MSA、CEA、NLR聯(lián)合檢測對小細胞肺癌的診斷及鑒別診斷效能

譚立明，鄭葳，付慧穎，蒙儀妹，管曉琳，吳思凡，隆婷婷，王巧花，吳洋，曾婷婷，田永建，余建林，陳娟娟，李華，曹莉萍

(1南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江西南昌 330006；2南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院)

MSA、CEA、NLR聯(lián)合檢測對小細胞肺癌的診斷及鑒別診斷效能

譚立明1，鄭葳2，付慧穎2，蒙儀妹2，管曉琳2，吳思凡2，隆婷婷2，王巧花2，吳洋1，曾婷婷1，田永建1，余建林1，陳娟娟1，李華1，曹莉萍1

(1南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江西南昌 330006；2南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院)

目的觀察血清抗紡錘體抗體(MSA)、癌胚抗原(CEA)及全血中性粒細胞/淋巴細胞(NLR)聯(lián)合檢測對小細胞肺癌(SCLC)的診斷和鑒別診斷效能。方法SCLC患者53例(SCLC組)、肺腺癌(LAC)患者33例(LAC組)、肺鱗癌(LSC)患者29例(LSC組)、胃癌(GC)患者16例(GC組)、肝癌(HC)患者14例(HC組)、大腸癌(IC)患者13例(IC組)、鼻咽癌(NC)患者12例(NC組)，另選健康體檢者45例(對照組)，采用間接免疫熒光法檢測血清MSA，化學(xué)發(fā)光法檢測血清CEA，電阻抗法測算全血NLR，分析MSA、CEA、NLR單獨和聯(lián)合檢測診斷SCLC的敏感度、特異度。結(jié)果與其余組比較，SCLC組血清MSA陽性率高；與SCLC組比較，LAC組血清CEA、全血NLR陽性率高，對照組血清CEA、全血NLR陽性率低；P均<0.05。NLR單獨檢測診斷SCLC的靈敏度最高(43.40%)，MSA單獨檢測診斷的特異度最高(96.58%)。MSA+CEA+NLR三者聯(lián)合檢測診斷SCLC的敏感度(并聯(lián)，81.84%)、特異度(串聯(lián)，100.00%)最高。MSA與CEA一致性較高(κ=0.654)；MSA與NLR一致性中等(κ=0.451)。結(jié)論血清MSA、CEA及全血NLR聯(lián)合檢測有助于SCLC的診斷和鑒別診斷。

小細胞肺癌；抗紡錘體抗體；癌胚抗原；中性粒細胞；淋巴細胞

全球每年診斷肺癌病例高達180萬，其中小細胞肺癌(SCLC)占15%～17%[1]，SCLC是一類早期轉(zhuǎn)移播散、侵襲力強、生長迅速的肺癌，多數(shù)患者由于前期癥狀不典型，易延誤診治，導(dǎo)致患者的5年生存率僅為6.4%[2]，因此SCLC的早期診斷和治療十分重要。目前，對SCLC的常規(guī)臨床診斷方法有影像學(xué)、病理學(xué)、血清學(xué)等，但診斷率均不高。有研究[3]表明，抗紡錘體抗體(MSA)與SCLC有著很高的相關(guān)性。癌胚抗原(CEA)檢測在臨床中已得到廣泛應(yīng)用，其對多種類型的腫瘤病變有較高的診斷價值[4]。中性粒細胞與淋巴細胞比值(NLR)作為反映機體免疫狀態(tài)和炎癥反應(yīng)程度的常見指標，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。本研究對SCLC患者血清MSA、CEA及全血NLR進行檢測或測算，并觀察三者聯(lián)合檢測對SCLC的診斷和鑒別診斷效能。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年7月～2017年7月南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的SCLC患者53例(SCLC組)，男38例、女15例，年齡34～79(58.0±9.6)歲，診斷參考美國NCCN的SCLC臨床實踐指南[6]；肺腺癌(LAC)患者33例(LAC組)，男27例、女11例，年齡36～78(60.0±11.2)歲；肺鱗癌(LSC)患者29例(LSC組)，男21例、女8例，年齡40～81(62.0±6.4)歲；胃癌(GC)患者16例(GC組)，男11例、女5例，年齡44～71(63.0±7.8)歲；肝癌(HC)患者14例(HC組)，男10例、女4例，年齡38～73(56.0±12.4)歲；大腸癌(IC)患者13例(IC組)，男9例、女4例，年齡42～71(57.0±10.2)歲；鼻咽癌(NC)患者12例(NC組)，男7例、女5例，年齡39～72(58.0±8.6)歲。另選健康體檢者45例(對照組)，男21例、女9例，年齡25～69(54.0±10.6)歲。納入標準：①肺癌患者確診為原發(fā)性肺癌，有明確病理分型；②所有患者診斷明確，病歷資料完善；③入選患者無自身免疫性疾病及合并其他癌癥；④健康對照者無腫瘤或疑似腫瘤診斷；⑤健康對照者心、肺、肝、腎功能基本正常。符合以上所有條件者予以納入。排除標準：①非原發(fā)性腫瘤或腫瘤診斷不明者；②合并心、肺、肝、腎等疾病者；③有良、惡性腫瘤病史及近期應(yīng)用化學(xué)藥物和免疫抑制劑者；④有明確感染證據(jù)者；⑤不符合納入標準者。滿足以上任何一條件者即排除。所有入選對象一般資料無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性。所有標本均在患者知情同意條件下獲得，并獲得南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會批準許可。

1.2 血清MSA、CEA檢測及全血NLR測算 所有入選對象均采集空腹靜脈血標本2份，一份3 mL置于不加抗凝劑的管中，以1 026×g離心15 min后備用(用于檢測MSA和CEA)；另一份2 mL標本置于EDTA-K2真空管中直接使用(用于檢測NLR)。血清MSA檢測采用間接免疫熒光法，試劑由德國歐蒙公司提供，MSA抗體采用Hep-20-10細胞株，檢測儀器為全自動間接免疫熒光操作一體機，型號Sprinter XL，產(chǎn)自德國歐蒙公司；血清CEA檢測采用化學(xué)發(fā)光法，試劑盒由美國西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品限公司提供，檢測儀器為ADVIA Centaur全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；NLR測算采用電阻抗法，檢測儀器為SISMEX全自動血液分析儀(型號:XE-2100)，進行全血中性粒細胞計數(shù)(N)和淋巴細胞計數(shù)(L)，通過N與L比值計算出NLR。以上各檢測步驟嚴格按本室SOP操作。

1.3 結(jié)果判定標準 MSA陽性判定標準參照說明書，CEA的正常值上限為5 ng/mL，NLR的正常上限值為3.86，檢測時指標水平高于正常上限則表明其出現(xiàn)異常判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以例(%)表示，計量資料數(shù)據(jù)正態(tài)性采用K-S法檢驗，方差齊性采用Levene′s法檢驗。組間單因素分析采用χ2檢驗。陽性率統(tǒng)計依照結(jié)果判定標準進行每組計數(shù)，計算出陽性比例。對計量資料作受試者特征曲線(ROC)，計算ROC曲線下面積(AUC)以及95%置信區(qū)間(95%CI)。臨床指標評價依據(jù)結(jié)果判定標準對每組陰性樣本和陽性樣本進行計數(shù)，串聯(lián)評價(僅在評價指標都呈陽性下判定為陽性)；并聯(lián)評價(評價指標至少滿足一項呈陽性即判定為陽性)。CEA、NLR與MSA之間采用一致性分析計算Kappa值。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組MSA、CEA、NLR陽性率比較 結(jié)果見表1。

2.2 MSA、CEA、NLR檢測結(jié)果ROC曲線分析 以其他癌癥組為對照，血清MSA、CEA及全血NLR診斷SCLC的AUC分別為0.783、0.664、0.655，95%CI分別為0.710～0.857、0.579～0.750、0.567～0.742，P均<0.05。

表1 各組MSA、CEA、NLR陽性率比較(%)

注：與其余組比較，*P<0.05；與SCLC組比較，△P<0.05。

2.3 MSA、CEA、NLR單獨檢測診斷SCLC的敏感度、特異度、陽性似然比、陰性似然比、約登指數(shù) 結(jié)果見表2。由表2可知，NLR單獨檢測診斷SCLC的靈敏度最高，MSA的特異度最高。

表2 MSA、CEA、NLR單獨檢測診斷SCLC的敏感度、特異度、陽性似然比、陰性似然比、約登指數(shù)

2.4 MSA、CEA、NLR聯(lián)合檢測診斷SCLC的敏感度、特異度 結(jié)果見表3。由表3可知，MSA+CEA+NLR三者聯(lián)合檢測診斷SCLC的敏感度(并聯(lián)，81.84%)、特異度(串聯(lián)，100.00%)最高。

表3 MSA、CEA、NLR聯(lián)合檢測診斷SCLC的敏感度、特異度(%)

2.5 MSA、CEA、NLR檢測診斷SCLC的一致性分析結(jié)果 SCLC組中MSA、CEA檢出率比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)，兩者有較高的一致性(κ=0.656)；MSA、NLR檢出率比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)，兩者有中度一致性(κ=0.451)。

3 討論

肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率及病死率最高的惡性腫瘤，SCLC是一種具有神經(jīng)內(nèi)分泌特性、惡性程度最高的肺癌，其與一些少見的屬于自身免疫性疾病的神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征有較高的相關(guān)性。大部分SCLC患者由于較早出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移和血行轉(zhuǎn)移，確診時病癥已處于中晚期，從而失去手術(shù)治療指征，因此SCLC的早期診斷十分重要。研究[7]表明，在一些無自身免疫系統(tǒng)疾病的早期SCLC患者以及將發(fā)展為SCLC患者的體內(nèi)，免疫系統(tǒng)就已表現(xiàn)出癥狀產(chǎn)生了多種自身抗體，這說明SCLC的發(fā)生發(fā)展與自身免疫反應(yīng)中自身抗體的產(chǎn)生有一定聯(lián)系；而在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，這些自身免疫反應(yīng)往往伴隨異常炎癥反應(yīng)，由此提示可對這些自身抗體指標以及炎癥反應(yīng)指標進行檢測以便SCLC的早期診斷，如果在未發(fā)展為SCLC的時候進行干涉或在早期診斷后進行治療，將有希望對SCLC治療方法的改進提供方向，并提高患者診斷率。

研究[8]表明，SCLC的發(fā)展與煙草暴露密切相關(guān)，煙草煙霧所含的多種致癌物會引起體內(nèi)關(guān)鍵基因發(fā)生突變，從而引發(fā)細胞正常生長控制機制失調(diào)。真核生物細胞通過有絲分裂增殖，紡錘體微管在分裂過程中有重要作用，研究[9]表明SCLC的高分裂腫瘤細胞紡錘體相關(guān)蛋白在分裂期的調(diào)節(jié)上發(fā)生異常改變，以致刺激機體產(chǎn)生特異度自身抗體MSA，在有關(guān)學(xué)者的臨床研究中，SCLC患者中MSA檢測特異度達95.19%。作為一種分裂期特異結(jié)構(gòu)自身抗體，MSA影響細胞分裂異常可能是SCLC的發(fā)病機制之一，對于SCLC中的早期檢測具有一定的臨床意義[3]。SCLC患者體內(nèi)由于自身免疫反應(yīng)的發(fā)生產(chǎn)生了多種自身抗體，這些自身免疫應(yīng)答過程中往往伴隨著炎癥反應(yīng)，而全身炎癥反應(yīng)與腫瘤發(fā)生及腫瘤進展關(guān)系密切[7]。Balkwill等[10]認為，機體中一些炎癥細胞(中性粒細胞、淋巴細胞等)通過釋放炎癥介質(zhì)和趨化因子促進腫瘤生長、進展，并抑制宿主的免疫系統(tǒng)，通過減少宿主體內(nèi)的炎癥細胞介質(zhì)或阻斷其作用通路抑制腫瘤的進展。

大量研究[11～13]表明，NLR與多種腫瘤預(yù)后關(guān)系密切，但有關(guān)其在腫瘤早期診斷中的研究少見。中性粒細胞可促進腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[14]，淋巴細胞的減少可作為機體腫瘤免疫功能低下的反映指標[15]。因此，NLR作為反映腫瘤患者抗腫瘤免疫狀態(tài)和機體炎性的指標，將其與腫瘤發(fā)生過程中自身抗體MSA的水平變化聯(lián)合監(jiān)測，可以更好地反映機體免疫狀態(tài)，從而為判斷腫瘤分型以及患病程度提供參考。

CEA為臨床檢測中常見的原發(fā)性肺癌標志物，其司職腫瘤細胞與基質(zhì)膠原間的黏附反應(yīng)，對控制腫瘤的生長和浸潤轉(zhuǎn)移有重要作用。但單一標志物對SCLC的診斷尚缺乏足夠的敏感度，且其在不同病理分型中具有一定的差異性，如在SCLC患者MSA、CEA、NLR三項指標單獨檢測中，CEA靈敏度最低，僅為28.30%。有研究表明[16]，相比單項檢測NLR，在肺癌中聯(lián)合檢測CEA和NLR，AUC由0.581上升為0.667，診斷特異度有所提升。研究[17]表明，CEA水平在長期吸煙者體內(nèi)較正常人高，而SCLC的發(fā)生發(fā)展與煙草暴露密切相關(guān)[7]，CEA表達于細胞中，通過影響細胞的增殖、遷移、黏附、極化、凋亡等激活淋巴細胞、轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞信號、調(diào)節(jié)腫瘤細胞生長，與真核生物有絲分裂增殖存在一定聯(lián)系，這與細胞分裂異常MSA的產(chǎn)生或許存在一定的相關(guān)性。

本研究顯示，與其余組比較，SCLC組血清MSA陽性率高；與SCLC組比較，LAC組血清CEA、全血NLR陽性率高，對照組血清CEA、全血NLR陽性率低。NLR單獨檢測診斷SCLC的靈敏度最高，MSA單獨檢測診斷的特異度最高。MSA+CEA+NLR三者聯(lián)合檢測診斷SCLC的敏感度(并聯(lián))、特異度(串聯(lián))最高。MSA與CEA一致性較高，MSA與NLR一致性中等。上述結(jié)果提示聯(lián)合檢測MSA、CEA、NLR能夠彌補單項檢測的不足，提高特異度和靈敏度，從而提升對SCLC的診斷價值。

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ApplicationvalueofdetectionofperipheralMSA,CEA,andNLRindiagnosisanddifferentialdiagnosisofsmallcelllungcancer

TANLiming1,ZHENGWei,FUHuiying,MENGYimei,GUANXiaolin,WUSifan,LONGTingting,WANGQiaohua,WUYang,ZENGTingting,TIANYongjian,YUJianlin,CHENJuanjuan,LIHua,CAOLiping

(1TheSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo observe the application value of detection of serum anti-spindle antibodies (MSA), carcinoembryonic antigen (CEA), whole blood neutrophils/lymphocytes (NLR) in diagnosis and differential diagnosis of small cell lung cancer (SCLC).MethodsFifty-three patients with SCLC (SCLC group), 33 patients with lung adenocarcinoma (LAC) (LAC group), 29 patients with lung squamous cell carcinoma (LSC) (LSC group), 16 patients with gastric carcinoma (GC) (GC group), 14 patients with hepatic carcinoma (HC) (HC group), 13 patients with colorectal cancer (CC) (group CC), 12 patients with nasopharyngeal carcinoma (NC) (NC group), and 45 healthy controls (control group) were selected. Serum MSA was detected by indirect immunofluorescence method. Serum CEA was detected by chemiluminescence. Whole blood NLR was measured by electrical impedance method. The sensitivity and specificity of single and combined detection of serum MSA, CEA and whole blood NLR were analyzed.ResultsCompared with the other groups, the positive rate of serum MSA in the SCLC group was high. Compared with the SCLC group, the positive rates of serum CEA and whole blood NLR in the LAC group were high, while the positive rates of CEA and whole blood NLR in the control group were lower (allP<0.05). The sensitivity of detecting NLR alone in diagnosis of SCLC was the highest (43.40%), while specificity of detecting MSA alone was the highest (96.58%). The sensitivity of combined detection of MSA+CEA+NLR in diagnosis of SCLC was the highest (in parallel, 81.84%), and the specificity was the highest (in series, 100.00%). MSA and CEA had higher consistency (κ=0.654), and MSA was moderately consistent with NLR (κ=0.451).ConclusionThe combined detection of serum MSA, CEA, and whole blood NLR is helpful for the diagnosis and differential diagnosis of SCLC.

small cell lung cancer; anti-spindle antibody; carcinoembryonic antigen; neutrophils; lymphocytes

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.47.004

R734.2

A

1002-266X(2017)47-0013-04

江西省科技計劃項目(20151BBI90047，20171BAB205076)。

譚立明(1963-)，男，教授，主任技師，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向為自身免疫病的病因和抗體檢測等。E-mail: ndefy84029@ncu.edu.cn

2017-08-27)