HPLC/MS法檢測(cè)雙黃連口服液中有效成分的分析

朱紅艷

（無錫市中醫(yī)院藥劑科，江蘇 無錫 214000）

·藥物與臨床·

HPLC/MS法檢測(cè)雙黃連口服液中有效成分的分析

朱紅艷

（無錫市中醫(yī)院藥劑科，江蘇 無錫 214000）

目的 建立液相色譜-質(zhì)譜連用（HPLC/MS）法檢測(cè)雙黃連口服液中有效成分。方法 采用Zorbax SB C18色譜柱，以甲醇-乙腈（1:4）-0.4%甲酸水為流動(dòng)相，梯度洗脫，體積流量0.35 mL/min，柱溫35°C，在電噴霧電離源（ESI）模式下利用分時(shí)段選擇離子檢測(cè)（SIM）模式進(jìn)行檢測(cè)，分析時(shí)間為7 min。結(jié)果 綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷的線性范圍分別是32.45～1648 ng/mL、8.74～437 ng/mL、60.23～14896 ng/mL、22.79～2857 ng/mL；精密度RSD值分別是1.27%、0.45%、0.50%、2.49%；回收率和（RSD）值分別是96.72%、（1.82%），99.82%、（2.69%），97.21%、（2.45%），98.31%、（2.84%）。結(jié)論 HPLC/MS法簡(jiǎn)單，靈敏度高，專屬性好，可有效測(cè)定雙黃連口服液中有效成分。

HPLC/MS；雙黃連口服液；有效成分

雙黃連口服液屬于清熱解毒藥物，主要用于感冒、發(fā)熱、咳嗽和咽痛治療，其主要藥物成份為金銀花、連翹、黃芩[1，2]。綠原酸、咖啡酸、連翹苷、黃芩素等是雙黃連口服液主要活性成份，針對(duì)這些化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)，傳統(tǒng)液相色譜紫外檢測(cè)方法靈敏度和專屬性不強(qiáng)[3-6]。液相色譜-質(zhì)譜連用法是近年來新型化合物檢測(cè)方法，有資料顯示其檢測(cè)效果明顯，速度快。本次研究將HPLC/MS法用于檢測(cè)雙黃連口服液中有效成分，以期為藥物質(zhì)量檢測(cè)提供依據(jù)。

1 儀器與藥劑

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜-質(zhì)譜連用儀，電子分析天平，超純水儀，甲醇，甲酸，雙黃連口服液，綠原酸、咖啡酸、連翹苷、黃芩苷對(duì)照品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Zorbax SB C18色譜柱，0.4%甲酸水（A）-甲醇-乙腈（1∶4，B）流動(dòng)相，梯度洗脫，分析時(shí)間為7 min，洗脫程序：0～0.5 min，10%～11%B；0.5～0.75 min，11%～13%B；0.75～1.5 min，13%～15%B；1.5～2 min，15%～10%B；2～3 min，10%～30%B；3～6.2 min，30%～70%B；6.2～6.5 min，70%～10%B；6.5～7 min，10%～10%B。體積流量0.35 mL/min，柱溫35°C，進(jìn)樣體積5 μL。

2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧電離源（ESI）模式進(jìn)行離子化，離子檢測(cè)（SIM）模式檢測(cè)，相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)：毛細(xì)血管電壓4.0 kV，脫溶劑溫度325°C、氣體積流量10 L/min。

2.3 對(duì)照品儲(chǔ)備液制備

天平準(zhǔn)確稱取適量綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷對(duì)照品，甲醇溶解，各配制成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在4°C冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 供試品溶液制備

準(zhǔn)確抽取雙黃連口服液樣品100 μL，甲醇溶解定容至10 mL，使用濾孔大小為0.45 μm的濾膜過濾，保留濾液。

2.5 色譜與質(zhì)譜行為

圖1為色譜行為，圖2為質(zhì)譜行為。

圖1（1，2，3，4分別為綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷）

圖2（1，2，3，4分別為綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷）

2.6 線性關(guān)系與檢出限

準(zhǔn)確稱取適量“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液置于10 mL量筒中，加入適量初始流動(dòng)相，得到樣品溶液。準(zhǔn)確移取各對(duì)照品儲(chǔ)備液于10 mL量筒中，得到混合對(duì)照品溶液。把樣品與混合對(duì)照品溶液按照1∶1比例混合后準(zhǔn)確移取10 μL，加入10 μL內(nèi)標(biāo)液和80 μL初始流動(dòng)相，混勻后離心取上清液，按照“2.1”、“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，橫坐標(biāo)（X）代表質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)（Y）代表對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)峰面積比值，線性分析后得到回歸方程，以信噪比10確定各成分定量限（LOQ），如表1。

表1 綠原酸、咖啡酸、連翹苷、黃芩素、黃芩苷成份線性回歸方程及定量限

2.7 精密度試驗(yàn)

取雙黃連口服液，按照“2.4”項(xiàng)下法制備供試品溶液，按照“2.1”、“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，計(jì)算綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.27%、0.45%、0.50%、2.49%，提示精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取雙黃連口服液，按照“2.4”項(xiàng)下法制備供試品溶液，按照“2.1”、“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，計(jì)算綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷RSD分別為2.00%、2.58%、1.61%、1.67%，提示供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取雙黃連口服液，按照“2.4”項(xiàng)下法制備供試品溶液，按照“2.1”、“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，計(jì)算綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷RSD分別為1.41%、2.49%、2.12%、0.27%，提示重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取8 mL雙黃連口服液至100 mL量筒中，加入適量初始流動(dòng)相，得到樣品溶液。準(zhǔn)確移取各對(duì)照品儲(chǔ)備液于10 mL量筒中，得到混合對(duì)照品溶液。把樣品與混合對(duì)照品溶液按照1∶1比例混合后準(zhǔn)確移取10 μL，加入10 μL內(nèi)標(biāo)液和80 μL初始流動(dòng)相，混勻后離心，取上清液為試供品溶液，按照“2.1”、“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，計(jì)算綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷回收率和RSD分別為96.72%、1.82%，99.82%、2.69%，97.21%、2.45%，98.31%、2.84%。

3 討 論

本次研究將HPLC/MS法用于檢測(cè)雙黃連口服液中有效成分，結(jié)果顯示綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、連翹苷的線性范圍分別是32.45～1648 ng/mL、8.74～437 ng/mL、60.23～14896 ng/mL、22.79～2857 ng/mL；精密度RSD值分別是1.27%、0.45%、0.50%、2.49%；回收率和（RSD）值分別是96.72%、（1.82%），99.82%、（2.69%），97.21%、（2.45%），98.31%、（2.84%）。表明HPLC/MS法簡(jiǎn)單，靈敏度高，專屬性好，可有效測(cè)定雙黃連口服液中有效成分含量。本次研究對(duì)甲醇-水與乙腈-水作為流動(dòng)相進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)使用后者時(shí)，檢測(cè)的化合物靈敏度更高。流動(dòng)相中Na+濃度對(duì)綠原酸、咖啡酸影響較為顯著，可在流動(dòng)相中加入0.4 mmol/L乙酸鈉。

[1] 李建晨,廖明麗,賈玉捷,等.雙黃連口服液中綠原酸含量的影響因素研究[J].河北科技大學(xué)學(xué)報(bào),2015,36(5):499-503.

[2] 趙靈靈,屈會(huì)化,馮盛嵐,等.ic-ELISA法測(cè)定不同廠家雙黃連口服液中黃芩苷的含量[J].中藥材,2014,37(12):2294-2296.

[3] 李漢榮,潘日興,陳建萍,等.反相高效液相色譜法測(cè)定芩藿雙清飲中黃芩苷、綠原酸、連翹苷的含量[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,16(3):49-51.

[4] 劉 廷,狄留慶,彭琳秀,等.UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定雙黃連口服液中17種有效成分[J].中草藥,2015,46(22):3357-3363.

[5] 張丹丹,馮 程,顧媛媛,等.UPLC同時(shí)測(cè)定雙黃連粉針劑中黃芩苷、綠原酸、連翹苷成分的含量[J].中醫(yī)藥信息,2017,34(2):39-41.

[6] 孫永慧,李文春.HPLC同時(shí)測(cè)定雙黃連粉針劑中5種成分的含量[J].中國(guó)新藥雜志,2014,32(22):65-68.

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ISSN.2095-8242.2017.062.12209.02

王雨辰