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    硝酸酯后處理對(duì)心臟缺血再灌注損傷心肌保護(hù)的效果分析

    2017-12-28 13:33朱夢(mèng)霞王芳楊麒玉黃靚
    現(xiàn)代養(yǎng)生·下半月 2017年7期

    朱夢(mèng)霞 王芳 楊麒玉 黃靚

    [摘要]目的:探討硝酸酯后處理在心臟缺血再灌注損傷中的應(yīng)用價(jià)值及對(duì)心肌的保護(hù)效果。方法選取30只Wistar大鼠,行麻醉處理后,連接并準(zhǔn)確對(duì)II導(dǎo)聯(lián)心電圖記錄,大鼠I/R模型應(yīng)用改良Pferfer MA推管法予以制備。隨機(jī)將動(dòng)物模型分為3組,各10只。即I/R組、IPostC組、PI-PostC組。結(jié)果:IPostC組實(shí)驗(yàn)大鼠和PI-PostC組實(shí)驗(yàn)大鼠心梗面積、心肌細(xì)胞凋死指數(shù)、心肌缺血面積、血cTnI水平相較I/P組,均呈顯著縮小或降低顯示(P<0.01)。PI-Postc組大鼠相較IPostC組,心肌缺血面積顯著縮小(P<0.01),但心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、血cTnI水平、心梗面積無(wú)差異(P>0.05)。結(jié)論:缺血后處理、硝酸酯后處理,均可發(fā)揮保護(hù)心肌缺血再灌注損傷作用,且可使心肌缺血面積明顯縮小,其中IPostC縮小幅度更為顯著。

    [關(guān)鍵詞]硝酸酯后處理;心臟缺血;再灌注損傷;心肌保護(hù)

    研究表示,在心梗發(fā)生后,行積極的再灌注處理可使心肌壞死面積明顯減少,但此項(xiàng)操作具一定損傷性,常造成心肌細(xì)胞壞死和凋亡程度加重。以往動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,采用缺血后處理(IPostC)可促梗死面積縮小,最大程度減輕缺血再灌注(I/R)損傷。但I(xiàn)PostC因具有創(chuàng)性,故應(yīng)用受限,而采用藥物后處理(PI-PostC)可將相關(guān)信號(hào)通路直接激活,或?qū)ψ陨韮?nèi)源性保護(hù)物質(zhì)進(jìn)行模擬,來(lái)發(fā)揮保護(hù)心肌的作用,明顯降低了手術(shù)損傷風(fēng)險(xiǎn)。本次研究就硝酸酯后處理價(jià)值展開(kāi)探討,現(xiàn)回顧結(jié)果如下。

    1材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)材料

    選取30只Wistar大鼠,行麻醉處理后,連接并準(zhǔn)確對(duì)II導(dǎo)聯(lián)心電圖記錄,大鼠I/R模型應(yīng)用改良PferferMA推管法予以制備。隨機(jī)將動(dòng)物模型分為3組,各10只。

    (1)I/R組:在對(duì)左前降支行結(jié)扎處理40min后,將其完全開(kāi)放,行180min再灌注操作;

    (2)IPostC組:在對(duì)左前降支行結(jié)扎處理40min后,于開(kāi)始再灌注缺血前,行三個(gè)連續(xù)的呈循環(huán)狀態(tài)下30s/30s I/R后處理操作,后將左前降支完全開(kāi)放,并行180min的再灌注處理;

    (3)PI-PostC組:對(duì)左前降支行結(jié)扎處理40min后,于開(kāi)始再灌注前,經(jīng)左頸總動(dòng)脈,將5mg/kg的硝酸異山梨醇注入,5min后,左前降支再灌注180min,將5mg/kg硝酸異山梨醇持續(xù)注入20min。

    1.2方法

    (1)測(cè)定心梗面積:采用雙染法進(jìn)行測(cè)定,即氯化三苯四氮唑(TTC)與Evans blue。經(jīng)頸動(dòng)脈,在行再灌注處理3h后,予以取血,后取2%濃度的Evans blue快速經(jīng)頸靜脈進(jìn)行推注,將心臟迅速摘取,自心底向心尖,將左心室垂直心臟縱軸方向切為6片,每片最度在2mm左右。于1%TTC溶液中放置,調(diào)整水浴溫度為37℃,行15min的避光孵育,取出標(biāo)本后,采用10%甲酸溶液行1h固定,于自然光下進(jìn)行拍照。正確記錄染色結(jié)果,即梗死心肌組織經(jīng)觀察表現(xiàn)為白色,正常心肌組織為藍(lán)色,缺血心肌組織為磚紅色。各區(qū)域面積用圖像分析軟件進(jìn)行測(cè)定,得出總面積。其中左心室面積為藍(lán)色、紅色、白色面積之和;梗死面積為白色區(qū)域面積;缺血區(qū)面積為紅色、白色面積之和。

    (2)測(cè)定心肌肌鈣蛋白(eTnI):完成再灌注后,自實(shí)驗(yàn)大鼠右頸動(dòng)脈分別采血1ml,行15min的離心操作,留取上清,保存于-80℃冰箱中,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)eTnI檢測(cè)。

    (3)測(cè)定心肌細(xì)胞凋亡:心肌石蠟標(biāo)本常規(guī)制備,應(yīng)用TUNEL法原位檢測(cè)心肌組織切片中表現(xiàn)出的細(xì)胞凋亡情況。光鏡下,細(xì)胞核呈棕黃色或棕褐色顆粒,與凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征符合,即可按凋亡細(xì)胞判定。自每張切片出現(xiàn)凋亡細(xì)胞的區(qū)域,取高倍視野10個(gè),對(duì)平均每100個(gè)細(xì)胞中含有的凋亡細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)算,調(diào)亡指數(shù)(AD采用百分?jǐn)?shù)(%)表示。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    涉及數(shù)據(jù)均輸入spss13.0,組間計(jì)量資料采用(x+s)表示,行t檢驗(yàn),P<0.05具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

    2結(jié)果

    IPostC組實(shí)驗(yàn)大鼠和PI-PostC組實(shí)驗(yàn)大鼠心梗面積、心肌細(xì)胞凋死指數(shù)、心肌缺血面積、血cTnI水平相較I/P組,均呈顯著縮小或降低顯示(P<0.01)。PI-PostC組大鼠相較IPostC組,心肌缺血面積顯著縮?。≒<0.05),但心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、血cTnI水平、心梗面積無(wú)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

    3討論

    多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,再灌注時(shí)取緩激肽、腺苷等應(yīng)用,可經(jīng)不同機(jī)制,促再灌注損傷改善。本次研究中,相較I/R組,PI-PostC組、IPostC組大鼠cTnI水平、缺血及梗死面積均顯著降低或減小顯示(P<0.01)。表明缺血后處理和采用硝酸酯缺血后處理均可使再灌注損傷減輕,心梗面積縮小。而PI-Postc組相較IPostC組,雖心梗面積無(wú)明顯差異,但缺血面積呈更小顯示,表明在保護(hù)缺血再灌注心肌損傷方面,酸硝酯后處理同IPostC效果相同,同時(shí)可使缺血面積有更大幅度的縮小。本次結(jié)果還顯示,在細(xì)胞凋亡指數(shù)方面,PI-PostC組與IPost組均較I/R組低,表明兩種后處理方式均可使心肌缺血細(xì)胞凋亡程度減輕,促再灌注損傷改善。

    綜上,缺血后處理、硝酸酯后處理,均可發(fā)揮保護(hù)心肌缺血再灌注損傷作用,且可使心肌缺血面積明顯縮小,其中IPostC縮小幅度更為顯著。

    (通訊作者:黃靚)

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