針灸聯(lián)合溫脾補腎方對急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血管活性腸肽、血清腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素水平的影響*

趙鳳玲 常玉潔 董雪蓮 張曉蕾

（河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院，河北 唐山 063000）

潰瘍性結(jié)腸炎為非特異性結(jié)腸炎癥，表現(xiàn)為與腹痛、膿液膿血便、腹瀉等，可能與遺傳、免疫、環(huán)境等多種因素有關(guān)，迄今為止其發(fā)病機制尚未完全闡明［1-2］。隨著生活方式及飲食結(jié)構(gòu)改變，潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率逐年增加，西醫(yī)臨床常主要采用抗感染、激素、免疫抑制，毒副作用大且復(fù)發(fā)率高，療效均不佳［3］。潰瘍性結(jié)腸炎屬中醫(yī)學(xué)“痢疾”“便血”等范疇，氣血運行不暢，壅遏氣血，血瘀腸絡(luò)，腐敗為瘍，化為膿血而發(fā)病，溫脾補腎可通過調(diào)理脾胃，消除血瘀和氣滯，改善氧化應(yīng)激，治療急性潰瘍性結(jié)腸炎［4-5］。溫脾補腎方為本院治療急性潰瘍性結(jié)腸炎的眼院協(xié)定處方，具有溫補脾腎、清熱解毒功效，臨床療效顯著，但其作用機制不清。針灸可促進經(jīng)氣傳導(dǎo)，加速血液循環(huán)，保護和修復(fù)結(jié)腸黏膜，抑制異常增高的結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞調(diào)亡［6］。因此，本研究旨在觀察針灸聯(lián)合溫脾補腎方對急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血管活性腸肽（VIP）、血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素（IL）水平的影響，并探討其機制?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康清潔級SD大鼠30只，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供 ［SCXK （京）2011-0011］，雌雄各半，體質(zhì)量（250±20） g。 自然光線，以標(biāo)準(zhǔn)飼料和無菌蒸餾水喂養(yǎng)。

1.2 試藥與儀器 水合氯醛（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；溫脾補腎方藥物（組成：黃芩15 g，黃連9 g，枸杞子 15 g，熟地黃 10 g，薏苡仁 20 g，菟絲子 15 g，桑寄生 15 g，白芍 10 g，枳殼 10 g，香附 10 g，延胡索10 g，白及 10 g，黃芪 25 g，炒山藥 15 g，白術(shù) 15 g，茯苓15 g，甘草10 g。藥材均為本院中藥房提供，并制成1 g/mL的煎煮液）；VIP、TNF-α和IL-6試劑盒均購于南京建成生物科技公司；超氧化物歧化酶（SOD）、脂質(zhì)過氧化物（LPO）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒購自武漢博士德公司。NI500顯微鏡 （日本尼康公司）、Biotek aQuant型酶標(biāo)儀 （上海坤肯生物化工有限公司）、RM2125切片機和TPIIZO全自動封閉式組織脫水機（德國徠卡公司）、Y6-6LF生物組織包埋機（湖北亞光易用電子技術(shù)有限公司）

1.3 模型制備 40只健康SD大鼠分籠飼養(yǎng)，自然光照，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周開始實驗，采用免疫學(xué)方法并加局部刺激建立潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型［7-8］。新鮮結(jié)腸黏膜組勻漿后離心，取上清液，與完全弗氏佐劑充分混合制成抗原乳化劑，水合氯醛麻醉，第1日雙側(cè)足趾內(nèi)注射3.5mg，第7、14和21日再向雙側(cè)足趾、腹股溝和腹腔注射7mg。第21日不加完全弗氏佐劑，3%甲醛和3mL黏膜勻漿原液灌腸灌腸，建立潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型。

1.4 分組與給藥 隨機分為模型組、針灸組、溫脾補腎方組和針灸聯(lián)合溫脾補腎方組，每組10只。造模后第2日模型組3mL 0.9%氯化鈉注射液灌胃，每日1次。針灸組選取天樞和足三里穴針灸，每日1次。將大鼠固定，直刺天樞和足三里穴，快速進針，天樞約0.2 cm，足三里約0.3 cm，提插捻轉(zhuǎn)，平補平瀉，留針20min，中間輕捻行針1次。溫脾補腎方組給予3mL溫脾補腎方煎煮液灌胃。聯(lián)合組給予針灸和灌胃 （針刺方法同針灸組，藥物治療通溫脾補腎方），治療2周后處死大鼠進行觀察。

1.5 標(biāo)本采集與檢測 1）病理學(xué)觀察：治療2周后處死后各組大鼠，剖取大鼠結(jié)腸組織，洗凈內(nèi)容物，濾紙吸取多余水分，0.9%氯化鈉注射液清洗后，10%甲醛固定液固定48 h后，二甲苯脫脂，酒精脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，觀察各組大鼠的結(jié)腸組織病理。2）炎癥因子與氧化應(yīng)激水平比較：眼球取血，3000 r/min離心15min，分離血清后-80℃保存。采用ELISA法檢測血清VIP、TNF-α和IL-6炎癥因子水平；采用ELISA檢測SOD、LPO和GSH-PX氧化應(yīng)激水平，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗比較組內(nèi)和組間差異；計數(shù)資料以n（%）表示，應(yīng)用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組結(jié)腸組織病理學(xué)觀察 見圖1。治療2周后，模型組大鼠結(jié)腸黏膜充血、水腫，皺襞減少，可見潰瘍，腸管增粗，腸壁變薄，大量炎癥細(xì)胞浸潤，外壁與外周組織粘連；針灸組和溫脾補腎方組結(jié)腸黏膜充血、水腫減輕，潰瘍減輕，腸壁變厚，炎癥細(xì)胞減少，少量組織粘連；聯(lián)合組未見結(jié)腸黏膜充血、水腫、潰瘍和組織粘連，少量炎細(xì)胞浸潤。

圖1 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)觀察（HE染色，200倍）

2.2 各組炎癥因子比較 見表1。針灸組、溫脾補腎方組及聯(lián)合組VIP、TNF-α及IL-6水平均明顯低于模型組，且聯(lián)合組優(yōu)于針灸組和溫脾補腎方組（P＜0.05）。

表1 各組 VIP、TNF-α 及 IL-6 水平比較（μg/L，±s）

表1 各組 VIP、TNF-α 及 IL-6 水平比較（μg/L，±s）

與模型組比較，*P＜0.05；與針灸組比較，△P＜0.05；與溫脾補腎方組比較，▲P＜0.05。 下同。

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2.3 各組氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 見表2。針灸組、溫脾補腎方組及聯(lián)合組SOD和GSH-PX水平明顯高于模型組，而LPO水平明顯低于模型組。聯(lián)合組指標(biāo)優(yōu)于針灸組和溫脾補腎方組（P＜0.05）。

表2 各組SOD、LPO和GSH-PX水平比較（±s）

表2 各組SOD、LPO和GSH-PX水平比較（±s）

組 別 n GSH-PX（μg/L）SOD（IU/mL） LPO（mmol/L）模型組 10 0.18±0.04針灸組 10 0.26±0.07*溫脾補腎方組 10 0.28±0.08*47.21±3.85 12.17±1.89 63.17±4.23* 8.48±1.96*65.04±4.38* 8.13±1.78*聯(lián)合組 10 0.49±0.11*△▲87.22±5.03*△▲ 5.21±1.37*△▲

3 討 論

潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病主要與腸道菌群紊亂、感染、遺傳易感性、腸黏膜免疫異常等因素有關(guān)，但其確切病因和發(fā)病機制尚未完全闡明。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為潰瘍性結(jié)腸炎屬于“泄瀉”“痢疾”的范疇，多由情志失調(diào)、飲食不節(jié)、感受外邪引起，多存在脾氣虛弱、脾氣鍵運，導(dǎo)致清濁不分，導(dǎo)致泄瀉［9］。潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生泄瀉，易引起患者的氧化應(yīng)激，炎癥介質(zhì)特別是異常的細(xì)胞因子可加刺激腸黏膜，加重疾病，TNF-α、IL-6高表達(dá)可促進炎癥反應(yīng)。血管活性腸肽為腸神經(jīng)系統(tǒng)抑制性遞質(zhì)，可調(diào)節(jié)腸道平滑肌的舒張，促進胃腸道腺體分泌，抑制腸道蠕動，與潰瘍性結(jié)腸炎病情密切相關(guān)［10-11］。西醫(yī)治療主要是消除患者癥狀，柳氮磺吡啶是治療急性潰瘍性結(jié)腸炎的常見藥物，可抑制抗體、自然殺傷細(xì)胞，起到治療疾病的作用。因此本研究通過比較炎癥因子和氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化，觀察針灸聯(lián)合溫脾補腎方對急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血管活性腸肽、血清腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素水平的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，治療2周后，模型組大鼠結(jié)腸黏膜充血、水腫，皺襞減少，可見潰瘍，腸管增粗，腸壁變薄，大量炎癥細(xì)胞浸潤，外壁與外周組織粘連；針灸組和溫脾補腎方組結(jié)腸黏膜充血、水腫減輕，潰瘍減輕，腸壁變厚，炎癥細(xì)胞減少，少量組織黏連；聯(lián)合組未見結(jié)腸黏膜充血、水腫、潰瘍和組織粘連，少量炎細(xì)胞浸潤，提示針灸和溫脾補腎方均可改善急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜組織，且針灸聯(lián)合溫脾補腎方治療效果優(yōu)于單個治療。與針灸天樞和足三里穴可傳導(dǎo)精氣，宣通經(jīng)脈，溫脾補腎方溫補脾腎、清熱解毒功效，可針對急性潰瘍性結(jié)腸炎標(biāo)本兼治有關(guān)［11］。試驗組 VIP、TNF-α 及IL-6水平均明顯低于模型組，且聯(lián)合組優(yōu)于針灸組和溫脾補腎方組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示針灸聯(lián)合溫脾補腎方治療急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠可降低炎癥反應(yīng)。溫脾補腎方方中黃芩清熱燥濕、涼血解毒，黃連清熱燥濕，具抗炎和解熱作用，枸杞子補肝益腎，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，熟地黃具有滋陰養(yǎng)血補虛、益精生髓，薏苡仁健脾和胃，菟絲子補腎益精，桑寄生補肝腎強筋骨，白芍養(yǎng)肝斂陰、和胃止痛，枳殼瀉脾壅滯、調(diào)中焦運化，香附理氣和胃止痛，延胡索活血、行氣、止痛，黃芪健脾補中、益衛(wèi)固表，山藥健脾和胃，白術(shù)固表止汗消五谷，茯苓利水滲濕，甘草調(diào)和諸藥藥性，全方共奏溫補脾腎、清熱解毒功效［12-13］。溫脾補腎方具有抗炎作用，降低中性粒細(xì)胞，對病原體具有殺滅作用，降低炎癥反應(yīng)［14］。試驗組VIP、TNF-α及IL-6水平均明顯低于模型組，且聯(lián)合組優(yōu)于針灸組和溫脾補腎方組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示針灸聯(lián)合溫脾補腎方治療急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠可改善氧化應(yīng)激指標(biāo)。溫脾補腎方方中生地黃、白芍等抑制脂質(zhì)過氧化、清除機體自由基，抗氧化作用有關(guān)［15］。針灸聯(lián)合溫脾補腎方治療急性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠可改善結(jié)腸黏膜，降低炎癥反應(yīng)，改善氧化應(yīng)激指標(biāo)。

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