高效液相色譜儀測定食品中蘇丹紅

□ 王曉琴 廣東省惠州市食品藥品檢驗(yàn)所

高效液相色譜法優(yōu)點(diǎn)顯著，有著非常廣泛的用途，在環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域、臨床化學(xué)領(lǐng)域、藥物研究領(lǐng)域、食品檢驗(yàn)領(lǐng)域、石油化學(xué)領(lǐng)域以及生命科學(xué)領(lǐng)域等都有一定的應(yīng)用。而當(dāng)前國內(nèi)外對于蘇丹紅的測定基本上采用的是高效液相色譜儀，筆者在本文中選用LC5500高效液相色譜儀對于食品中的蘇丹紅進(jìn)行測定研究，該種液相色譜儀具有靈敏度高、穩(wěn)定性能好的特點(diǎn)，其最低檢測濃度可以達(dá)到0.01μg/kg，測定蘇丹紅的保留時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%～2.95%，峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)差為0.95%～1.65%；梯度洗脫基線平直，無漂移，噪聲低，樣品回收率能夠達(dá)到80%～95%。

1 材料與方法

1.1 試劑

正己烷A.R.、丙酮色譜純、甲酸A.R.、乙腈色譜純、三氧化二鋁、純水重蒸餾水、蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。蘇丹紅Ⅰ為指示劑，蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ為A.R.，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.2 儀器

LC 5500高效液相色譜儀、254nm紫外檢測器、多孔硅膠型鍵合相YWG一CH,顆粒度10u、微量注射器、P-101高壓泵(雙泵)、恒溫柱箱、超聲波清洗器。

1.3 色譜條件

檢測器：紫外-可見光檢測器、色 譜 柱 M18柱、5.6mm ×480mm，10μm，流動(dòng)相A液（B泵），0.1%甲酸-乙腈+丙酮，B液(A泵)0.1%甲酸-水+乙腈。梯度洗脫程序如下。

開 始0min時(shí)，B液85%，A液35%；15min時(shí)，B液 85%，A液35%；33min時(shí)，B液 150%，A液0%；40min時(shí)，B液150%，A液0%；45min時(shí)，B液 85%，A液 35%；50min時(shí)，B液85%，A液35%。

進(jìn)樣量20μL。繪制蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 靈敏度測試

將蘇丹紅混合溶液（0.2 μg/mL）加入HPLC之中，然后再繪制出其色譜圖像，取蘇丹紅溶液5g，那么其最低檢測濃度為0.04 μg/kg。

2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法將蘇丹紅混合液（10μg/ML）進(jìn)行連續(xù)的8次測定，對其保留時(shí)間與峰面積進(jìn)行測定，然后計(jì)算其算數(shù)平均值、偏差以及標(biāo)準(zhǔn)差，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

蘇丹紅1R平均值 8.55，標(biāo)準(zhǔn)差0.121，CV 1.68%；蘇丹紅1 A平均值158545，標(biāo)準(zhǔn)差1831.4，CV 1.14%。

蘇丹紅2R平均值12.33，標(biāo)準(zhǔn)差0.2953，CV 2.954%；蘇丹紅2A平均值332013，標(biāo)準(zhǔn)差5473.6，CV 1.60%。

蘇丹紅3R平均值18.25，標(biāo)準(zhǔn)差0.3066，CV 2.32%；蘇丹紅3A平均值472762，標(biāo)準(zhǔn)差4565.2，CV 0.95%。

蘇丹紅4 R平均值26.88，標(biāo)準(zhǔn)差0.1565，CV 0.84%；蘇丹紅4 A平均值430633，標(biāo)準(zhǔn)差6902.3，CV 1.63%。

2.3 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)

蘇丹紅Ⅰ、II、III、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液配制采用蘇丹紅I、II、III、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液，濃度分別為2.0、1.5、2.5、3.0、3.5μg/mL，根據(jù)其實(shí)驗(yàn)儀器測定鋒面面積，以此繪制出其校準(zhǔn)曲線。

蘇丹紅I、Ⅱ、III在2.0～3.5μg/mL，蘇丹紅Ⅳ在2.0～ 3.0μg/mL的區(qū)間都呈現(xiàn)出了較好的擬合線性關(guān)系。它們相關(guān)系數(shù)分別為0.98877、0.98850、0.98840、0.98834。 從 而證明出了蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與其峰面積基本上屬于單調(diào)的正比例函數(shù)關(guān)系，其峰面積隨著濃度的增加而增加。

2.4 樣品測定和加標(biāo)回收率試驗(yàn)

分別取辣椒油3g和香辣脆5g各4份,然后對這兩種樣本中所含的蘇丹紅成分進(jìn)行測定，根據(jù)前文的方法將辣椒油樣品和香辣脆樣品加入蘇丹紅四種標(biāo)準(zhǔn)溶液之中，然后測定其濃度，最后計(jì)算其平均回收率，如下。

辣椒油和香辣脆的8份加標(biāo)量都為25.0 μg，辣椒油4份測得量分別是：15.5、19.0、16.5、15.0，香辣脆4份測得量分別是：16.5、14.5、17.0、14.5。辣椒油4份回收率為：80%、90.5%、85.5%、80% ，香辣脆4份回收率為：75.5%、85%、75.5%、78.6%。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所選定的兩種樣本中都未測得蘇丹紅，但是所測定的回收率的值偏低，這也許是由于A2l03活性以及基質(zhì)干擾等因素的影響，具體是什么原因還需要進(jìn)一步的驗(yàn)證研究，對于不同廠家與批號的A2l03需要通過實(shí)驗(yàn)來確定其活性成分以及程度，然后在選取實(shí)驗(yàn)所需要的A2l03。

3 結(jié)論

通過本文的研究可知，采用高效液相色譜儀法測定食品中蘇丹紅成分的方法具有較高的靈敏性和準(zhǔn)確性，且具備良好的線性關(guān)系，是一種高效、實(shí)用的檢測方法。