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    AT1-AA通過上調(diào)細(xì)胞自噬誘導(dǎo)大鼠心功能不全*

    2021-03-10 02:33:54張志楠康曉慶靳文文王雪嬌焦向英
    中國病理生理雜志 2021年2期
    關(guān)鍵詞:心肌細(xì)胞染色心功能

    張志楠, 康曉慶, 王 瑾, 靳文文, 王雪嬌, 焦向英△

    (1山西醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室,山西太原030001;2山西省心血管病醫(yī)院,山西太原030024)

    心血管疾病是我國乃至全世界最常見的疾病之一,多數(shù)患者最后可轉(zhuǎn)為慢性心力衰竭而導(dǎo)致死亡[1-2]。心肌細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞,在心力衰竭的發(fā)展進(jìn)程中,各種致病原因引起的心肌細(xì)胞凋亡使得有功能的細(xì)胞數(shù)目逐漸減少,引起心功能逐漸下降,直至最后無法代償而出現(xiàn)心力衰竭[3-4],因此抑制心肌細(xì)胞凋亡可以有效延緩心功能不全的發(fā)生,是治療心力衰竭的重要策略[4-5]。近年來的研究表明,在各類心血管類疾病(包括心衰)患者血清中均檢測到血管緊張素Ⅱ1 型受體自身抗體(angiotensin Ⅱtype 1 receptor autoantibody,AT1-AA),其水平明顯高于正常人[6-7],提示AT1-AA 可能參與心力衰竭進(jìn)程,但在整體情況下,該抗體是否可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡引起心功能不全及其具體機(jī)制尚不清楚。

    細(xì)胞自噬是真核細(xì)胞蛋白降解的途徑之一,通常被認(rèn)為是細(xì)胞的一種正常保護(hù)機(jī)制,是維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)所必需的[8]。在營養(yǎng)充足的條件下,可保護(hù)細(xì)胞免受錯誤折疊蛋白或受損細(xì)胞器的影響,從而防止某些疾病的發(fā)生(如神經(jīng)退行性疾病和腫瘤);饑餓等也可誘導(dǎo)自噬的發(fā)生,通過降解大分子物質(zhì)和細(xì)胞器為細(xì)胞活動提供營養(yǎng)和能量來促進(jìn)細(xì)胞存活[9]。然而,過多的和不受控制的自噬激活會導(dǎo)致必需分子和細(xì)胞器的耗竭,引起細(xì)胞凋亡[10-11]。這表明,自噬具有雙向功能,根據(jù)誘導(dǎo)的背景和程度不同,它可能會拮抗疾病的發(fā)病機(jī)制,也可能促進(jìn)疾病的進(jìn)展[12]。自噬與心血管疾病密切相關(guān),在心力衰竭進(jìn)程中發(fā)揮著多種作用[13-14]。已證實(shí),血管緊張素Ⅱ(angiotension Ⅱ,Ang Ⅱ)可以誘導(dǎo)自噬[15-16],AT1-AA 具有類Ang Ⅱ的激動樣作用[17],那么AT1-AA 是否也會對心肌細(xì)胞的自噬產(chǎn)生影響,如果有影響,自噬在AT1-AA引起的心功能不全及心肌細(xì)胞凋亡中的作用如何,值得我們深入探討。

    研究發(fā)現(xiàn),AT1-AA 是一種G 蛋白偶聯(lián)受體(Gprotein-coupled receptor,GPCR)自身抗體,可以特異性結(jié)合血管緊張素Ⅱ1 型受體(angiotensin Ⅱtype 1 receptor,AT1R),通過專一性識別AT1R 細(xì)胞外第二環(huán)(the second extracellular loop of AT1R,AT1R-ECⅡ)功能表位肽段而發(fā)揮類Ang Ⅱ激動效應(yīng)[18]。因此,我們猜測AT1-AA 可能通過與AT1R 結(jié)合引起心功能不全。因此,本研究的主要目的是觀察AT1-AA是否通過AT1R,使大鼠心肌細(xì)胞自噬上調(diào),誘導(dǎo)在體大鼠心肌細(xì)胞凋亡,進(jìn)而引起心功能不全,參與心力衰竭的進(jìn)程。

    材料和方法

    1 動物和材料

    SD 大鼠和AT1aR基因敲除8 周齡雄性SD 大鼠,由首都醫(yī)科大學(xué)劉慧榮教授贈送(南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究院制備)。PCR 引物購于上海生工生物工程股份有限公司,具體序列見表1;AT1R-ECⅡ(序列 為165~191,IHRNVFFIENTNITVCAFHYESQN?STL)肽段購于上海吉爾生化公司;3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)購于上海阿拉丁生化科技股份有限公司;TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購于江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司;SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒購于Bio-Rad;辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG和HE檢測試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司;微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、beclin-1、P62、caspase-3和β-actin抗體購于CST。

    表1 PCR引物序列Table 1. Primer sequences for PCR

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組 PCR 基因鑒定后分組,分為空白對照(vehicle)組、AT1-AA 免疫(AT1-AA)組、AT1-AA+3-MA 組和AT1aR-/-+AT1-AA 組。前3 組為8 周齡雄性SD大鼠(AT1aR基因敲除SD大鼠子代中陰性純合子),第4 組為8 周齡雄性AT1aR基因敲除鼠,每組6 只。除空白對照組大鼠外,其余大鼠均進(jìn)行首次免疫[將人同源性AT1R-ECⅡ肽段(0.4 μg/g)溶于Na2CO3稀釋溶液溶解,與完全弗氏佐劑1∶1 混勻后,多點(diǎn)背部皮下注射]及加強(qiáng)免疫(將完全佐劑換為不完全弗氏佐劑,每2 周1 次,共免疫12 周),每次加強(qiáng)免疫前從尾靜脈取血,留取大鼠血清;vehicle 組將抗原溶液換位等量Na2CO3溶液,其余同免疫組。AT1-AA+3-MA組,免疫8周時從AT1-AA免疫組隨機(jī)分出6只腹腔注射3-MA(10 mg/kg),隔天1次,共4周。

    2.2 SA-ELISA 法檢測血清抗體水平 用人工生物合成的AT1R-ECⅡ抗原肽段包被抗原于96 孔板,4℃過夜。加入封閉液,37℃水浴箱中封閉1 h,PBST 溶液清洗。37℃水浴1.5 h 孵育I 抗,PBST 溶液清洗,靜置風(fēng)干。37℃水浴孵育Ⅱ抗羊抗大鼠IgG 1 h,PBST 溶液清洗。加鏈酶卵白素37℃水浴箱1 h,PBST 溶液清洗。加入底物ABTS 緩沖液水浴箱中30 min 顯色。用酶標(biāo)儀檢測吸光度(A)值,得到血清抗體濃度。

    2.3 小動物超聲儀檢測心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化異氟烷輕度麻醉大鼠,左側(cè)前胸脫毛。GE Vivid 7 Dimension Ultrasound 超聲儀進(jìn)行超聲心動圖檢查,取短軸切面。測定左心室舒張末期內(nèi)徑(left ven?tricular end-diastolic inner dimension,LVIDd)、左心室收縮末期內(nèi)徑(left ventricular end-systolic inner diameter,LVIDs)、左心室舒張末期后壁厚度(left ventricular end-diastolic posterior wall thickness,LPWDd)、左心室收縮末期后壁厚度(left ventricular end-systolic posterior wall thickness,LPWDs)、左心室舒張末期容積(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)和左心室收縮末期容積(left ventricular endsystolic volume,LVESV)作為反映心臟結(jié)構(gòu)的指標(biāo)。測定左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection frac?tion,LVEF)和左心室短軸縮短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)作為反映心臟功能的指標(biāo)。連續(xù)測量3次,取平均值。

    2.4 HE 染色 采用4%多聚甲醛固定和石蠟包埋的大鼠心臟。取左室橫切面3 μm 連續(xù)切片,常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色。Olympus BX51 正置顯微鏡獲取圖像。

    2.5 TUNEL 染色檢測心臟組織細(xì)胞凋亡情況 將石蠟包埋的心臟組織左室橫切面2 μm 連續(xù)切片,根據(jù)TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書操作檢測。Olympus BX51正置顯微鏡獲取圖像。心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptotic index,AI)=凋亡心肌細(xì)胞核數(shù)/心肌細(xì)胞核總數(shù)×100%。

    2.6 Western blot 檢測自噬和凋亡相關(guān)蛋白水平分別檢測自噬起始的重要調(diào)節(jié)因子beclin-1、自噬體形成的標(biāo)志蛋白LC3 及自噬底物P62 的表達(dá)和凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 的水平。取0.05 g 心臟組織,加500 μL 裂解液和5 μL 蛋白酶抑制劑PMSF,眼科剪剪碎后超聲碎裂,冰上裂解2.5 h,12 000 r/min、4℃離心15 min,取上清。BCA 法測蛋白濃度,SDS-PAGE 分離,轉(zhuǎn)膜,封閉,I 抗和Ⅱ抗孵育,滴加ECL 發(fā)光液曝光。ImageJ 軟件分析曝光條帶灰度值。以β-actin作為蛋白表達(dá)的內(nèi)參照。

    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    用SPSS 16.0 和GraphPad Prism 6.02 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示。兩組間比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);多組間比較使用單因素方差分析(one-way ANOVA),組間兩兩比較使用SNK-q檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 AT1-AA陽性大鼠模型的建立

    SA-ELISA 方法檢測大鼠血清中的AT1-AA 水平。結(jié)果顯示,與vehicle 組相比,AT1-AA 免疫組免疫第2 周時血清AT1-AA 含量升高(P<0.05),隨著免疫時間延長,血清中AT1-AA 抗體滴度逐漸升高,免疫8 周時AT1-AA 抗體滴度達(dá)到峰值并到實(shí)驗(yàn)結(jié)束一直維持在高水平(P<0.01),提示AT1-AA 陽性大鼠造模成功,見圖1A。

    PCR 鑒定不同基因型大鼠DNA 的水平。圖1B結(jié)果顯示,1和2為SD 大鼠(AT1aR 基因敲除SD 大鼠子代中陰性純合子),3 和4 為AT1aR 基因敲除SD 大鼠子代中陽性雜合子,5 為AT1aR 基因敲除SD 大鼠子代中陽性純合子。

    2 AT1-AA 長期存在可以引起大鼠心肌損傷、心功能下降及心臟結(jié)構(gòu)的改變

    心臟超聲結(jié)果圖見圖2A,與vehicle 組相比,AT1-AA 免疫組大鼠在免疫12 周時的LVIDs 和LVESV 均顯著增加(P<0.05),LVEF 和LVFS 均明顯下降(P<0.05),見圖2。

    HE 染色結(jié)果顯示,vehicle 組心肌細(xì)胞排列整齊,細(xì)胞致密,細(xì)胞核大小均一,橫紋清晰,細(xì)胞間隙正常,心肌纖維未見明顯斷裂。與vehicle 對照組相比,AT1-AA 免疫組大鼠在免疫12 周時心肌細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞核大小明顯不同,細(xì)胞質(zhì)空泡化,橫紋模糊,細(xì)胞間隙扭曲增寬,心肌纖維走向紊亂且破裂,見圖2J。

    以上結(jié)果提示AT1-AA 長期存在可以引起大鼠心肌損傷、心功能下降及心臟結(jié)構(gòu)改變。

    3 AT1-AA長期存在可以引起心肌細(xì)胞凋亡增加

    TUNEL 染色結(jié)果顯示,與vehicle 組相比,在免疫12 周時免疫組大鼠心臟組織中TUNEL 染色陽性即棕黃色細(xì)胞核增多,心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)增加(P<0.05),見圖3A。

    Western blot 檢測凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 的水平,結(jié)果顯示:與vehicle 組相比,AT1-AA 免疫組在免疫12 周時心臟組織的cleaved caspase-3/caspase-3 蛋白水平增加(P<0.05),說明凋亡水平上升,見圖3C。以上結(jié)果提示AT1-AA 長期存在可以誘導(dǎo)心臟組織凋亡增加。

    Figure 1. AT1-AA positive rats were successfully established. A:characteristics of AT1-AA in serum. Mean±SEM. n=6. **P<0.01 vs vehicle group. B:PCR results for AT1aR knockout rats. M:marker;P:positive control;1,2:AT1aR-/- mice;3,4:AT1aR-/+mice;5:AT1aR+/+mice.圖1 AT1-AA陽性大鼠造模成功的鑒定結(jié)果

    4 AT1-AA 長期存在可以引起心臟組織自噬水平升高

    Western blot 檢測自噬相關(guān)蛋白LC3、beclin-1 和P62 的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示與vehicle 組相比,AT1-AA 免疫組在免疫12周時心臟組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1 蛋白的水平增加(P<0.05),而P62 蛋白的水平降低(P<0.05),見圖4。提示AT1-AA 可以誘導(dǎo)心臟組織細(xì)胞自噬水平升高。

    5 自噬抑制劑3-MA可以抑制AT1-AA誘導(dǎo)的大鼠心臟組織細(xì)胞自噬和凋亡水平,改善心功能不全

    腹腔注射3-MA 4 周后,取大鼠心臟組織用Western blot 檢測自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示與AT1-AA免疫組相比,AT1-AA+3-MA組心臟組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1 蛋白的水平降低(P<0.05),而P62 蛋白的水平升高(P<0.05),見圖4,提示自噬抑制劑3-MA可以抑制AT1-AA誘導(dǎo)的大鼠心臟組織細(xì)胞自噬水平。

    腹腔注射3-MA 4 周后,TUNEL 染色檢測心臟組織細(xì)胞凋亡情況,Western blot 檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。TUNEL 染色結(jié)果顯示,與AT1-AA 免疫組相比,AT1-AA+3-MA 組大鼠心臟組織棕黃色顆粒較少,心肌細(xì)胞凋亡率降低(P<0.05),見圖3A;Western blot 結(jié)果顯示與AT1-AA 組相比,AT1-AA+3-MA 組心臟組織的cleaved caspase-3/caspase-3蛋白水平下降(P<0.05),說明凋亡減少,見圖3B。以上結(jié)果提示抑制自噬可減少AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織細(xì)胞凋亡。

    小動物超聲儀檢測心臟功能和結(jié)構(gòu)變化,HE 染色觀察心臟結(jié)構(gòu)變化。超聲檢測結(jié)果顯示,與AT1-AA 免疫 組相 比,AT1-AA+3-MA 組大鼠 的LVIDs 和LVESV 均下降(P<0.05),LVEF 和LVFS 均顯著增加(P<0.05),見圖2。HE 染色結(jié)果顯示,與AT1-AA 免疫組相比,AT1-AA+3-MA 組心肌細(xì)胞排列紊亂減少,細(xì)胞質(zhì)空泡化減少,橫紋較清晰,細(xì)胞間隙扭曲增寬程度降低,心肌纖維走向紊亂且破裂程度較輕,心肌細(xì)胞溶解減少,見圖2J。以上結(jié)果提示自噬抑制劑3-MA 可以減輕AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷、心臟結(jié)構(gòu)改變及心功能不全。

    6 AT1aR 敲除可以使AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織自噬和凋亡水平降低,心功能不全改善

    AT1aR敲除鼠主動免疫12 周時,Western blot 檢測大鼠心臟組織自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示與AT1-AA 免疫組相比,AT1aR-/-+AT1-AA 組心臟組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1 蛋白的水平降低(P<0.05),而P62 蛋白的水平則升高(P<0.05),見圖4,提示敲除AT1aR可以使AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心臟組織細(xì)胞自噬水平降低。

    Figure 2. AT1-AA positive rats had decreased cardiac function and damaged heart structure,and both autophagy inhibitor 3-MA and AT1a receptor knockout reduced the functional and structural damages of heart and attenuated cardiac insufficiency in the rats. A:the images of representative of echocardiography;B:left ventricular end-systolic inner diameter(LVIDs);C:left ventricular end-systolic volume(LVESV);D:left ventricular ejection fraction(LVEF);E:left ventricular fraction shortening(LVFS);F:left ventricular end-diastolic inner diameter(LVIDd);G:left ventricular end-diastolic volame(LVEDV);H:left ventricular end-systolic wall thickness(LPWDs);I:left ventricular end-diastolic wall thickness(LPWDd);J:the results of HE staining(scale bar=200 μm). Mean±SEM. n=6. *P<0.05 vs vehicle group;#P<0.05 vs AT1-AA group.圖2 AT1-AA陽性大鼠心臟功能下降和結(jié)構(gòu)損傷,自噬抑制劑3-MA和AT1aR敲除都可以減輕大鼠心臟功能和結(jié)構(gòu)損傷,改善心功能不全

    AT1aR敲除鼠主動免疫12 周時,TUNEL 染色和Western blot 檢測心臟組織細(xì)胞凋亡情況。TUNEL染色結(jié)果顯示,與AT1-AA 免疫組相比,AT1aR-/-+AT1-AA 組大鼠心臟組織棕黃色顆粒較少,心肌細(xì)胞凋亡率降低(P<0.05),見圖3A。Western blot 結(jié)果顯示與AT1-AA 組相比,AT1aR-/-+AT1-AA 組心臟組織凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 的水平下降(P<0.05),見圖3B,說明凋亡水平下降,提示敲除AT1aR可減輕AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織細(xì)胞凋亡水平。

    Figure 3. The apoptosis of AT1-AA positive rat heart tissue was increased,and both autophagy inhibitor 3-MA and AT1aR knockout reduced the apoptosis induced by AT1-AA in heart tissue. A:results of TUNEL staining(the scale bar=200 μm);B:the protein levels of caspase-3 protein in different rat heart tissues determined by Western blot. Mean±SEM. n=6. * P<0.05 vs vehicle group;#P<0.05 vs AT1-AA group.圖3 AT1-AA陽性大鼠心臟組織細(xì)胞凋亡增加,自噬抑制劑3-MA和AT1aR敲除均可降低AT1-AA誘導(dǎo)的心臟組織細(xì)胞凋亡

    AT1aR敲除鼠主動免疫12 周時,小動物超聲檢測心臟功能和結(jié)構(gòu)變化,HE 染色觀察心臟結(jié)構(gòu)變化。超聲檢測結(jié)果顯示,與AT1-AA 免疫組相比,AT1aR-/-+AT1-AA 組大鼠的LVIDs 和LVESV 均下降(P<0.05),LVEF 和LVFS 均顯著增加(P<0.05),見圖2。HE 染色結(jié)果顯示,與AT1-AA 免疫組相比,AT1aR-/-+AT1-AA 組大鼠的心肌細(xì)胞排列紊亂減輕,橫紋較清晰,細(xì)胞間隙扭曲增寬程度降低,心肌纖維走向紊亂且破裂程度較輕,見圖2J。以上結(jié)果提示AT1aR敲除可以使AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷和心臟結(jié)構(gòu)改變程度減輕,改善心功能不全。

    討 論

    近年來,心血管疾病已成為威脅人類健康的重大疾?。?-2]。許多心血管疾病的最終結(jié)果是心力衰竭,這是一種心臟無法滿足身體代謝需求的綜合征,已經(jīng)成為心血管疾病的主要死亡原因[1-2]。臨床心衰患者血清中可檢測出高滴度的AT1-AA[6-7]。本研究通過使用小動物超聲儀檢測大鼠心臟功能變化,小動物超聲和HE 染色檢測大鼠心臟結(jié)構(gòu)的變化。左心室射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率、左心室收縮末期內(nèi)徑及左心室收縮末期容積等指標(biāo)是評價左心室整體功能的重要指標(biāo),即診斷心衰的重要指標(biāo)[2]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AT1-AA 的長期存在可以使心功能下降及心臟結(jié)構(gòu)改變。

    心肌細(xì)胞損傷和死亡在心功能不全的發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞凋亡作為細(xì)胞程序性死亡的方式之一,心肌細(xì)胞凋亡的持續(xù)存在可以增加心肌細(xì)胞死亡,導(dǎo)致心功能不全,抑制心肌細(xì)胞死亡可有效改善心功能[4-5]。我們實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)心肌細(xì)胞中給予AT1-AA 處理能夠誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡[19],本實(shí)驗(yàn)使用TUNEL 染色和Western blot 技術(shù)發(fā)現(xiàn)AT1-AA 長期存在可以引起心臟組織細(xì)胞凋亡增加,提示AT1-AA 可能參與心力衰竭進(jìn)程,但在心功能不全中AT1-AA 誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制尚不清楚。

    Figure 4. The expression of autophagy-related proteins was changed in the heart tissues of AT1-AA positive rats,and both autophagy inhibi?tor 3-MA and AT1aR knockout changed the expression of autophagy-related proteins in heart tissues induced by AT1-AA. Mean±SEM.n=6. *P<0.05 vs vehicle group;#P<0.05 vs AT1-AA group.圖4 AT1-AA 陽性大鼠心臟組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)變化,自噬抑制劑3-MA 和AT1aR 敲除均可改變AT1-AA 誘導(dǎo)的心臟組織自噬相關(guān)蛋白的水平

    自噬是溶酶體降解并清除受損細(xì)胞器的過程。通過平衡細(xì)胞合成和分解,自噬可以穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境[8]。然而,過多的和不受控制的自噬可致細(xì)胞的程序性死亡[10-11]。自噬的程度可用LC3-Ⅱ/LC3-I 比值評價,隨著自噬增加,LC3-Ⅱ表達(dá)逐漸增多[10]。P62受體是自噬的底物結(jié)合物,在自噬溶酶體降解過程中,P62 受體被降解清除,而當(dāng)自噬受阻,P62 蛋白的表達(dá)則顯著增加[3]。Beclin1 作為哺乳動物同系物,有促進(jìn)自噬活性的作用[10]。本研究通過用Western blot 法檢測自噬相關(guān)蛋白,發(fā)現(xiàn)AT1-AA 可以激活自噬;為了進(jìn)一步探討自噬對AT1-AA誘導(dǎo)心臟組織細(xì)胞凋亡的影響,我們給大鼠腹腔注射自噬抑制劑3-MA,發(fā)現(xiàn)自噬參與AT1-AA 誘導(dǎo)心功能不全中心肌細(xì)胞凋亡的過程。

    研究表明,AT1-AA 可以通過專一識別、結(jié)合AT1R 來發(fā)揮類血管緊張素Ⅱ的激動樣作用[18]。因此為了進(jìn)一步探討AT1aR 在AT1-AA 陽性大鼠心功能不全進(jìn)程中的作用及意義,我們使用AT1aR敲除大鼠,主動免疫構(gòu)建AT1-AA 陽性大鼠模型,觀察AT1aR敲除對AT1-AA 陽性大鼠心肌細(xì)胞損傷、心臟結(jié)構(gòu)改變及心功能的影響,同時檢測心肌細(xì)胞凋亡和自噬水平的變化。結(jié)果提示敲除AT1aR可以抑制AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心臟組織自噬和凋亡水平,減弱AT1-AA 誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷、心臟結(jié)構(gòu)改變,改善心功能不全。本結(jié)果證明AT1-AA 確是作為受體激動劑,需要與AT1R 結(jié)合,才能發(fā)揮其誘導(dǎo)自噬和凋亡,導(dǎo)致大鼠心肌損傷的作用。

    綜上所述,AT1-AA 可以作用于AT1aR,上調(diào)大鼠心臟組織自噬,誘導(dǎo)在體大鼠心肌細(xì)胞凋亡,進(jìn)而引起心功能不全,參與心力衰竭的進(jìn)程。本研究結(jié)果可為臨床治療心力衰竭特別是AT1-AA 陽性心力衰竭提供理論依據(jù)和治療的潛在靶點(diǎn)。

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