孟祥勇 ,沈 赤 ,毛 健 *,姬中偉
(1.糧食發(fā)酵工藝與技術國家工程實驗室,江南大學,江蘇 無錫 214122;2.江南大學 食品學院,江蘇 無錫214122;3.江南大學 食品安全與營養(yǎng)協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 無錫214122;4.國家黃酒工程技術研究中心,浙江 紹興 312000;5.紹興文理學院,浙江 紹興 312000)
黃酒多糖的分離純化及理化性質研究
孟祥勇1,2,3,4,沈 赤1,2,5,毛 健*1,2,3,4,姬中偉1,2,3,4
(1.糧食發(fā)酵工藝與技術國家工程實驗室,江南大學,江蘇 無錫 214122;2.江南大學 食品學院,江蘇 無錫214122;3.江南大學 食品安全與營養(yǎng)協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 無錫214122;4.國家黃酒工程技術研究中心,浙江 紹興 312000;5.紹興文理學院,浙江 紹興 312000)
以紹興黃酒為原料,采用乙醇沉淀、Sevag法脫蛋白得到黃酒粗多糖,經(jīng)DEAE-Sepharose FF色譜柱和葡聚糖凝膠G75色譜柱對黃酒粗多糖進行分離純化,并采用高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)對黃酒多糖的相對分子質量和純度進行檢測,進一步采用紫外光譜、紅外光譜以及核磁共振波譜對黃酒多糖組分CRWP1的結構特征進行初步解析。結果表明:所得多糖組分為純度較高的中性多糖組分,其重均相對分子質量為7 850;主要由主阿拉伯糖、葡萄糖和木糖組成,并含有少量巖藻糖、半乳糖和甘露糖;所得多糖組分CRWP1為在1,3糖苷鍵主鏈上連接有1,4糖苷鍵支鏈的雜多糖,含有α糖苷鍵構型,并且其單糖殘基為吡喃型。
紹興黃酒;大分子;相對分子質量;單糖;結構特征
黃酒是以谷物為釀造原料,利用酒藥、麥曲中的多種微生物共同釀造而成的一種營養(yǎng)豐富的發(fā)酵酒,具體釀造過程包括浸米、蒸煮、前酵、后酵、過濾、煎酒、貯存等步驟[1-2],具有以下顯著特點:敞口式、雙邊發(fā)酵、多菌種參與[3-4],目前對黃酒中生物活性成分的研究主要集中在氨基酸[5]、功能性低聚糖、多酚類物質[6]和生物活性多肽[7]等功能性物質。作者在前期研究過程中發(fā)現(xiàn)黃酒中含有一定含量的多糖,并且多糖含量因黃酒發(fā)酵工藝的不同而表現(xiàn)出一定的差異性。在前期研究中,黃酒原液經(jīng)濃縮、醇沉、Sevag試劑去蛋白質、透析以及冷凍干燥等得到粗多糖。雖然醇沉物經(jīng)初步分離,已去掉部分雜質,但粗多糖中仍有未脫除干凈的色素、蛋白質、單糖等物質,并且其所含多糖在分子大小和極性上也存在差異,因此需要在進一步對黃酒粗多糖進一步分離,以為黃酒多糖生物活性的研究提供基礎。
與小分子化合物相比,多糖具有相對分子質量大、結構復雜及極性大等特點,因而多糖分離純化的方法不同于普通化合物的分離純化。粗多糖的分離純化一般需要經(jīng)過除雜、脫色、除蛋白質等步驟,將一些非糖去掉后,然后進一步通過乙醇分級沉淀法、透析法、超濾和膜分離等進一步純化,其中纖維素離子交換柱層析和葡萄糖凝膠色譜柱層析分別是依據(jù)多糖的極性和相對分子質量進行分離。
因此,作者首先將粗多糖中的酸性多糖和中性多糖用DEAE Sepharose FF離子交換柱進行分離,然后按相對分子質量大小將多糖用葡聚糖凝膠柱G75進行分離,同時采用高效凝膠過濾色譜法(HPGFC)測定紹興黃酒多糖的相對分子質量及純度、高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法(HPAEC-PAD)測單糖組成、紅外光譜和紫外光譜以及核磁共振分析紹興黃酒多糖的結構,并通過剛果紅實驗對紹興黃酒多糖的三維螺旋結構進行測定,以期初步推斷其結構,為解釋黃酒多糖的對黃酒的風味品質和健康作用的影響提供依據(jù)。
紹興黃酒粗多糖:實驗室自制,乙醇沉淀黃酒多糖,并采用Sevage法去除沉淀中的蛋白質,其含有的無機鹽、低聚糖等雜質經(jīng)透析袋透析72 h去除,隨后進行減壓濃縮,冷凍干燥得到黃酒粗多糖。
DEAE瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠G75、KBr、單糖標準樣:美國Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品。
SY500旋轉蒸發(fā)儀:上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品;Avanti J-26 XP高速冷凍離心機:美國貝克曼庫爾特產(chǎn)品;FreeZone?冷凍干燥機:美國Labconco公司產(chǎn)品;MD99-3自動液相色譜分離層析儀:上海青浦滬西儀器廠產(chǎn)品;UV2600紫外可見分光光度計:天美(中國)科學儀器有限公司產(chǎn)品;NEXU S670智能型傅里葉紅外光譜儀:美國尼高利公司產(chǎn)品;ICS-5000離子色譜儀:美國Dionex公司產(chǎn)品;Waters 600高效液相色譜儀:美國Waters公司產(chǎn)品;AVANCEⅢHD 400 MHz核磁共振:美國布魯克公司產(chǎn)品。
1.3.1 黃酒多糖DEAE離子交換柱純化 參照Guo等人[8]的方法,稱取DEAE Sepharose FF瓊脂凝膠填料100 g,用體積分數(shù)70%的乙醇反復漂洗,抽干后于2 mol/L氯化鈉溶液中浸泡3 h,抽干,然后用去離子水洗滌至中性,超聲波脫氣;將預處理過的DEAE Seph-arose FF填料用去離子水懸浮均勻,沿柱壁緩慢加入內徑 2.6 cm、柱高30 cm的層析柱內,靜置使膠體充分沉淀,以5柱體積的去離子水洗滌平衡柱子;取0.1 g黃酒粗多糖樣品,用超純水溶解,配成質量濃度為10 mg/mL的溶液,過0.45 μm濾膜后上DEAE-Sepharose Fast Flow柱,上樣量為10 mL,調節(jié)恒流泵的轉動速度至洗脫流量為1.5 mL/min,用部分收集器收集洗脫液,洗脫每4 min接收1管多糖洗脫液。首先用300 mL超純水洗脫(接收50管),再用0~1 mol/L NaCl(用梯度混合器發(fā)生,左邊放150 mL 1 mol/L NaCl溶液,右邊盛放150 mL超純水)洗脫,洗脫至沒有多糖檢出為止。每隔一管取0.2 mL洗脫液檢測多糖含量,然后以管數(shù)為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制洗脫曲線,根據(jù)洗脫峰對分離效果進行判斷。洗脫液分別收集,單一峰收集液合并,然后對收集液進行減壓濃縮,透析,凍干得黃酒多糖的DEAE-Sepharose FF組分。
1.3.2 黃酒多糖葡聚糖G75凝膠柱分離 取一定量的葡聚糖凝膠G75,用約20倍凝膠量的去離子水,置于室溫下24 h進行溶脹,間隙攪拌,以保證凝膠的溶脹完全,以免上柱后流速變慢和凝膠斷裂,然后將表面懸浮的小顆粒取出;將層析柱垂直固定于鐵架臺上,接著將溶脹完全并脫氣的葡聚糖凝膠攪拌均勻,沿柱壁緩慢加入內徑2.6 cm、柱高30 cm的玻璃柱內,然后靜置使填料成分沉淀均勻、致密。裝柱后,用去離子水洗滌平衡柱子24 h;將經(jīng)過DEAE柱分離得到的黃酒多糖組分配制成5 mg/mL的水溶液10 mL,然后將多糖溶液沿柱壁緩慢加G75葡聚糖凝膠柱,上樣量為5 mL;用去離子水洗脫,調節(jié)恒流泵的轉速至洗脫流量為0.5 mL/min,用部分收集器收集洗脫液,每10 min接收1管洗脫液。每隔一管取0.2 mL洗脫液檢測多糖含量,然后以管數(shù)為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制洗脫曲線,根據(jù)洗脫峰對分離效果進行判斷。洗脫液分別收集,單一峰收集液合并,然后對收集液進行減壓濃縮,透析,凍干。
1.3.3 多糖純度和相對分子質量測定 黃酒多糖的相對分子質量和純度采用高效凝膠過濾色譜法(HPGFC)測定,具體方法參照Hsu等人[9],樣品溶液經(jīng)0.5 μm微孔膜過濾后,取15 μL上高效液相色譜儀。高效凝膠過濾色譜儀的條件為:Waters 600高效液相色譜儀,410示差折光檢測器,霧化溫度55 ℃,霧化壓力 3.06 bar,UltrahydrogelTMLinear(300 mm×7.8mm)凝膠柱,色譜柱溫度為45℃,流動相為0.1 mol/L NaNO3,流速為 0.96 mL/min。
1.3.4 單糖組成分析 取2 mg多糖樣品放入薄壁長試管中,加入4 mL 2 mol/L三氟乙酸(TFA)溶液,混勻后于110℃下水解2 h;然后低于40℃溫度下將試管內溶液減壓蒸干,接著加入3 mL甲醇再次蒸干,重復以上操作4~5次,以完全除去TFA。用超純水溶解定容至100 mL容量瓶,稀釋10倍后上樣測定。色譜條件為:Dionex CarboPac PA20陰離子交換柱,包括250 mm×4 mm分析柱、50 mm×4 mm保護??;色譜柱溫度為30℃;流動相由A(超純水)和B(0.25 mol/L NaOH)組成,其中流動相B的比例分別 為 體 積 分 數(shù) 2.0% (0~22.0 min)、2.0%~80.0%(22.0~23.0 min)、80.0% (23.0~30.0 min)、80.0%~2.0%(30.0~31.0 min)、2.0%(31.0~40.0 min);流量為0.5 mL/min;進樣體積為 20 μL。
1.3.5 黃酒多糖三股螺旋結構的測定 黃酒多糖三股螺旋結構的測定參照You等人[10],并略作改動。稱取5 mg黃酒多糖樣品,分別加入蒸餾水2.0 mL和80 μmol/L的剛果紅試劑2.0 mL,然后加入1.0 mol/LNaOH溶液,使溶液中NaOH濃度分別達到0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5 mol/L,混勻后于200~800 nm波長范圍內進行紫外可見光譜掃描,并記錄最大吸收波長;以蒸餾水替代黃酒多糖溶液,重復以上操作作為對照。以NaOH濃度為橫坐標,最大吸收波長為縱坐標作圖,分析多糖溶液的最大吸收波長與NaOH濃度之間的關系。
1.3.6 黃酒多糖紫外-可見光光譜 (UV)分析 取50 mg純化后的黃酒多糖置于25 mL容量瓶中,用去離子水配制2.0 mg/mL黃酒多糖溶液,于200~400 nm范圍內進行紫外-可見光掃描,判斷260 nm和280 nm處是否存在吸收峰。
1.3.7 黃酒多糖紅外光譜分析 將光譜純KBr預先用紅外干燥箱干燥,取100~200 mg,用壓片機壓成薄片作為空白對照;另取經(jīng)紅外干燥的黃酒多糖樣品,與100~200 mg光譜純KBr混合,并在瑪瑙研缽中輕輕研磨均勻,壓成薄片,于4 000~400 cm-1處采集紅外光譜信息,掃描參數(shù)為:32次掃描、2 cm-1的分辨率。
1.3.8 黃酒多糖核磁共振分析 黃酒多糖結構分析采用核磁共振法,具體方法參考Ruthes等人[11]研究,并略作修改。取多糖樣品60 mg,溶于1 mL D2O以置換H2O、凍干,反復置換3次,裝入核磁管,溶于D2O 中(1~0.5 mL),DDS(二甲基硅戊烷磺酸鈉)作內標。在室溫下用BRUKERA-V400型核磁共振儀上進行1H-NMR,13C-NMR,1H-1H 相關譜 (1H-1HCOSY)、異核單量子關系(HSQC)、異核多鍵相關譜(HMBC)。
2.1.1 黃酒粗多糖DEAE-Sepharose FF色譜柱純化 由于不同多糖組分所帶電荷的不同,其和DEAE-Sepharose FF色譜柱固定相中離子交換子的集合能力有所差異,樣品溶液流經(jīng)色譜柱時,不同電荷的多糖被選擇性地吸附在固定相上,因而當洗脫液流經(jīng)色譜柱時,不同電荷量的多糖就被先后洗脫下來,從而實現(xiàn)黃酒多糖的分離純化。
由圖1可知,采用醇沉多糖工藝所得粗多糖經(jīng)DEAE-Sepharose FF色譜柱洗脫后可得3種黃酒多糖組分:CRWP1、CRWP2和 CRWP3;由圖中洗脫曲線可判斷出,最先被去離子水洗脫下來的黃酒多糖組分CRWP1為不帶電荷的中性多糖,而當洗脫液換為用0~1 mol/L NaCl溶液梯度洗脫時,此時被分離下來的黃酒多糖為酸性多糖。比較洗脫下來的3個洗脫峰,其中組分CRWP1所占比例達到91.5%,CRWP2和CRWP3所占比例分別為5.67%和2.83%。從以上分析結果看,CRWP1為含量最高的黃酒多糖組分,且其活性經(jīng)初步驗證高于其它兩個組分,因此以CRWP1為目標組分繼續(xù)進行純化。
圖1 黃酒多糖DEAE-Sepharose FF色譜柱的梯度洗脫曲線Fig.1 Stepwise elution curve of crude polysaccharides from Chinese rice wine on DEAE-Sepharose FF chromatography column
2.1.2 黃酒粗多糖葡聚糖凝膠G75色譜柱純化
圖2為DEAE-Sepharose FF色譜柱初步分離得到的黃酒多糖組分CRWP1經(jīng)葡聚糖凝膠G75色譜柱的洗脫結果。如圖2所示,用葡聚糖凝膠G75色譜柱對多糖組分CRWP1進行洗脫,硫酸苯酚法檢測后得到單一對稱吸收峰,表明該組分純度較高。收集合并吸收峰位置洗脫液,將洗脫液透析和冷凍干燥后,得到白色的多糖樣品,說明多糖中混有的色素得到了很好的去除。
圖2 黃酒多糖組分CRWP1的葡聚糖凝膠G7色譜柱的洗脫曲線Fig.2 Elution curve of CRWP1 on Sephadex G75 chromatography column
圖3為黃酒多糖的高效凝膠過濾色譜圖,通過對圖形分析可知,經(jīng)DEAE-Sepharose FF色譜柱和葡聚糖凝膠G7色譜柱分離純化可得到純度較高的黃酒多糖組分。根據(jù)標準分子量葡聚糖繪制的標準曲線,得到黃酒多糖的重均相對分子質量為7 850。
圖3 黃酒多糖組分CRWP1的HPGPC色譜圖Fig.3 HPGPC chromatography of CRWP1
圖4、5分別給出了混合標樣和CRWP1的離子色譜圖。出峰時間和代表的化合物如表1和表2所示。
圖4 混合標樣的離子色譜圖Fig.4 HPAEC separation with pulsed-amperometric detection of sugar standard solution
由表1和表2可知,黃酒多糖組分CRWP1各峰保留時間與阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、巖藻糖、半乳糖和甘露糖標準品的保留時間一致,通過進一步分析可知阿拉伯糖、葡萄糖和木糖為CRWP1的主要組分,并含有少量巖藻糖、半乳糖和甘露糖。
表1 單糖標準品的高效陰離子色譜分析Table 1 Analysis for the spectrum of HPAEC for monosaccharide standards
表2 黃酒多糖組分CRWP1的高效陰離子色譜分析Table2 Analysisforthespectrum ofHPAEC formonosaccharide standards
黃酒多糖組分CRWP1的紫外光譜掃描信息如圖6所示,根據(jù)CRWP1在200~600 nm波長范圍內的掃描結果,在260 nm和280 nm兩個位置均為出現(xiàn)明顯吸收,說明經(jīng)DEAE-Sepharose FF色譜柱和葡聚糖凝膠G75色譜柱分離后得到的黃酒多糖組分CRWP1不含核酸和蛋白質。
圖6 黃酒多糖組分CRWP1的紫外光譜圖Fig.6 UV spectra of CRWP1
取干燥后的黃酒多糖CRWP1經(jīng)溴化鉀壓片后制樣,進行紅外掃描,其傅里葉變換紅外光譜吸收信息如圖7所示。
圖7 黃酒多糖組分CRWP1的傅里葉變換紅外光譜圖Fig.7 FT-IR spectra of CRWP1
從圖7可以看出,多糖組分CRWP1在3 380.41 cm-1的吸收峰寬而強,表明分子間或分子內存在O-H伸縮振動;2 925.99 cm-1處的吸收峰,說明存在糖類物質的C-H鍵伸縮振動[12];1 653 cm-1處的強吸收峰,為-CHO中的C=O伸縮振動特征吸收;1 419 cm-1、1 365.69 cm-1處存在弱吸收峰,說明存在 C-H 變角振動;1 152.20 cm-1、1 087.07 cm-1、1 027.40 cm-1有吸收峰,說明存在β-吡喃糖基CO-H和C-O-C中C-O引起的振動吸收;843.27 cm-1存在吸收峰,即為α-D-Glc吡喃構型和β-糖苷鍵引起的特征吸收;760.95 cm-1有吸收,說明存在α-D-木吡喃環(huán)的對稱伸縮振動。
由圖8可知,當NaOH的濃度在0~0.05 mol/L范圍內變化時,黃酒多糖組分CRWP1與剛果紅形成的絡合物的λmax隨濃度的增加而增加;當NaOH濃度在0.05~0.5 mol/L范圍內變化時,黃酒多糖組分CRWP1與剛果紅形成的絡合物的λmax隨濃度的增加而逐漸減小,而為添加黃酒多糖組分CRWP1的剛果紅溶液的λmax隨NaOH濃度的增加 (0~0.5 mol/L)而不斷下降。由此說明,在黃酒多糖組分CRWP1存在三股螺旋結構,該結構在弱堿性條件下與剛果紅形成絡合物,使λmax增大;但該結構在強堿性溶液中不穩(wěn)定,當NaOH溶液濃度大于0.05 mo/L時,三股螺旋結構中的氫鍵被破壞,從而表現(xiàn)為λmax的降低。
圖8 黃酒多糖組分CRWP1在NaOH溶液中的λmaxFig.8 Maximum absorption wavelength of mixture ofCRWP1 in various concentration of NaOH
黃酒多糖組分CRWP1核磁共振波譜分析如圖9、10所示。從黃酒多糖組分CRWP1的1H-NMR圖譜(圖9)分析可知,δ 4.790處的信號為水分子的信號;在異頭氫區(qū)的共振區(qū)域δ 5.00~5.40范圍內共有5個異頭氫的共振峰,分別是 δ 5.181、5.302、5.312、5.333、5.354,其化學位移均大于4.9,并且在5.40處未出現(xiàn)質子信號,說明黃酒多糖組分CRWP1為含有α型糖殘基的吡喃糖[13]。
圖9 黃酒多糖組分CRWP1的1H-NMRFig.9 1H-NMR spectrum of CRWP1
由圖10可知,異頭碳的共振峰出現(xiàn)在δ 95.873~99.927,共有5個共振峰,說明黃酒多糖組分CRWP1是由5種單糖殘基組成的雜多糖。多糖中同一單糖的位置不同,異頭碳的化學位移也會不同;取代基的空間排列對異頭碳的化學位移影響較大,與異頭碳上垂直鍵的化學位移相比,平伏鍵的化學位移處于較高場例如α-型糖苷異頭碳和多數(shù)β-型糖苷異頭碳的化學位移分別處于95~101和101~105[14]。
由據(jù)圖10發(fā)現(xiàn),在δ 95~101范圍內出現(xiàn)共振信號,說明黃酒多糖組分CRWP1含有α糖苷鍵構型。一般情況下,可根據(jù)13C-NMR檢測到的信號將多糖分為呋喃糖、吡喃糖,其中呋喃糖的三位碳和五位碳在δ 82~84范圍內無信號,而吡喃糖的三位碳和五位碳的化學位移小于80。同時根據(jù)圖10發(fā)現(xiàn),δ 82~84范圍內未有信號出現(xiàn),說明黃酒多糖組分CRWP1不存在呋喃型結構,因此可以初步確定黃酒多組分CRWP1的單糖殘基構型為吡喃型[14-15]。未被取代時吡喃糖殘基的C2、C3、C4化學位移為70~76,一旦發(fā)生取代,其相應位移將移向76~85;對于C6(δ60~65)位發(fā)生取代后,其位移將移至67~76。結合圖3~9可知,黃酒多糖組分CRWP1在76~85范圍內出現(xiàn)信號,即為C3位糖苷鍵取代后的共振峰,說明黃酒多糖組分CRWP1存在1,3連接糖苷鍵[16];在δ 75.911處出現(xiàn)的信號為被取代的C4糖殘基信號,說明黃酒多糖組分CRWP1中含有少量1,4連接糖苷鍵。
圖10 黃酒多糖組分CRWP1的13C-NMRFig.10 13C-NMR spectrum of CRWP1
采用DEAE-Sepharose FF色譜柱和葡聚糖凝膠G75色譜柱對黃酒粗多糖進行分離純化,得到一種白色的黃酒多糖組分CRWP1。并且使用HPGPC對該組分的純度和相對分子質量進行測定,其洗脫峰呈單一、對稱正態(tài)分布,說明經(jīng)DEAE-Sepharose FF色譜柱和葡聚糖凝膠G7色譜柱分離純化得到的黃酒多糖組分CRWP1為純度較高的單一組分,相對分子質量為7 850;并且經(jīng)高效陰離子色譜檢測證明,CRWP1主要由阿拉伯糖、葡萄糖和木糖組成,并含有少量巖藻糖、半乳糖和甘露糖;此外,采用紫外光譜、紅外光譜以及核磁共振波譜對黃酒多糖組分CRWP1的結構進行分析,結果表明所得多糖組分CRWP1為在1,3糖苷鍵主鏈上連接有1,4糖苷鍵支鏈的雜多糖,含有α糖苷鍵構型,并且其單糖殘基為吡喃型。
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Isolation,Purification and Physicochemical Properties of Polysaccharides from Chinese Rice Wine
MENG Xiangyong1,2,3,4,SHEN Chi1,2,5,MAO Jian*1,2,3,4,JI Zhongwei1,2,3,4
(1.National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology,Jiangnan University,Wuxi 214122,
China;2.School of Food Science and Technology,Jiangnan University,Wuxi 214122,China;3.Synergetic Innovation CenterofFood Safety and Nutrition,Jiangnan University,Wuxi214122,China;4.National Engineering Research Center of Chinese Rice Wine,Shaoxing 31200,China;5.Shaoxing University,Shaoxing 31200,China)
In this study,Chinesericewinefrom Shaoxing region was used to extract polysaccharides,and the protein of crude polysaccharides sample was precipitated by sevag.The isolation,purification of polysaccharides was performed by DEAE-Sepharose Fast Flow and Sephadex G75.Furthermore,the purity and molecular weight were determined by high performance gel permeation chromatography (HPGPC).Ultraviolet spectrum (UV),fourier transform infrared spectrometry (FTIR)and NMR were for determining the structure of CRWP1.It was showed as a single symmetrical peak on high-performance gel-permeation chromatography (HPGPC)and theaverage molecular weight was 7 850 Da.The results showed that CRWP1 was a heteroglycan,which was composed mainly of glucose,arabinose,xylose,and a small quantity of fucose,galactose and mannose.There was one glycosidic configuration (α)in structure of polysaccharides from Shaoxing rice wine,and the glycosidic bond was galactopyranose type.It was also revealed that the structure of polysaccharides from Shaoxing rice wine contained 1,3 glycosidic bonds as the main chain and 1,4 glycosidic bonds as branched chain.
Shaoxing rice wine,macromolecule,molecularweight,monosaccharide,structure characteristics
TS 262
A
1673—1689(2017)10—1029—07
2015-09-02
國家863計劃項目(2013AA102203-06);中央高?;究蒲袠I(yè)務費(JUSRP11411)。
孟祥勇(1982—),男,安徽碭山人,工學博士,副教授,主要從食品生物技術研究。E-mail:nelmeng@163.com
*通信作者:毛 健(1970—),男,安徽宿州人,工學博士,教授,博士研究生導師,主要從事食品生物技術研究。E-mail:biomao@263.net
孟祥勇,沈赤,毛健,等.黃酒多糖的分離純化及理化性質研究[J].食品與生物技術學報,2017,36(10):1029-1035.