免疫分析新方法在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

□ 劉 欣 姜子健 齊衍超 濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

1 膠體金的概念

膠體金是氯金酸在還原劑的作用下聚合為特定大小的金顆粒，并在靜電作用下生成的一種穩(wěn)定膠體溶液。因膠體金顆粒具備電子密度較高的特點(diǎn)，并且在顆粒聚集達(dá)到107個(gè)/mm2的密度條件時(shí)，會(huì)出現(xiàn)粉紅色斑點(diǎn)，故可用作實(shí)驗(yàn)指示物[1]。

2 免疫層析技術(shù)的概念

免疫層析技術(shù)是誕生于20世紀(jì)80年代初期的一種獨(dú)特的免疫分析方法，這一方法的關(guān)鍵技術(shù)在于將條狀纖維層析材料作為固相，使樣品泳動(dòng)，并使待測(cè)物與其受體發(fā)生免疫反應(yīng)，通過(guò)酶反應(yīng)或直接使用標(biāo)記物進(jìn)而得到如顯色等直觀現(xiàn)象。

3 食品安全快速檢測(cè)中GICA技術(shù)的應(yīng)用

GICA是以膠體金為標(biāo)記物的一種免疫層板方法。在GICA技術(shù)的應(yīng)用時(shí)，應(yīng)實(shí)現(xiàn)膜上抗體或特異性抗原的固定，在毛細(xì)作用下使樣品游動(dòng)于層析條上，進(jìn)而之與受體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。而在此階段，因檢測(cè)帶上會(huì)截留相關(guān)物質(zhì)，檢測(cè)結(jié)果也一目了然[2]。

GICA在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用較早，已被普遍應(yīng)用于寄生蟲(chóng)、早孕、乙肝等疾病的檢測(cè)中，并被普遍應(yīng)用于動(dòng)物細(xì)菌性、病毒性疾病的動(dòng)物疫病診斷方面。在食品檢測(cè)領(lǐng)域，GICA的應(yīng)用時(shí)間較晚，但近期以來(lái)，已在迅猛發(fā)展并被普遍應(yīng)用于致病菌、霉菌毒素等食品安全快速檢測(cè)領(lǐng)域。

3.1 霉菌毒素檢測(cè)

霉菌毒素是霉菌生成的有毒的次級(jí)代謝物，對(duì)人類以及動(dòng)物均有害，廣泛存在于飼料以及糧油食品中。在全球范圍內(nèi)，所發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)不一的霉菌毒素在400種以上，其中被分離鑒定的霉菌毒素在20種以上，如T2/HT2毒素、嘔吐毒素等均會(huì)帶來(lái)較大危害。當(dāng)前，全球范圍內(nèi)對(duì)糧食中主要霉菌毒素的限量做出規(guī)定的國(guó)家在100個(gè)以上，我國(guó)GB2761-2017中也對(duì)食品中霉菌毒素的限量做出了規(guī)定。

當(dāng)前在霉菌毒素檢測(cè)中，GICA的應(yīng)用已極其廣泛。例如在5 min內(nèi)，Charm Rosa霉菌毒素定量檢測(cè)系統(tǒng)便可對(duì)T2/HT2毒素、嘔吐毒素等谷物飼料中的霉菌毒素進(jìn)行快速定量測(cè)定。樣品制備流程簡(jiǎn)單、快捷，檢測(cè)流程也并不復(fù)雜，所得結(jié)果與采用國(guó)際方法所得結(jié)果極其相符。當(dāng)前這一方法已被世界各國(guó)普遍應(yīng)用[3]。

3.2 獸藥殘留檢測(cè)

獸藥殘留不但會(huì)對(duì)人體健康構(gòu)成威脅，并且也會(huì)給畜產(chǎn)品的質(zhì)量帶來(lái)不良影響。國(guó)際上往往會(huì)采用初篩加確證的方法來(lái)檢測(cè)獸藥殘留，即在采用一種簡(jiǎn)單、靈敏、便捷的方法對(duì)將要檢測(cè)的樣品快速進(jìn)行初步篩選之后，如結(jié)果呈陽(yáng)性，應(yīng)采用較為精準(zhǔn)的方法對(duì)該樣品進(jìn)行確證分析。在對(duì)將要檢測(cè)的樣品快速進(jìn)行初步篩選時(shí)，往往會(huì)采用膠體金試紙條進(jìn)行檢測(cè)。張改平等會(huì)基于特異性抗體的獲取，并利用膠體金進(jìn)行標(biāo)記以制得試紙條。此外，如紅霉素、磺胺等藥物也已具備相應(yīng)的試紙條產(chǎn)品。當(dāng)前市面上已有試紙條產(chǎn)品可對(duì)獸藥殘留（抗生素類、磺胺類、呋喃類、抗寄生蟲(chóng)類和激素類藥物）進(jìn)行同步檢測(cè)，使得檢測(cè)時(shí)間與成本大幅節(jié)省。在各類檢測(cè)方法中，除了無(wú)需使用大型儀器設(shè)備以外，GICA也具備快捷、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，因此被普遍應(yīng)用于獸藥檢測(cè)中。

3.3 非法添加物檢測(cè)

三鹿奶粉事件發(fā)生以后，三聚氰胺便走入大眾視野，我國(guó)相關(guān)部門便對(duì)非法添加物進(jìn)行了大力抽查并要求各大企業(yè)務(wù)必具備相應(yīng)檢測(cè)能力。除了會(huì)增加成本以外，儀器檢測(cè)也具備速度較為緩慢的缺陷，無(wú)法與檢測(cè)要求保持同步，在此情況下誕生了三聚氰胺膠體金檢測(cè)技術(shù)。當(dāng)前該技術(shù)已發(fā)展得極其成熟，檢測(cè)限可達(dá)0.05 mg/kg。

3.4 致病菌檢測(cè)

在各類食源性致病菌，沙門氏菌、大腸桿菌等病菌均是常見(jiàn)的病菌。邵晨東等以條帶狀將抗沙門氏菌O9抗原的特異性單克隆抗體4-7-7、羊抗鼠IgG，分別包被于硝酸纖維膜的檢測(cè)帶以及質(zhì)控帶上，采用膠體金對(duì)另一株單抗3-47-0進(jìn)行標(biāo)記，并將之吸附于結(jié)合墊上以制備成沙門氏菌O9抗原試紙條。對(duì)沙門氏菌O9抗原而言，這一試紙條的檢測(cè)限為4×105CFU。目前，對(duì)于食品中存在的引發(fā)疾病的病菌，往往會(huì)在進(jìn)行增菌的基礎(chǔ)上，進(jìn)行分離、培養(yǎng)、生化鑒定進(jìn)而對(duì)病菌進(jìn)行檢測(cè)，這一方法不但會(huì)花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，操作復(fù)雜、流程繁瑣，并且極易受到主觀以及環(huán)境因素的影響而使檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)性大打折扣，而GICA技術(shù)則能有效解決操作流程繁瑣、特異性以及靈敏度均較低的問(wèn)題。

4 結(jié)語(yǔ)

相較于其他檢測(cè)技術(shù)，GICA技術(shù)不但操作簡(jiǎn)便、可快捷檢測(cè)，并且可節(jié)省成本，降低了操作難度，也由此成為一項(xiàng)核心技術(shù)，被用于現(xiàn)場(chǎng)快速測(cè)定中，但該技術(shù)大都用于定性研究中，也導(dǎo)致這一技術(shù)的應(yīng)用大幅受限。在不久的將來(lái)，在科研人員的不懈努力下，GICA技術(shù)的定量檢測(cè)也必定為期不遠(yuǎn)。