杜仲茶對便秘模型小鼠的通便功能研究

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(1.中南林業(yè)科技大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院,湖南長沙 410004;2.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,湖南吉首416000;3.南方林業(yè)生態(tài)應(yīng)用技術(shù)國家工程實(shí)驗(yàn)室,湖南長沙 410004)

杜仲茶對便秘模型小鼠的通便功能研究

趙東亮1,2,李湘洲1,3,*,張勝1,3

(1.中南林業(yè)科技大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院,湖南長沙 410004;2.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,湖南吉首416000;
3.南方林業(yè)生態(tài)應(yīng)用技術(shù)國家工程實(shí)驗(yàn)室,湖南長沙 410004)

研究杜仲茶對便秘模型小鼠的通便效果。將昆明種小鼠隨機(jī)分為溶劑對照組、模型組、陽性對照組和三個劑量的給藥組,雌雄各半。溶劑對照組和模型組給予20 mL/kg BW的蒸餾水;陽性對照組給予1.0 g/kg BW的麻仁丸;給藥組分別經(jīng)口給予低、中、高劑量(0.4、0.8、1.6 g/kg BW)的杜仲茶提取液。連續(xù)灌胃8 d后,記錄各組小鼠的體重,首次排黑便時間、5 h內(nèi)排便粒數(shù),測定糞便重量、含水量和小腸墨汁推進(jìn)率,并采用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)劑量杜仲茶提取液對小鼠生長無明顯影響(p>0.05),低、中、高劑量杜仲茶提取液對首次排黑便時間、5 h內(nèi)排便粒數(shù)、糞便重量、含水量和小腸墨汁推進(jìn)率的影響依次為不顯著(p>0.05)、顯著(p<0.05)及極顯著(p<0.01)。杜仲茶對小鼠具有通便的作用。

杜仲茶,便秘小鼠,潤腸通便

杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)作為傳統(tǒng)的具有顯著療效的滋補(bǔ)類中藥在我國使用歷史悠久,《本草綱目》將其列為上品。杜仲活性主要表現(xiàn)在降血壓、抗氧化、抗疲勞、增強(qiáng)免疫作用、抗骨質(zhì)疏松、抗腫瘤、保肝護(hù)肝、降血糖和抗衰老等方面[1]。近年來,杜仲因其顯著的生理功能得到了眾多學(xué)者的廣泛關(guān)注,其使用及研究從傳統(tǒng)的杜仲皮擴(kuò)展到杜仲葉、杜仲雄花、杜仲翅果等,研究表明,杜仲葉和杜仲皮具有相似的化學(xué)成分,可作為杜仲皮的替代品,《中國藥典》2005、2010、2015版均將其作為飲片類藥材收錄[2]。通過加工將杜仲葉制成杜仲茶,經(jīng)作者及多例輕度便秘患者使用發(fā)現(xiàn),杜仲茶還具有通便的效果,該功能尚未見文獻(xiàn)報道。

本論文擬探討杜仲茶提取液對小鼠的通便作用,以復(fù)方地酚諾酯作為小鼠便秘造模藥劑,麻仁丸作為陽性對照,對比研究杜仲茶提取液對便秘模型小鼠的通便作用,為開拓杜仲資源利用新途徑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

昆明種小鼠 動物合格證號:SCXK(湘)2014-0011,體重(20±2) g 中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心;杜仲茶提取液 采摘時間為當(dāng)年七月,由吉首大學(xué)陳功錫教授鑒定;復(fù)方地酚諾酯片(批號:國藥準(zhǔn)字H45020028) 廣西河豐藥業(yè),每片含復(fù)方地酚諾酯 2.5 mg;麻仁丸(批號:國藥準(zhǔn)字Z50020517) 桐君閣。

表1 杜仲茶提取液對小鼠體重的影響Table 1 Effects of Eucommia leaves extract on body weight of mice(±s)

RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;SHB-III循環(huán)水式多用真空泵 鄭州長城科貿(mào)有限公司;FA2004電子天平 上海精科天平廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液的配制 將杜仲葉通過萎凋、揉茶、發(fā)酵、烘干等工藝制成杜仲茶。稱取干燥的杜仲茶,加10倍蒸餾水,沸水提取30 min,提取兩次,濃縮至每mL相當(dāng)于0.8 g杜仲茶葉,4 ℃下冷藏保存?zhèn)溆?糞便指示液墨汁:取約10 g阿拉伯樹膠,加入70 mL水,煮沸溶解阿拉伯樹膠,加入活性碳粉末5 g,煮沸攪拌數(shù)分鐘,加水定容至100 mL,4 ℃保存?zhèn)溆?復(fù)方地酚諾酯混懸液:取復(fù)方地酚諾酯片20片,用研缽研碎呈粉末后加水至100 mL,配制成濃度為0.5 mg/mL的混懸液;麻仁丸混懸液:麻仁丸(批號:國藥準(zhǔn)字Z50020517,生產(chǎn)廠家:桐君閣),稱取研碎后的麻仁丸5 g,加水定容至100 mL,配制成濃度為5%的混懸液。

1.2.2 動物的分組與飼養(yǎng) 選昆明種小鼠60只,隨機(jī)分成6組,每組10只,雌雄各半,分別為溶劑對照組、模型組、陽性對照組和三個劑量的給藥組。溶劑對照組和模型組給予蒸餾水,陽性對照組給予麻仁丸(1.0 g/kg BW),低、中、高三個劑量的給藥組按照約相當(dāng)于人體推薦口服劑量2.5、5、10倍的量(0.4、0.8、1.6 g/kg BW)分別給予杜仲茶提取液(以原杜仲茶折算);灌胃量為20 mL/kg BW每天,連續(xù)8 d,期間自由飲食,每天記錄各小鼠體重變化情況[3]。

1.2.3 小鼠排便實(shí)驗(yàn) 各組小鼠最后一次灌胃后,取走食物,僅提供飲水,禁食16 h。模型組、陽性對照組和三個劑量的給藥組小鼠給予復(fù)方地芬諾酯混懸液,溶劑對照小鼠給予蒸餾水,劑量為20 mL/kg BW。灌胃30 min后,各組小鼠給予墨汁,其中陽性對照組墨汁含5%的麻仁丸,三個劑量的給藥組墨汁含相應(yīng)劑量的杜仲茶提取物(0.4、0.8、1.6 g/20 mL,以原杜仲茶折算),溶劑對照組和模型組的墨汁為對照墨汁,不含藥物。每只小鼠灌胃結(jié)束時分別計時,單獨(dú)飼養(yǎng)。記錄各小鼠開始排黑便時間、5 h排便粒數(shù)和重量,計算糞便含水量[4]。

1.2.4 小腸運(yùn)動實(shí)驗(yàn) 選昆明種小鼠60只,雌雄各半,參照1.2.2項(xiàng)飼喂。各組小鼠最后一次灌胃后,取走食物,僅提供飲水,禁食16 h。模型組、陽性對照組和三個劑量的給藥組小鼠給予復(fù)方地芬諾酯混懸液,溶劑對照組小鼠給予蒸餾水,灌胃劑量為20 mL/kg BW。每只小鼠灌胃結(jié)束時分別計時,30 min后,各組小鼠給予墨汁,其中陽性對照組墨汁含5%的麻仁丸,三個劑量的給藥組墨汁含相應(yīng)劑量的杜仲茶提取物(0.4、0.8、1.6 g/20 mL,以原杜仲茶折算),溶劑對照組和模型組的墨汁為對照墨汁,不含藥物。給予墨汁30 min后,處死小鼠,分離出腸系膜,剪取幽門至回盲部的腸管,將小腸輕輕拉成直線測量長度,即為“小腸長度”,從幽門至墨汁前沿距離為“墨汁推進(jìn)長度”,按下列公式計算墨汁推進(jìn)率[4]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS軟件進(jìn)行小鼠首次排黑時間、5 h內(nèi)排便數(shù)、糞便含水率和墨汁推進(jìn)率的顯著性分析,包括給藥組與陽性對照組進(jìn)行t檢驗(yàn),陽性對照組、給藥組與模型組間的t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 杜仲茶提取液對小鼠體重的影響

各組小鼠初始體重及飼喂8 d后的體重如表1所示。各組小鼠的初始體重與溶劑對照組相比較,均無顯著性差異(p>0.05),分組均衡。經(jīng)口服給予杜仲茶提取液8 d后各組小鼠體重與溶劑對照組比較,均無顯著性差異(p>0.05),顯示杜仲茶提取液對小鼠生長無明顯影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時,各組小鼠活動情況、毛發(fā)狀況均無可見差異。

表2 杜仲茶提取液對小鼠各排便指標(biāo)的影響Table 2 Indexes of Eucommia leaves extract on defecation of constipated mice(±s)

注:與模型組比,*p<0.05,**p<0.01;模型組與溶劑對照組比,#p<0.05,##p<0.01;表3同。

表3 杜仲葉提取物對墨汁推進(jìn)率的影響Table 3 Effects of Eucommia leaves extract on ink propelling ratios(±s)

2.2 杜仲茶提取液對便秘小鼠排便指標(biāo)的影響

由表2可知,模型組與溶劑對照組的首次排黑便時間、5 h內(nèi)排便粒數(shù)、糞便重量和糞便含水率,其結(jié)果都具有極顯著性差異(p<0.01),說明小鼠便秘模型成立。與模型組相比,杜仲茶提取液中、高劑量組小鼠的首次排黑便所需時間、5 h內(nèi)排便粒數(shù)、糞便重量和糞便含水量有顯著性差異(p<0.05、p<0.01),低劑量組亦具有一定效果,隨劑量的增加,杜仲茶促進(jìn)實(shí)驗(yàn)小鼠的排便效應(yīng)相應(yīng)增加。

2.3 杜仲茶提取液對便秘小鼠小腸蠕動功能的影響

由表3可知,模型組與溶劑對照組相比,墨汁推進(jìn)率具有非常顯著的差異(p<0.01),說明該便秘模型成立。杜仲茶提取液低、中、高劑量組與模型組相比,其墨汁推進(jìn)率均高于模型組,經(jīng)SPSS統(tǒng)計分析,低劑量組效果不具顯著性,中、高劑量組均有顯著性或極顯著性差異(p<0.05和p<0.01),顯示實(shí)驗(yàn)劑量的中、高劑量杜仲茶提取液具有良好的促進(jìn)小鼠腸道蠕動的功能。

3 討論

便秘是消化系統(tǒng)常見癥狀之一,在老年人及久坐少動的白領(lǐng)中常見,便秘往往可致患者產(chǎn)生明顯的軀體不適,并引發(fā)一系列的疾病[5]。導(dǎo)致便秘的因素比較多,不良的飲食及生活習(xí)慣、血糖升高、腸道菌群改變、炎癥、神經(jīng)系統(tǒng)和腸道功能的改變等均可導(dǎo)致便秘[6-7],改善這些指標(biāo)在一定程度上均可緩解便秘癥狀。

研究表明,京尼平苷酸具有較好的瀉下作用[8],而杜仲葉中的京尼平苷酸含量較為豐富,最高可達(dá)1.5%[9]。除京尼平甘酸之外,杜仲茶中的其他成分對便秘的緩解也具有理論上的可能。如杜仲葉中含有豐富的綠原酸、桃葉珊瑚苷等,具有良好的抑菌抗炎作用[10-11],杜仲葉提取物長期治療能夠改善周圍神經(jīng)功能[12],通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),綠原酸對潤腸通便具有一定效果;Lee等[13]確認(rèn)杜仲葉能夠改善高血糖癥狀;汪長東等[14]認(rèn)為血漿中一氧化氮的濃度增加抑制腸道平滑肌的收縮,降低其一氧化氮濃度可促進(jìn)排便,Li-fang Luo等[15]研究發(fā)現(xiàn),杜仲木脂素可以顯著降低血漿一氧化氮水平;呂武興等[16]認(rèn)為杜仲葉提取物可以明顯降低盲腸中大腸桿菌的數(shù)量,且有利于盲、回腸中乳酸桿菌和雙歧桿菌的增殖。綜上所述,除文獻(xiàn)已經(jīng)確證的京尼平苷酸具有瀉下作用之外,杜仲葉提取物具有的其他藥理作用,如抑菌抗炎、改善高血糖、降低血漿中一氧化氮濃度、促進(jìn)盲、回腸中乳酸桿菌和雙歧桿菌的增殖等,對通腸潤便功能也可能具有潛在的作用。

對于便秘的防治除注重飲食的調(diào)配、保持良好的生活習(xí)慣、藥物治療外,服用潤腸通便類天然保健食品亦是一個不錯的選擇。杜仲作為我國傳統(tǒng)的名貴中藥材,具有優(yōu)良的降血壓、降血糖、調(diào)血脂等功能,且對人體無毒副作用,可長期服用[17]。

杜仲葉在加工制成杜仲茶的過程中,極大降低了生葉所含有的青草味,克服了難以作為茶飲料服用的缺點(diǎn),但其有效成分含量會有所改變,如何盡可能降低青草味又保留其中的有效成分是制茶工藝需要考慮的問題。

4 結(jié)論

連續(xù)8 d通過灌胃給藥的方式分別給予小鼠0.4、0.8、1.6 g/kg BW 劑量的杜仲茶提取液,各組小鼠體重?zé)o明顯差異,低、中、高劑量杜仲茶提取液分別使便秘小鼠首便時間縮短4.7%、10.0%、21.4%,排便粒數(shù)分別增加7.6%、11.4%、30.9%,糞便重量分別增加2.1%、14.0%、28.2%,糞便的含水量分別提高2.1%、7.2%、10.6%,墨汁推進(jìn)率分別增加15.5%、66.4%、104.2%,說明杜仲茶提取液對便秘小鼠的腸道蠕動能具有良好的促進(jìn)作用;通過統(tǒng)計分析,其結(jié)果顯著(p<0.05)。本實(shí)驗(yàn)表明杜仲茶對小鼠具有潤腸通便的作用。我國杜仲資源豐富,且宜栽面積廣,充分利用杜仲資源,開發(fā)出具有通便功能的杜仲保健品,有望實(shí)現(xiàn)一物多用,在達(dá)到降血壓、調(diào)血脂血糖的同時,還可以通潤腸道。杜仲茶提取液對便秘模型小鼠的通便作用的驗(yàn)證,為杜仲資源利用提供了新思路新途徑。

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CatharticeffectofEucommiateaextractonconstipatedmice

ZHAODong-liang1,2,LIXiang-zhou1,3,*,ZHANGSheng1,3

(1.College of Materials Science and Engineering,Central South University ofForestry and Technology,Changsha 410004,China;2.College of Biology and Environment Sciences,Jishou University,Jishou 416000,China;3.State Key Laboratory of Ecological Applied Technology in Forest Area of South China,Changsha 410004,China)

Objective:To study the effect ofEucommiatea on defecating function in constipated mice. Methods:Kunming mice were randomized into 6 groups:solvent group,model group,positive group and 3 dosages groups. Mice of solvent group and model group were given by gavage with distilled water of 20 mL/kg BW once a day for 8 days,mice of positive group were given by gavage with Maren Wan of 1.0 g/kg BW once a day for 8 days,mice of 3 dosages group were given by gavage with different dosages ofEucommiatea(0.4,0.8,1.6 g/kg BW)once a day for 8 days.Then the weight of each group of mice was recorded,the time of the first black feces to be excreted and the number of feces within 5 hours were observed,water content of mice feces and ink propelling rates were mensurated,statistical analysis was performed using the SPSS software. Results:There was no obvious effect about experimental dosages ofEucommiatea extrat on Body weight of mice,and the effects of lower,medium and higher dosages ofEucommiatea extrat on the time of the first black feces to be excreted,the number of feces within 5 hours,water content of mice feces and ink propelling rates respectively were no significant(p>0.05),significant(p<0.05)and very significant(p<0.01). Conclution:The results demonstrate thatEucommiatea has significantly cathartic effects in mice.

Eucommiatea;constipated mice;cathartic effects

2017-04-28

趙東亮(1974-)，男，博士研究生，講師，研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)利用，E-mail:zhdl-171@163.com。

*通訊作者:李湘洲(1965-)，女，碩士，教授，研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)利用，E-mail:rlxz@163.com。

“十二五”國家科技支撐計劃資助(2012BAD21B05)。

TS272.5

A

1002-0306(2017)23-0280-04

10.13386/j.issn1002-0306.2017.23.051