高效液相色譜測定古方生脈散制劑中人參皂甙的含量

蘇麗 劉鑫

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定古方生脈散中人參皂甙Rg1的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）為流動(dòng)相，檢測波長為203nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。人參皂甙Rg1在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。人參皂甙Rg1平均回收率分別為99.6%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于古方生脈散中人參皂甙Rg1的含量測定。

關(guān)鍵詞：古方生脈散；含量；測定

生脈散是治療氣陰兩虛證的常用方。生脈散由人參、麥門冬、五味子組成，方中人參補(bǔ)肺氣，生津液，為君；麥門冬養(yǎng)陰清肺而生津，為臣；北五味子斂肺止渴、止汗，為佐。三藥合用，共成補(bǔ)肺益氣，養(yǎng)陰生津之功。《醫(yī)方集解》記載：“人參甘溫，大補(bǔ)肺氣為君；麥冬止汗，潤肺滋水，清心瀉熱為臣，五味酸溫，斂肺生津，收耗散之氣為佐。蓋心主脈，肺朝百脈，補(bǔ)肺清心，則元?dú)獬涠}復(fù)，故曰生脈也。夏月炎暑，火旺克金，當(dāng)以保肺為主，清晨服此，能益氣而祛暑也?！比藚⒃磉笆巧}散主要成分之一。人參皂甙Rg1有擴(kuò)張腦血管、神經(jīng)保護(hù)、促智、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫、改善家兔心肌梗死后心功能、調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能、改善新陳代謝等作用[1-6]。本文采用高效液相法對古方生脈散中的人參皂甙Rg1的進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：優(yōu)普杜伯特UP-DBT-III實(shí)驗(yàn)室洗瓶機(jī)（杜伯特（北京）科技有限公司）；VWR天平防震墊（北京慧龍環(huán)科環(huán)境儀器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；YLC1620A高效液相色譜儀（河南鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）；RU超純水機(jī)（上海同田生物技術(shù)有限公司）；Milli-Q Direct水純化系統(tǒng)（上海力晶科學(xué)儀器有限公司）；DX-208恒溫水浴槽（北京長流科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：人參皂甙Rg1

1.4 試劑：三乙胺（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）、冰醋酸（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、甲醇（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、磷酸二氫銨（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、乙腈（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）。

1.5 試藥：古方生脈散

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動(dòng)相：乙腈——甲醇-水（8∶10∶82）為流動(dòng)相，檢測波長：203nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按人參皂甙Rg1峰計(jì)算應(yīng)不得低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4小時(shí)的人參皂甙Rg1對照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物適量，精密稱定，加15毫升甲醇回流提取1.5小時(shí)，水浴蒸干，殘?jiān)?0毫升水溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20毫升，合并正丁醇層，水浴蒸干，殘?jiān)?毫升甲醇溶解，濾過，濾液置10ml量瓶中，用少量甲醇溶液分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V人同一量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取人參皂甙Rg1對照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.59%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量人參皂甙Rg1對照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，人參皂甙Rg1在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的人參皂甙Rg1樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.81%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入人參皂甙Rg1對照品，按項(xiàng)下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“含量測定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.6%，RSD為0.67%。

2.8 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定古方生脈散三批樣品。

3 討論

分別考察乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉（50∶50），乙腈-甲醇-0.1mol/L醋酸溶液（25∶15∶60），乙腈-0.1%甲酸水（20∶80），乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）為流動(dòng)相為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相法效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、專屬性好，可用于古方生脈散中人參皂甙Rg1的含量測定。

參考文獻(xiàn)

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