紫外分光光度法測(cè)定蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量

王洪健，許銀葉，羅小寶

總蒽醌為游離蒽醌、結(jié)合蒽醌、蒽酮、鞣質(zhì)、糖等蒽醌類化合物的總稱。常見的蒽醌類化合物母核上通常有酚羥基助色基團(tuán)，絕大多數(shù)蒽醌化合物均為有色晶體，顏色深淺與取代的助色基團(tuán)有關(guān)，助色基團(tuán)越多，顏色越深。顏色呈現(xiàn)為黃、橙、棕紅色和紫紅色等。故以前的蒽醌類化合物絕大部分用于染料方面[1]。蒽醌類化合物是天然醌類化合物中數(shù)量最多也是最重要的一類化合物[2]，在自然界植物中分布很廣[3]，主要分布于百合科的蘆薈，豆科的決明子[4]、番瀉葉，茜草科的茜草、鼠李，廖科的大黃、何首烏等[5]。此外，還存在于低等植物的代謝產(chǎn)物中。蘆薈屬多年生常綠肉質(zhì)植物，含有豐富的蒽醌類化合物，如蘆薈大黃素、蘆薈大黃素苷，均為蘆薈中主要活性成分，用途十分廣泛。隨著研究的深入，蘆薈抗菌消炎、健胃、減肥等功效逐漸顯現(xiàn)[6]，這與蘆薈中含有的總蒽醌成分具有抗氧化、抗衰老、促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)等作用有關(guān)。但蒽醌類成分的攝入亦會(huì)引發(fā)如消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的損害等一系列不良反應(yīng)[7-8]，這與總蒽醌的含量高低有關(guān)。市售的保健食品蘆薈軟膠囊深受消費(fèi)者喜愛，總蒽醌則是蘆薈軟膠囊中的主要有效成分，其含量必須控制在安全食用范圍內(nèi)，才可保證蘆薈軟膠囊的食用安全性及質(zhì)量，故對(duì)蘆薈中總蒽醌含量的研究逐漸受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。本研究建立總蒽醌的含量測(cè)定方法，采用紫外分光光度法測(cè)定蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量，旨在通過測(cè)定蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量，反映其有效成分的含量，獲得良好的分析結(jié)果?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器：TU-1810紫外可見分光光度計(jì)（北京普析）；ME55電子天平（梅特勒—托利多）。

1.1.2 試藥：1,8-二羥基蒽醌標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；甲醇、過氧化氫（30%）、鹽酸、醋酸鎂試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精密稱取1,8-二羥基蒽醌標(biāo)準(zhǔn)品10.00mg，用醋酸鎂—甲醇溶解定容至25mL，其中醋酸鎂—甲醇溶液濃度為0.5g/100mL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：最大吸收波長(zhǎng)的確定：用紫外分光光度計(jì)在300～600nm下掃描，樣品及標(biāo)準(zhǔn)品均在510nm處有最大吸收波長(zhǎng)，故確定510nm為最大吸收波長(zhǎng)，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：用移液管吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入醋酸鎂—甲醇溶液，稀釋配制成濃度為20、40、80、100、150、200μg/mL的標(biāo)液。以對(duì)應(yīng)的醋酸鎂—甲醇溶液為空白對(duì)照，分別測(cè)定510nm波長(zhǎng)處的吸光度。以濃度為縱坐標(biāo)，吸光度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 樣品的處理：取樣品1g，精密稱定，置于150mL回流瓶中，加入50mL甲醇，90℃水浴回流1h，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶，并用甲醇定容到刻度。過濾棄去初濾液，取10mL濾液，加入到150mL回流瓶，水浴蒸干，加入20mL水溶解，加入3.0mL 30%過氧化氫，0.50mL鹽酸/水（1:1），90℃水浴回流30min，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至125mL分液漏斗中，加入乙醚20mL提取2～3次，10mL水洗2次（棄水液），取醚層揮干，殘?jiān)哟姿徭V—甲醇液溶解定容到100mL。測(cè)定510nm波長(zhǎng)處的吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中總蒽醌的含量，計(jì)算，即得。

2 結(jié) 果

2.1 最佳檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇及標(biāo)準(zhǔn)曲線線性的繪制 紫外掃描結(jié)果顯示，總蒽醌在510nm 處的吸收值最大，即510nm為總蒽醌的特征吸收峰值，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為510nm。以總蒽醌濃度和吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程：y＝204.24x+0.1182，R2＝0.9995，提示總蒽醌濃度在20～200μg/mL范圍內(nèi)，總蒽醌的濃度與吸光度之間具有良好的線性關(guān)系。見圖1。

圖1 總蒽醌標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of Total Anthraquinone

2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品1g，精密稱定，按照樣品的處理方法制備樣品溶液。每隔30min精密吸取樣品溶液3mL，測(cè)定其吸光度，共測(cè)定3h。結(jié)果顯示，樣品溶液顯色后，在3h內(nèi)穩(wěn)定，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.37%，穩(wěn)定性良好。

2.3 精密度試驗(yàn) 取樣品1g，精密稱定，按照樣品的處理方法制備。精密吸取樣品品溶液3mL，樣品平行測(cè)定6次。其RSD為0.56%，提示該方法精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取6份同批次樣品1g，精密稱定，按照樣品的處理方法制備制備6份樣品溶液。分別精密吸取6份供試品溶液3mL，依法測(cè)定。計(jì)算平均含量為37.85mg/100g，RSD為0.42%，提示該方法重復(fù)性較好。

2.5 回收率試驗(yàn) 稱取已知含量樣品1g，精密稱定，進(jìn)行3個(gè)水平的加標(biāo)試驗(yàn)，每個(gè)水平做3次平行試驗(yàn)，按1.2.3中方法處理，分別測(cè)定其總蒽醌含量。結(jié)果顯示，回收率為95.00%～102.50%，平均回收率為99.17%，RSD為2.27%。可滿足分析研究的需要，對(duì)蘆薈軟膠囊中總蒽醌提取有很好的適用性。見表1。

表1 樣品加樣回收率結(jié)果Table 1 The results of sample recovery rate

2.6 樣品測(cè)定 取6批蘆薈軟膠囊樣品，分別進(jìn)行測(cè)定其總蒽醌含量。結(jié)果顯示，蘆薈軟膠囊中總蒽醌含量在0.34～0.41mg/g范圍內(nèi)，其RSD范圍0.95%～2.03%，對(duì)蘆薈軟膠囊中總蒽醌測(cè)定有良好的適用性。見表2。

表2 樣品中總蒽醌含量測(cè)定結(jié)果Table 2 The results of determination of total anthraquinone content in samples

3 討 論

本研究采用紫外分光光度法測(cè)定蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量，總蒽醌在20～200μg/mL(R2=0.9995)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.17%，RSD為2.27%。應(yīng)用于檢測(cè)實(shí)際樣品，其RSD范圍0.95%～2.03%，檢測(cè)條件穩(wěn)定，加標(biāo)回收率高，變異系數(shù)較小，其精密度和重復(fù)性均較好，且樣品前處理簡(jiǎn)單，便于操作，成本低廉，故此方法可用于檢測(cè)蘆薈軟膠囊中總蒽醌的含量，為1種理想的含量測(cè)定方法，為蘆薈軟膠囊的生產(chǎn)提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。同時(shí)利于加強(qiáng)蘆薈軟膠囊保健品的質(zhì)量安全監(jiān)督。值得推廣應(yīng)用。

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