高效液相色譜法在食品色素檢測(cè)中的應(yīng)用

□ 田 毅 重慶市黔江食品藥品檢驗(yàn)所

1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備研究

需用到的儀器與試劑有：帶有自動(dòng)化進(jìn)樣器、可見紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀Agilent 1260（編號(hào)：0294）；甲醇（色譜級(jí)）溶液、氨水和屈臣氏超純水。

乙酸銨溶液：將1.54 g乙酸銨與水相溶制備成乙酸銨溶液，后轉(zhuǎn)移至1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。將其調(diào)節(jié)為pH值為4.0的酸性環(huán)境，并用0.45 μm濾膜展開過(guò)濾。由于在食品添加劑檢測(cè)中新紅與檸檬綠不容易分離，所以本文則選擇胭脂紅、日落黃、檸檬黃、新紅等4種合成色素，同時(shí)準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0.5 mg/mL的胭脂紅、0.5 mg/mL的日落黃、0.5 mg/mL的檸檬黃以及純度為92%的新紅，處理之前應(yīng)用固相萃取柱，先用3 mL甲醇、3 mL水活化平衡，之后便選擇上樣。

色譜基本要求如下。①色譜柱：C18柱，5 μm，4.6 mm×250 mm。②流速為每分鐘1.0 mL。③固定色譜柱溫度為30 ℃。④進(jìn)樣量為10 μL。⑤波長(zhǎng)：胭脂紅、日落黃、檸檬黃、新紅均為254 nm。⑥流動(dòng)相：濃度為0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇。選擇罐頭、香腸等食品5 g作為樣品，并且經(jīng)過(guò)勻漿、離心、過(guò)濾與凈化的處理過(guò)程。⑦氨基固相萃取柱準(zhǔn)備：選用3 mL甲醇與水平衡活化、上樣5 mL，利用3 mL水溶液和甲醇沖洗，用2%氨水、0.5 mL甲醇洗脫4次，之后用氮?dú)獯蹈梢约坝? mL水溶解。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與優(yōu)化條件

2.1 優(yōu)化設(shè)計(jì)色譜條件

優(yōu)化前的色譜條件主要基于流動(dòng)相為0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇條件，在梯度洗脫分離后去檢測(cè)開始時(shí)20%～30%的甲醇梯度變化洗脫，然而這種分離法并不能分離出新紅與檸檬黃兩種色素。鑒于此，為有效分離出新紅與檸檬黃，則應(yīng)采用流動(dòng)相為0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇，經(jīng)過(guò)六步梯度洗脫之后，采用0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇的流動(dòng)相開始測(cè)試，比例調(diào)整為90∶10，保持時(shí)間10 min；之后調(diào)整比例65∶35并保持5 min；調(diào)整比例為2∶98保持7 min；調(diào)整比例為80∶20保持3 min；最后調(diào)整比例至初始狀態(tài)的90∶10且保持3 min。在如此精細(xì)的分離環(huán)境中，便能夠?qū)⑿录t與檸檬黃有效分離。

2.2 優(yōu)化色素的提取和凈化條件

在對(duì)色素進(jìn)行提取的過(guò)程中通常會(huì)采取利用水溶液進(jìn)行反復(fù)洗脫的方法，直至制備樣品的顏色逐漸淡化至無(wú)色。但是在實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作中，部分食品樣品僅用水溶液對(duì)色素進(jìn)行沖洗無(wú)法呈現(xiàn)出明顯效果，例如冷飲、蜜餞、醬菜等含有復(fù)雜基質(zhì)的食品[1]。因此，必須對(duì)色素提取條件進(jìn)行優(yōu)化，可選擇色素提取效果更為明顯的丙酮與水的混合液，并且操作更為簡(jiǎn)單。色素凈化一般會(huì)采用純聚酰胺吸附雜物，不過(guò)實(shí)驗(yàn)表明利用自制的聚酰胺小柱去吸附色素，不僅可吸附雜物，還能節(jié)約聚酰胺粉與洗脫劑的用量，較利用純聚酰胺而言有著更高回收率，在食品色素檢測(cè)中成本更低，與食品安全檢測(cè)的綠色理念相符。

2.3 選用適宜的固相萃取柱

為了有效分離目標(biāo)化合物和基體干擾物，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)選用固相萃取柱，利用固體吸附劑將樣品中的目標(biāo)化合物吸附出，從而促使目標(biāo)化合物與基體干擾物有所分離，在洗脫液的沖洗之下，實(shí)現(xiàn)分離與富集的目的。然而，當(dāng)前市場(chǎng)上的固相萃取柱難以完全滿足分離物的要求，所以在選用固相萃取柱時(shí)，需要綜合考慮其能否滿足凈化程度、回收率、重現(xiàn)性等要求，選用適宜的固相萃取柱。

2.4 測(cè)定回收率與精密度

回收率的測(cè)定方法一般會(huì)采用吸附法和直接稀釋法，在對(duì)液體類樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)更多應(yīng)用直接稀釋法，不僅操作簡(jiǎn)便且有著不錯(cuò)的回收效果；在針對(duì)固體類、漿體類的樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)更多應(yīng)用吸附法，主要分為吸附、解析、濃縮與溶解4大步驟展開，但是吸附操作復(fù)雜且無(wú)法確保回收率的精準(zhǔn)性。通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)表明，可將其中濃縮與溶解步驟省去，簡(jiǎn)化過(guò)后的吸附過(guò)程所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果相差不大。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)基質(zhì)可選擇不含色素的碳酸飲料或是面包，同時(shí)添加色素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液相互融合，結(jié)合前處理?xiàng)l件的使用條件對(duì)樣品種類展開回收實(shí)驗(yàn)，測(cè)定回收率及精密度，再與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)相比對(duì)，得出最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。

3 結(jié)論

在多次試驗(yàn)檢測(cè)之后能夠發(fā)現(xiàn)，由于原來(lái)基礎(chǔ)的檢測(cè)方法試驗(yàn)中往往會(huì)存在新紅與檸檬綠難以分離的狀況，所以在此基礎(chǔ)上建立了用于檢測(cè)食品色素的高效液相色譜法。該技術(shù)方法能夠有效分離上述多種色素，主要通過(guò)丙酮與水的混合液（體積配比90∶10），在自制聚酰胺小柱凈化下，高效液相色譜法的應(yīng)用處理更為便捷且試劑用量更少、檢測(cè)精準(zhǔn)度更高。不難看出，高效液相色譜法在檢測(cè)食品色素過(guò)程中能夠有效節(jié)省成本，提高工作效率，簡(jiǎn)化色素凈化過(guò)程以及提升分離精度與回收率，在對(duì)大量食品中色素的檢測(cè)中有著顯著的應(yīng)用價(jià)值。