定氮法測定鹿心中的蛋白質(zhì)含量

倪亞娜，秦儉

1.白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林白城 13700；2.吉林白城市食品化妝品稽查分局，吉林白城 137000

定氮法測定鹿心中的蛋白質(zhì)含量

倪亞娜1，秦儉2

1.白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林白城 13700；2.吉林白城市食品化妝品稽查分局，吉林白城 137000

目的采用氮測定法測定鹿心的蛋白質(zhì)含量。方法采用《中國藥典》2015年版四部通則0704氮測定法中第一法（常量法）或第三法（定氮儀法）測定。結(jié)果《中國藥典》2015年版四部通則0704氮測定法中第三法（定氮儀法）測定消解，與第一法含量無差別。結(jié)論鑒于各大藥廠存在無消解儀、自動(dòng)蒸餾儀及滴定儀的現(xiàn)象，故仍采用第一法進(jìn)行測定。

鹿心；定氮；消解；蒸餾

鹿心具有調(diào)節(jié)人體新陳代謝、促進(jìn)改善各種生理機(jī)能、養(yǎng)心氣、安心臟、止汗化痰、抑制興奮、活血通竅、化瘀止痛、對(duì)心臟病、心肌缺血、心絞痛，心動(dòng)過速、心動(dòng)過緩、腦動(dòng)脈硬化，有較好效果。同時(shí)鹿心具有增強(qiáng)心肌收縮力、減低心肌耗氧量，對(duì)失眠盜汗，內(nèi)臟積水引起心跳、心慌等癥具有顯著效果。同時(shí)作為多家藥企生產(chǎn)的心腦康膠囊的主要原料。

1 儀器與方法

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀器 BSA 224S電熱套；凱氏燒瓶（500 mL）；冷凝管；錐形瓶（500 mL）；滴定管（25 mL）；量筒（50 mL，100 mL）；NKD6280電位法凱氏定氮儀

1.1.2 試劑 硫酸鉀（分析純）、硫酸銅（分析純）、硫酸（分析純）、硫酸銨（分析純）、磷酸二氫銨（分析純）、氫氧化鈉、鋅粒

1.2 消解條件考察

1.2.1 氮測定法 《中國藥典》2015年版四部通則0704第一法）[1]。

1.2.2 取樣量考察 以藥材中蛋白質(zhì)為考察對(duì)象進(jìn)行含量測定。分別取本品粉末0.10、0.25、0.50、1.00 g，精密稱定，照氮測定法[2]《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法)測定，根據(jù)硫酸滴定液（0.05 mol/L）消耗量，確定取樣量。見表2。

表1 已知含量9.98%（g/g）的鹿心不同取樣量消耗滴定液數(shù)量

根據(jù)上述滴定液消耗數(shù)量，控制滴定體積25 mL以下，確定取樣量0.25 g。

1.3 樣品中含量測定

分別精密稱取11個(gè)批次梅花鹿、馬鹿樣品，按含量測定的方法進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

1.3.1 氮測定法 《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第三法。

1.3.2 取樣量考察 以藥材中蛋白質(zhì)為考察對(duì)象進(jìn)行含量測定。分別取本品粉末0.1、0.2、0.3、0.5 g（含氮量9.98%），精密稱定，照氮測定法(《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第三法測定，根據(jù)硫酸滴定液（0.05 mol/L）消耗量，確定取樣量。見表3。

表3 不同取樣量鹿心消耗滴定液數(shù)量

根據(jù)上述含量測定結(jié)果，控制滴定體積25 mL以下，確定取樣量0.25 g。

1.3.3 樣品中含量測定 分別精密稱取11個(gè)批次公鹿的樣品及7個(gè)批次母鹿樣品，按含量測定的方法進(jìn)行測定。結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果

結(jié)果表明：氮測定法的第一法和第三法在測定結(jié)果比較中無差異。所以使用第一法和第三法都可以。

1.4 方法驗(yàn)證

1.4.1 線性關(guān)系考察 精密稱取供試品粉末0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 g，照氮測定法(《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法測定，以取樣量為橫坐標(biāo)，消耗滴定液體積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明供試品取樣量在0.1～1.0 g范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系?；貧w方程為Y=65.37X-0.099 3，r=0.999 9。見表5。

表5 線性關(guān)系考察結(jié)果(已知含量9.98%)

1.4.2 準(zhǔn)確度 ①以磷酸二氫銨為基準(zhǔn)物質(zhì)的精密度考察。取已知含量的鹿心藥材粉末0.25 g（含氮量9.98%以干品計(jì)算，水分5.4%），共取6份，精密加入磷酸二氫銨（含氮量12.17%）試劑適量，平行6份，按以上“供試品溶液的制備”項(xiàng)制備并測定，分別計(jì)算回收率，結(jié)果表明平均回收率為95.2%，RSD為0.56%。見表6。

表6 回收率試驗(yàn)結(jié)果

②以硫酸銨為基準(zhǔn)物質(zhì)的精密度考察。取已知含量的鹿心藥材粉末0.25 g（含氮量9.98%以干品計(jì)算，水分5.4%），共取6份，精密加入硫酸銨（含氮量21.21%）試劑適量，平行6份，按以上“供試品溶液的制備”項(xiàng)制備并測定，分別計(jì)算回收率，結(jié)果表明平均回收率為95.50%，RSD為0.01%。見表7。

表7 回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論表明：用磷酸二氫銨和硫酸銨兩種基準(zhǔn)物考察回收率無差異，回收率在95.00%～105.00%之間，方法可行。

1.4.3 精密度 ①重現(xiàn)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)的樣品6份（含氮量9.98%），分別精密稱重，照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法)測定，計(jì)算測定結(jié)果的RSD值為0.2%。結(jié)果證明此方法重現(xiàn)性良好。

②中間精密度。實(shí)驗(yàn)室3名人員各做一個(gè)樣品（已知含氮量9.98%），用同一臺(tái)天平、相同試劑試藥、同一條件消解測定，測得蛋白質(zhì)的含量分別為 9.97%、9.96%、9.96%，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.1%。

1.4.4 專屬性 取空白試劑，照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法測定，消耗滴定液體積值為0.20 mL。

1.4.5 耐用性 取同一批號(hào)的樣品6份（已知含氮量9.98%），分別精密稱重，照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法測定，采用不同廠家試劑、試藥進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算測定結(jié)果，測定結(jié)果的RSD值為1.1%。結(jié)果證明此方法重現(xiàn)性良好。

1.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品7份，分別精密稱重（已知含氮量9.98%），照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法蒸餾后放置0、4、8、12、16、20、24 h測定，計(jì)算測定結(jié)果的RSD值為0.2%。結(jié)果證明此方法重現(xiàn)性良好。見表8。

表8 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

1.5 樣品中含量測定

分別精密稱取11個(gè)批次梅花鹿、馬鹿的樣品，按含量測定的方法進(jìn)行測定。結(jié)果見表9。

2 結(jié)論

根據(jù)公鹿11批樣品的檢測結(jié)果，平均值為10.29%，將含量限度為“本品按干燥品計(jì)算，含總氮（N）不得少于8.0%”。方法可行。

表9 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

鹿心為吉林省的地道藥材。目前心腦康膠囊、心腦康片、等中成藥中鹿心為主藥，具有良好的市場基礎(chǔ)。該項(xiàng)目目的就是建立鹿心藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，適用于醫(yī)院、企業(yè)生產(chǎn)、科研和經(jīng)營中對(duì)鹿心的鑒定和質(zhì)量檢驗(yàn)。定氮法能有效的控制其蛋白質(zhì)的含量，方法簡單易操作，方法依據(jù)為《中國藥典》2015年版，方法可行。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2015年版一部[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]羅美蘭，丁志軍.凱氏定氮法測定土鱉蟲多肽片的總氮量，中國藥房[J].2013，24（25）：2365-2367.

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.30.110

R9

A

1672-5654（2017）10（c）-0110-03

倪亞娜（1977-），女，吉林白城人，本科，副主任藥師、研究方向：藥學(xué)。

2017-07-24）