蜂膠醇提物及其單體的抗氧化、降血糖作用研究*

★ 劉雯 文萍* 張紅梅 盧仁軍 何小群 呂武清（.江西省中醫(yī)藥研究院 南昌330046；.江西中醫(yī)藥大學 南昌 330004）

蜂膠是由蜜蜂從植物新生枝腋芽處、花蕾處、創(chuàng)傷處采集的樹脂類物質，再注入其腺體分泌物，經加工轉化而成的膠狀物質。已有研究顯示，蜂膠具有良好的抗氧化活性，其作用機制主要是通過直接或間接調節(jié)機體活性氧（ROS）的途徑來調節(jié)體內氧化-還原平衡，且通過其他途徑調節(jié)多種酶的活性及其含量，發(fā)揮抗氧化活性；而蜂膠有效抑制糖尿病動物模型的血糖升高的主要作用機制與其抗氧化、增強免疫力的能力密不可分［1-3］。蜂膠現已被廣泛應用于藥品、食品、化妝品及保健品等行業(yè)領域，為進一步研究蜂膠的生物活性，有效利用蜂膠，我們在前期研究基礎上，對蜂膠醇提物及其分離單體進行抗氧化、抗炎等方面的初步藥效學考察。

1 材料

1.1 儀器80-2臺式低速離心機（上海手術器械廠）；紫外分光光度計（日本島津UV-2401pc/2450）；HH-4數顯恒溫水浴鍋（金壇市江南儀器廠）；電子天平（杭州友恒稱重設備有限公司12001）；ST-360酶標儀（上海科華實驗系統有限公司MB0703569）；快速混勻器（江蘇新康醫(yī)療器械有限公司XK80-A）；One Touch Ⅱ血糖儀（德國羅氏診斷有限公司 GC01859246）。

1.2 實驗藥品及試劑蜂膠醇提物，由江西省中醫(yī)藥研究院新藥開發(fā)中心提供，使用前按照1:1比例用淀粉混勻，冷凍，打粉備用；白楊素，喬松素，高良姜素（均由江西省中醫(yī)藥研究院新藥開發(fā)中心，經鑒定純度均≥98%）；角叉菜膠（福建省綠麒食品膠體有限公司，批號:LV-R0320）；MDA試劑盒、SOD試劑盒，NO試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號分別為20140901和20130418;20140906；20141011）；阿司匹林（阿斯利康制藥有限公司 批號：1206102）；阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號J20130078）；拜糖平（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號BJ16338）；四氧嘧啶（SIGMAALORICH，批號BCBK3974V）；血糖試紙（德國羅氏診斷有限公司，批號：23470732）；氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號C113050802）；5%葡萄糖注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號B13092002）。

2 動物分組及劑量設置

昆明種小鼠，雌雄各半，清潔級，體重18～22g，購于江西省中醫(yī)藥大學動物實驗中心，動物合格證編號SCXK（贛）2011-0001。

SD大鼠，雌雄各半，清潔級，體重170～200g，購于湖南省斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2013-0004，編號No：43004700009917。

昆明種小鼠，雄性，清潔級，體重14～20g，購于江西省中醫(yī)藥大學動物實驗中心，動物合格證編號SCXK（贛）2011-0001。

按照體重隨機分組，分為正常對照組（Normal，N）、模型對照組（Model，M）、陽性藥對照組（Aspirin，A或Glucobay，GL）、蜂膠醇提物組、白楊素組（Chrysin，C）、高良姜素組（Galangin，G）、喬松素組（Pinocembrin，P）共七組，每組8只動物，正常喂養(yǎng)。

蜂膠醇提組、C組、G組、P組均以小鼠0.6g/kg為實驗劑量，以上藥物均用1%CMC-Na溶液混勻，備用。大鼠給藥劑量按照折算系數w=0.7折算。

以上給藥量均為生藥量，給藥體積為10mL/kg，N組和M組給予等體積蒸餾水，每天上午ig.給藥。

3 實驗方法

3.1 角叉菜膠致小鼠足趾腫脹模型［4］選用昆明種小鼠，雌雄各半。連續(xù)給藥7d，第6d禁食不禁水12h，第7d給藥30min后給小鼠的右足下注射1%的卡拉膠0.025mL/只，4h后處死動物并眼眶取血，全血于4℃冰箱冷藏靜置4h，取上清，按照MDA測試盒說明書操作測量吸光度。按照下式計算小鼠血清中MDA含量：

3.2 角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型［5］選用SD大鼠，雌雄各半。連續(xù)灌胃給藥6天，每天1次，實驗前用棉線測量各鼠的左后足周長，末次給藥40min后，在大鼠左后足趾皮下進針，注射1%角叉菜膠溶液致炎（0.05mL/100g），爾后處死大鼠，取血清，按照MDA、SOD試劑盒說明書，測定大鼠血清中上述生化指標的含量，根據結果觀察蜂膠醇提物及其分離單體對大鼠足趾腫脹模型的影響。

3.3 四氧嘧啶致小鼠高血糖模型［6］選取雄性昆明種小鼠，按照體重隨機選擇8只作為正常對照組，其他小鼠禁食（不禁水）24h后，給予腹腔注射四氧嘧啶200mg/kg，注射后5～10h給予5%葡萄糖水，24h給予5%葡萄糖水各一次；注射后第4天，禁食不禁水5h，剪尾取血，測定小鼠空腹血糖值，判定其空腹血糖值在10～25mmol/L范圍內的即為高血糖模型小鼠。選取高血糖模型小鼠48只，隨機分組。

每天灌胃給藥1次，正常對照組和模型對照組給以等體積的蒸餾水，連續(xù)給藥6天，第4天禁食不禁水5h，給藥20min后剪尾取血，測空腹血糖值，第6天禁食不禁水5h，給藥20min后剪尾取血，測定血糖值。

4 統計方法

5 實驗結果

5.1 蜂膠醇提物及分離單體對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹模型的影響實驗結果如表1所示，M組與N組比較，MDA含量升高，且P＜0.05，有差異，顯示模型組因注射角叉菜膠引起血清中MDA含量升高，造模成功；C、P與蜂膠醇提物組與M組比較，MDA含量明顯下降，且P＜0.01，有顯著性差異，G組與M組比較，數值下降且P＜0.05，有差異，顯示白楊素組、高良姜素組、喬松素組與蜂膠醇提物組均能降低模型小鼠血清中的MDA含量。以上結果提示，蜂膠醇提物及其分離單體白楊素、高良姜素、喬松素具有抑制因注射角叉菜膠引起的小鼠足趾腫脹模型中血清MDA含量上升的作用。

表1 蜂膠醇提物及分離單體對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹模型血清中MDA含量的影響（，n=8）

表1 蜂膠醇提物及分離單體對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹模型血清中MDA含量的影響（，n=8）

注：與Normal組比較，#P＜0.05；與Model組比較，*P＜0.05；與Model組比較**P＜0.01。

組別 小鼠給藥劑量（g生藥量/kg體重）給藥體積/mL·kg-1 MDA含量/nmol·L-1 Normal0014.95±2.833 Model0019.05±1.359#Chrysin0.61013.329±1.095**Galangin0.61013.989±6.067*Pinncembrin0.61013.499±3.112**蜂膠醇提物0.61011.910±0.934**

5.2 蜂膠醇提物及其分離單體對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型的影響MDA含量實驗結果如表2所示，M組與N組比較，血清中MDA含量升高，且P＜0.05，有差異，表示模型組因注射角叉菜膠引起血清中MDA含量升高，造模成功；C、G、P和蜂膠醇提物組與M組比較，血清中MDA含量均有下降，其中C、G和蜂膠醇提物組P＜0.05，有差異，而P組P＜0.01，有顯著性差異，提示蜂膠醇提物及其分離單體白楊素、高良姜素、喬松素，均具有抑制大鼠足趾腫脹模型中血清MDA含量升高的作用，其中喬松素的作用更為顯著。

SOD活性實驗結果如表2所示，M組與N組比較，血清中SOD活性降低，且P＜0.01，有顯著性差異，表示造模成功；A組與M組比較，數值升高，且P＜0.05，有差異，表示阿司匹林組對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型有升高SOD酶活性的作用；C、G、P和蜂膠醇提物組與M組比較，數值均上升，且P＜0.05，有差異，表示蜂膠醇提物及其三個分離單體對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型均具有升高SOD酶活性的作用。

表2 蜂膠醇提物及其分離單體對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型的影響（，n=8）

表2 蜂膠醇提物及其分離單體對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型的影響（，n=8）

注：與Normal組比較，##P＜0.01；與Model組比較*P＜0.05。

組別 大鼠給藥劑量（g生藥量/kg體重） 給藥體積/mL·kg-1MDA含量/nmol·L-1SOD活力/U·mL-1 Normal0044.79±7.68680.11±39.73 Model0061.90±13.93#14.57±10.09##Aspirin0.61049.17±7.758*50.10±26.89*Chrysin0.421040.33±8.772*62.15±30.31*Galangin0.421040.67±11.64*56.80±33.08*Pinncembrin0.421040.21±10.71**66.42±37.67*蜂膠醇提物0.421043.33±11.55*79.24±36.52*

5.3 蜂膠醇提物及分離單體對四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的影響實驗結果如表3所示，M組與N組比較，空腹血糖值在4天、6天均明顯高于N組，且P＜0.01，有顯著差異，表示模型組因注射四氧嘧啶引起高血糖，造模成功；GL組與M組比較，血糖值在4天、6天均明顯下降，且P＜0.05、P＜0.01，有比較差異，表示拜糖平組對四氧嘧啶所致高血糖有抑制作用；C、G、P及蜂膠醇提物組與M組比較，血糖值在4天、6天均明顯下降，且C、G、蜂膠醇提物組的P＜0.05，有差異，其中P組的P＜0.01，有顯著性差異，表示蜂膠醇提物及其分離單體白楊素、高良姜素、喬松素均具有抑制四氧嘧啶所致高血糖的作用，其中喬松素的作用更為明顯。

表3 蜂膠醇提物及分離單體對四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的影響（，n=8）

表3 蜂膠醇提物及分離單體對四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的影響（，n=8）

注：與Normal組比較，##P<0.01；與Model組比較，*P<0.05；與Normal組比較**P<0.01。

空腹血糖值/mmol·L-1 4天6天Normal009.13±0.748.67±0.60 Model0016.14±4.22##17.03±4.40##Glucobay0.2251012.40±1.90*11.78±1.60**Chrysin0.61012.41±1.31*13.27±0.88*Galangin0.61012.57±1.69*13.63±1.74*Pinncembrin0.61010.96±1.85**10.63±1.38**蜂膠醇提物0.61012.31±1.85*12.65±1.51*組別 小鼠給藥劑量（g生藥量/kg體重）給藥體積/mL·kg-1

6 討論

前期研究結果顯示［7］，在蜂膠提取國標GB/T24283-2009的基礎上增加喬松素定量測定指標，并經過不斷優(yōu)化的蜂膠制備新工藝條件穩(wěn)定、方法可行，浸膏得率高，總黃酮及白楊素、高良姜素和喬松素的量高。在此基礎上，我們對使用該提取工藝得到的蜂膠醇提物及分離單體白楊素、高良姜素、喬松素，在抗氧化、降血糖方面進行初步的藥效學探討，實驗結果討論如下。

實驗結果顯示，蜂膠醇提物及其三個分離單體白楊素、高良姜素和喬松素均能夠不同程度的抑制炎癥動物模型中脂質過氧化產物MDA含量升高、升高超氧化物歧化酶SOD的活力，降低高血糖動物模型的空腹血糖值，其中喬松素降低空腹血糖值的作用較蜂膠醇提物及其他兩個單體更為強烈。

上述結果說明新工藝下的蜂膠醇提物及其分離單體均具有一定的抗氧化活性和降血糖作用，且喬松素在降血糖方面的作用較其他兩個單體成分作用更為顯著，這進一步肯定了在原有蜂膠提取國標上增加喬松素作為含量測定指標的必要性，并為將來對蜂膠醇提物及其分離單體的深入研究提供了實驗基礎。目前對蜂膠單體成分的研究多集中在阿替匹林C、咖啡酸苯乙酯、白楊素、高良姜素、槲皮素、染料木素等等物質上，對喬松素的研究較少，而值得注意的是，蜂膠中成分的含量與種類具有極其明顯的地域特性，如阿替匹林C就是巴西蜂膠的特有標志性成分，現有研究顯示其具有良好的抗氧化活性和抗炎活性［8］。我國國土廣闊，各個地區(qū)的氣候條件、森林資源都天差地別，各個地區(qū)的蜂膠所含成分也會因此有所差別，因此，研究國產蜂膠中的主要成分，制定其標準提取工藝流程，有利于蜂膠的規(guī)范化使用及進一步開發(fā)利用。