床診斷；Dsg1、Dsg3或Dsg3陽性符合PV的臨床診斷；BP 180、BP 230陽性符合BP的臨床診斷。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel表格計(jì)算陽性率，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1880例天皰瘡抗體標(biāo)本檢測結(jié)果及診斷類型占比比較 880例標(biāo)本中天皰瘡抗體陽性率為63.86%(562/880)。男性陽性率(62.06%)與女性陽性率(65.56%)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.279)。根據(jù)Dsg1、Dsg3、BP 180、BP 230抗體檢測結(jié)果，診斷類型為BP占30.23%(266/880)，PV占16.02%(141/880)，PF占11.02%(97/880)，PV+BP占3.64%(32/880)，PF+BP占2.95%(26/880)。天皰瘡類型陽性占比BP>PV>PF>PV+BP>PF+BP,BP占比最高，PF+BP占比最低。BP、PV、PF、PV+BP和BF+BP陽性率兩兩比較，除PV+BP和PF+BP差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.423)外,其余兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2不同年齡組BP、PV、PF陽性率比較 BP陽性率隨年齡增長而升高，不同年齡組BP陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中>60歲組BP陽率最高，其次是40～60歲組，<40歲組最低。<40歲組和40～60歲組PV陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，40～60歲組和>60歲組、<40歲組和>60歲組PV陽性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，40～60歲組PV陽性率最高，其次是<40歲組，>60歲組最低。<40歲組和40～60歲組PF陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，40～60歲組和>60歲組、<40歲組和>60歲組PF陽性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，40～60歲組PF陽性率最高，其次是<40歲組，>60歲組最低。見表1。

表1 不同年齡組BP、PV、PF陽性率比較[n(%)]

3 討 論

目前實(shí)驗(yàn)室診斷和鑒別診斷天皰瘡的方法包括ELISA、組織病理學(xué)檢查和直接免疫熒光法(DIF)，在天皰瘡診斷中ELISA和DIF符合率高于組織病理學(xué)檢查，BP診斷中DIF符合率高于其他兩種方法，因此，增加天皰瘡抗體檢測會(huì)提高臨床診斷天皰瘡和BP的準(zhǔn)確性[1]。采用ELISA聯(lián)合天皰瘡患者外周血抗Dsg1 抗體、抗Dsg3 抗體、BP 180 抗體、BP 230 抗體檢測，方法簡便，對(duì)患者創(chuàng)傷小，具有較高的靈敏度和特異度，對(duì)臨床診斷、鑒別診斷及治療監(jiān)測有重要指導(dǎo)意義[2-6]。

本研究對(duì)880例疑為天皰瘡患者血清4種天皰瘡抗體進(jìn)行檢測，并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行判斷，初步評(píng)估天皰瘡的類型。結(jié)果表明，880例疑為天皰瘡患者562例檢測為陽性，陽性率高達(dá)63.86%，男性和女性陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。北京有研究數(shù)據(jù)表明，PV是天皰瘡中最常見的類型[7]，但在本研究中，天皰瘡類型陽性占比為BP>PV>PF>PV+BP>PF+BP,BP陽率最高，這種差異是否跟地域不同有關(guān)尚不清楚，目前尚少有文獻(xiàn)報(bào)道。有研究報(bào)道了PV并發(fā)BP的個(gè)案[8]，本研究也發(fā)現(xiàn)PV合并BP及PF合并BP的案例，陽性率分別為3.64%和2.95%。天皰瘡從兒童到老年人均可發(fā)病,但主要患病人群是中老年人，BP好發(fā)于中老年人[9-10]，PV和PF好發(fā)于中年人[11]。本研究結(jié)果顯示，BP陽性率隨年齡增長而升高，其中>60歲組BP陽性率最高(44.07%)，以老年人為主；<40歲組和40～60歲組PV和PF陽性率均高于>60歲組，以中年人為主。

天皰瘡患者由于皮膚黏膜屏障的破壞易導(dǎo)致體液和蛋白丟失，更容易繼發(fā)細(xì)菌、病毒感染，嚴(yán)重者可以導(dǎo)致敗血癥甚至死亡[12]。ZHU等[13]報(bào)道，未經(jīng)治療的天皰瘡患者2 年病死率為50%，5年病死率高達(dá)100%。采用ELISA檢測天皰瘡患者體內(nèi)的Dsg1、Dsg3、BP 180、BP 230抗體水平，是一種簡單、敏感且特異度高、快速的診斷分型方法,并且對(duì)疾病的活動(dòng)性監(jiān)測具有重要應(yīng)用價(jià)值，盡早診斷對(duì)患者治療及預(yù)后有重要意義。