洋參蟲草顆粒對(duì)小鼠免疫功能及學(xué)習(xí)記憶的影響

楊玉奇 羅維 聶晶 魏云 賀雙艷 唐笑鳳 李琴玲

（1湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司 湖南 長(zhǎng)沙 410125)

（2湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所 湖南 長(zhǎng)沙 410014）

洋參蟲草顆粒處方由西洋參、蟲草孢子體等組成。功能益氣養(yǎng)陰，健腦益神，用于氣陰不足或腎精虧虛所致的頭暈耳鳴，困乏無力，記憶衰退，健忘失眠等，神經(jīng)衰弱癥見上述癥候者。

1.實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

洋參蟲草顆粒，湖南康壽制藥有限公司提供，批號(hào)：150201。古漢養(yǎng)生精口服液，批號(hào)：130306。紫光古漢集團(tuán)衡陽中藥有限公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠，18～22g。110只。雌、雄各半。湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司供應(yīng)。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2013-0004。動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2014-0012。

1.3 儀器與試劑

MA2014電子分析天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司。721型分分光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司。DT-200小鼠跳臺(tái)自動(dòng)測(cè)試箱，成都泰盟科技有限公司。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 碳粒廓清實(shí)驗(yàn)

方法[1-3]，ICR小鼠，50只，雌、雄各半，體重18～22g，隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組，洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組，古漢養(yǎng)生精組。分別給予下列藥物：空白對(duì)照組（給予蒸餾水），洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組（1.95、3.90、7.80g 生藥/kg），古漢養(yǎng)生精組（7.80ml/kg），均按20ml/kg灌胃給藥，每天給藥1 次，連續(xù)7 天。末次給藥60min后，從小鼠尾靜脈注射印度墨水0.1ml/10g。注射后1min、5min，眼眶采血20μl，溶于2.0ml 0.1% Na2CO3溶液中，于680mm處，測(cè)定吸收值（OD），以Na2CO3溶液作為空白對(duì)照。取血后，將小鼠處死，摘取胸腺、肝臟、脾臟，吸干臟器表面血污，稱質(zhì)量（mg）。計(jì)算胸腺指數(shù)，廓清指數(shù)K，校正廓清指數(shù)α。胸腺指數(shù)（mg/10g）=10×器官重量（mg）÷小鼠體重（g），K=(LogOD1－LogOD2)÷(t2-t1)，α=×體重÷(肝重 + 脾重)。

2.2 對(duì)東莨菪堿所致的小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得障礙影響

參考文獻(xiàn)方法[1、2、6]，選ICR小鼠，60只，雌、雄各半，體重18～22g，隨機(jī)分成6組：空白對(duì)照組，模型組，洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組，古漢養(yǎng)生精組。分別給予下列藥物：空白對(duì)照組（給予蒸餾水），模型組（給予蒸餾水），洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組（1.95、3.90、7.80g 生藥/kg），古漢養(yǎng)生精組（7.80ml/kg），均按20ml/kg 灌胃給藥，每天給藥1 次，連續(xù)7天。第6天給藥60min后，將6格跳臺(tái)儀的電壓調(diào)至32V，將小鼠分批在放入DT-200小鼠跳臺(tái)自動(dòng)測(cè)試箱內(nèi)進(jìn)行訓(xùn)練，訓(xùn)練前10min，空白對(duì)照組腹腔注射生理鹽水10ml/kg，其余各組腹腔注射東莨菪堿2mg/kg。訓(xùn)練時(shí)先適應(yīng)環(huán)境3min，通電，小鼠受電擊后跳上跳臺(tái)，跳下時(shí)以小鼠雙足同時(shí)接觸跳臺(tái)儀銅柵為觸電，視為錯(cuò)誤反應(yīng)，訓(xùn)練5min。觀察并記錄小鼠學(xué)習(xí)中觸電潛伏期及5min 內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)。給藥第7天60min 后，將小鼠放在跳臺(tái)上，記錄小鼠錯(cuò)誤潛伏期和5min 內(nèi)錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)，作為記憶指標(biāo)。

2.3 數(shù)據(jù)處理方法

采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x-±SD表示，并進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01 具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 洋參蟲草顆粒對(duì)小鼠胸腺指數(shù)、碳廓清指數(shù)、校正廓清指數(shù)影響：與空白組比較，洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組和古漢養(yǎng)生精對(duì)照組胸腺指數(shù)、碳廓清指數(shù)、校正廓清指數(shù)均無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 洋參蟲草顆粒對(duì)胸腺指數(shù)（x-±SD，n=10）

表2 洋參蟲草顆粒對(duì)廓清指數(shù)、校正廓清指數(shù)的影響（x-±SD，n=10）

3.2 對(duì)東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得障礙影響

與空白組比較，模型組潛伏期顯著縮短、錯(cuò)誤次數(shù)顯著性增多（P＜0.01）；與模型組比較，洋參蟲草顆粒高劑量組潛伏期顯著延長(zhǎng)（P＜0.01），洋參蟲草顆粒高劑量組錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少（P＜0.05）。結(jié)果見表3。

表3 洋參蟲草顆粒對(duì)東莨菪堿所致的小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得障礙的影響（x-±SD，n=10）

4.討論

影響非特異性免疫功能的研究方法較多，免疫藥理實(shí)驗(yàn)，常以藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫器官重量的影響作為初步觀察藥物對(duì)免疫功能影響的指標(biāo)，當(dāng)機(jī)體的整體免疫功能增強(qiáng)時(shí)，其質(zhì)量有所增加，臟器系數(shù)增加[1、4]。向小鼠血流中注射一定量的碳顆粒，迅速被單核吞噬細(xì)胞所清除，主要被定居在肝和脾臟的巨噬細(xì)胞所吞噬[1-2]。觀察其血流中清除的速率，即可反映肝臟和脾臟中的巨噬細(xì)胞的吞噬功能[2]。本研究主要采用了免疫器官重量法和單核吞噬細(xì)胞功能測(cè)定法（小鼠碳廓清法）來探討洋參蟲草顆粒對(duì)小鼠免疫功能的影響。結(jié)果洋參蟲草顆粒各劑量組對(duì)小鼠胸腺指數(shù)、碳廓清指數(shù)、校正廓清指數(shù)有增加趨勢(shì)，提示具有增強(qiáng)免疫功能的作用。

學(xué)習(xí)和記憶是腦的重要功能之一，觀察藥物的益智作用時(shí)常需采用記憶障礙動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本法即可觀察藥物對(duì)記憶過程的影響，也可觀察對(duì)學(xué)習(xí)的影響，有較高的敏感性[3、6]，尤適合于初篩藥物。另外跳臺(tái)法在電擊前經(jīng)條件刺激，可同時(shí)觀察被動(dòng)和主動(dòng)回避性反應(yīng)。本研究采用在動(dòng)物訓(xùn)練前10min腹腔注射東莨菪堿2mg/kg，造成記憶損傷模型，與模型組比較，洋參蟲草顆粒高劑量組錯(cuò)誤潛伏期顯著延長(zhǎng)，洋參蟲草顆粒高劑量組錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少，提示洋參蟲草顆對(duì)東莨菪堿所致的小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得障礙具有改善作用。

【參考文獻(xiàn)】

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