HPLC法測(cè)定鉤藤提取物中鉤藤堿含量

張建奇 金海燕

摘 要：建立反相高效液相色譜法測(cè)定鉤藤提取物中鉤藤堿的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調(diào)pH=9.8（20：30：50）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。鉤藤堿在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。鉤藤堿平均回收率分別為99.5%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于鉤藤提取物中鉤藤堿的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：鉤藤提取物；含量；測(cè)定

鉤藤始載于《別錄》，原名釣藤。鉤藤別名為吊藤（陶弘景）、釣鉤藤（《滇南本草》）、金鉤藤（《貴州民間方藥集》）、掛鉤藤（《藥材學(xué)》）、鉤耳（《湖南藥物志》）等。鉤藤具有清熱平肝，熄風(fēng)止痙的功效?！侗静菪戮帯酚涊d：“鉤藤，去風(fēng)甚速，有風(fēng)癥者必宜用之。但風(fēng)火之生，多因于腎水不足，以致木燥火炎，于補(bǔ)陰藥中，少用鉤藤，則風(fēng)火易散，倘全不補(bǔ)陰，純用鉤藤以祛風(fēng)散火，則風(fēng)不能息，而火且愈熾矣?！便^藤具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等多種藥理作用[1-4]。本文采用高效液相法對(duì)鉤藤提取物中的鉤藤堿的進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：VWR天平防震墊（北京慧龍環(huán)科環(huán)境儀器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；天星進(jìn)樣瓶清洗機(jī)TX-500型（北京天星科儀科技有限公司）；LC1620A高效液相色譜儀（河南鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）；長(zhǎng)城獅鼎SHB-III型臺(tái)式循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；Milli-Q Direct水純化系統(tǒng)（上海力晶科學(xué)儀器有限公司）；新芝scientz-T超聲波提取機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：鉤藤堿。

1.4試劑：醋酸鈉（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、乙酸銨（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、氨水（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、冰醋酸（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、甲醇（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）、三乙胺（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、乙腈（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）。

1.5 試藥：鉤藤提取物。

2 測(cè)定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[5-6]。流動(dòng)相：乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調(diào)pH=9.8（20：30：50）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按鉤藤堿峰計(jì)算應(yīng)不得低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4 小時(shí)的鉤藤堿對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取提取物適量，精密稱定，加15毫升甲醇溶液超聲處理0.5小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液置25ml量瓶中，用少量甲醇溶液分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾人同一量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取鉤藤堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.78%，表明本方法精密度良好。

2.5 對(duì)照品的線性考察

精密稱取適量鉤藤堿對(duì)照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，鉤藤堿在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的鉤藤堿樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.69%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對(duì)照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入鉤藤堿對(duì)照品，按項(xiàng)下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.5%，RSD為0.98%。

2.8 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定鉤藤提取物三批樣品。

3 討論

分別考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），甲醇-0.01mmol·L-1三乙胺水溶液（80∶20），甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.5），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調(diào)pH=9.8（30：30：40），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調(diào)pH=9.8（20：30：50）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調(diào)pH=9.8（20：30：50）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調(diào)pH=9.8（20：30：50）為流動(dòng)相為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相法效果好、方法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確、專屬性好，可用于鉤藤提取物中鉤藤堿的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1]張興燊，周芳，廖月葵，李麗，熊靖云，藍(lán)國(guó)亮，陳武棠，韋江惠，覃莉萍，梁飛.古鉤藤鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007（07）.

[2]劉建斌，任江華.鉤藤對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌重構(gòu)及原癌基因C-fos表達(dá)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2000（05）.

[3]陳長(zhǎng)勛，金若敏，王群，張海桂.鉤藤堿對(duì)離體豚鼠心房的作用[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，1995（03）.

[4]趙智強(qiáng)，俞晶華，陸躍嗚，王小勤，周仲瑛.天麻鉤藤飲等三方對(duì)戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間效應(yīng)的藥物動(dòng)力學(xué)研究[J].中藥藥理與臨床，1999（02）.

[5]王捷，龍禹，焦愛(ài)軍，劉宗河，辛麗娜.HPLC測(cè)定安神養(yǎng)血口服液中3種生物堿延胡索乙素、鉤藤堿和異鉤藤堿含量[J].中成藥，2010（02）.

[6]張榮，劉睿，劉啟德，宓穗卿，王寧生.鉤藤中鉤藤堿、異鉤藤堿的提取與含量測(cè)定[J].中藥新藥與臨床藥理，2009（04）.