ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原結(jié)果影響因素探究

許澍妮

【摘要】 目的 探討酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)慢性乙型肝炎（乙肝）表面抗原中的有關(guān)影響因素。方法 231份乙肝表面抗原樣本， 采用ELISA法檢測(cè)， 針對(duì)影響檢測(cè)結(jié)果的各方面因素進(jìn)行分析。結(jié)果 第一組樣本在0.5 h檢測(cè)陽(yáng)性率為12.50%（11/88）， 1 h后檢測(cè)陽(yáng)性率為7.95%（7/88）， 2 h后檢測(cè)陽(yáng)性率為1.14%（1/88）。第二組4支試管檢測(cè)陽(yáng)性率：不抗凝管為2.86%（2/70）， 枸櫞酸鈉管為0（0/70）、肝素鈉抗凝管為7.14%（5/70）、EDTA-K2管為0（0/70）。第三組樣本檢測(cè)陽(yáng)性率與血細(xì)胞水平濃度由低到高依次為9.59%（7/73）、54.79%（40/73）、100.00%（73/73）。結(jié)論 采用ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原過(guò)程中， 其檢測(cè)結(jié)果受多方面因素影響， 為保證檢測(cè)的準(zhǔn)確率， 需要進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)并換用不同方式進(jìn)行測(cè)定， 以保障檢測(cè)準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】 酶聯(lián)免疫吸附法；乙肝表面抗原；影響因素

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.33.016

采用ELISA法對(duì)乙肝表面抗原結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)為臨床最常用檢測(cè)方式， 該檢測(cè)方式具備操作簡(jiǎn)單、靈敏度高且存在有較高特異性等方面特點(diǎn)， 可有效提升臨床對(duì)乙肝病癥診斷效率。而結(jié)合實(shí)際情況可知， 在采用該法檢測(cè)過(guò)程中存在有一定假陽(yáng)性率[1]， 很容易對(duì)被采集者造成精神壓力。為有效保證該檢測(cè)技術(shù)準(zhǔn)確性， 使得該檢測(cè)方案臨床價(jià)值進(jìn)一步彰顯。本次本院就針對(duì)ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原過(guò)程中有關(guān)影響因素加以分析， 報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料來(lái)源 收集本站2016年1～12月乙肝表面抗原樣本231份， 本組血液樣本男131例， 女100例， 年齡28～48歲， 平均年齡（31.01±1.74）歲。

1. 2 方法 采用ELISA法檢測(cè)， 所用試劑均符合臨床檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)， 所用設(shè)備為RT-2000i酶標(biāo)儀。在檢測(cè)過(guò)程中， 各方面操作均嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行， 并結(jié)合檢測(cè)情況將樣本劃分為3組。第一組：在本組待檢測(cè)樣本中隨機(jī)選取88份作為不抗凝血液樣本， 將每份樣本均分為3支試管， 分別靜止0.5、1、2 h后， 于常規(guī)離心機(jī)中進(jìn)行離心處理， 轉(zhuǎn)速設(shè)定為3500 r/min，

離心時(shí)間為15 min左右， 待血清后對(duì)乙肝表面抗原進(jìn)行檢測(cè)。第二組：于本組待檢測(cè)樣本中隨機(jī)抽取70份， 均分于4支試管中（不抗凝管、枸櫞酸鈉管、肝素鈉抗凝管以及EDTA-K2管）其中不抗凝管， 靜置2 h后進(jìn)行離心檢測(cè)， 其他試管3 h

后去血漿檢測(cè)。第三組：以余下73份樣本（含血細(xì)胞）， 按照3個(gè)濃度（0.25×1012/L、0.125×1012/L、0.065×1012/L）梯度實(shí)施稀釋操作后再進(jìn)行檢測(cè)。觀察三組樣本的檢測(cè)陽(yáng)性率。

2 結(jié)果

第一組樣本在0.5 h檢測(cè)陽(yáng)性率為12.50%（11/88）， 1 h后檢測(cè)陽(yáng)性率為7.95%（7/88）， 2 h后檢測(cè)陽(yáng)性率為1.14%（1/88）。第二組4支試管檢測(cè)陽(yáng)性率：不抗凝管為2.86%（2/70）， 枸櫞酸鈉管為0（0/70）、肝素鈉抗凝管為7.14%（5/70）、EDTA-K2管為0（0/70）。第三組樣本檢測(cè)陽(yáng)性率與血細(xì)胞水平濃度由低到高依次為9.59%（7/73）、54.79%（40/73）、100.00%（73/73）。

3 討論

乙肝為臨床較為常見(jiàn)病癥類型， 主要因乙型肝炎病毒感染而導(dǎo)致， 存在較高的傳染性及危害性。臨床多采用ELISA法對(duì)血液樣本進(jìn)行檢測(cè)， 基于該檢測(cè)方式具備操作簡(jiǎn)單、靈敏度高等方面特點(diǎn)， 在很大程度上提升了臨床對(duì)乙肝的檢出效率。而結(jié)合實(shí)際可知， 該檢測(cè)方式在運(yùn)用中容易受多方面因素影響。

3. 1 不抗凝血液樣本 結(jié)合本次觀察可知， 在不同自凝時(shí)間進(jìn)行檢測(cè)， 在檢測(cè)結(jié)果上存在一定差異。在實(shí)際檢測(cè)工作中， 出于多方面原因， 血液尚未開(kāi)始凝固時(shí)便開(kāi)始進(jìn)行檢測(cè)， 很容易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。主要因血清中存在有少量纖維蛋白原， 易在反應(yīng)孔壁中黏附， 甚至在孔中出現(xiàn)凝集， 使得酶結(jié)合物在孔中被吸附所致。同時(shí)， 纖維蛋白原的反應(yīng)微環(huán)境發(fā)生改變同樣會(huì)使得檢驗(yàn)的靈敏度降低， 造成假陰性[2， 3]。

3. 2 加抗凝劑標(biāo)本 主要因在使用抗凝劑的過(guò)程中， 其在發(fā)揮抗凝作用的同時(shí)， 會(huì)與血液中有關(guān)物質(zhì)形成結(jié)合物， 起到對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)中過(guò)氧化物酶顯色反應(yīng)抑制或者促進(jìn)的效果， 影響到檢測(cè)結(jié)果。

3. 3 保障檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性有關(guān)對(duì)策 結(jié)合上述因素分析， 為有效保障該檢測(cè)系統(tǒng)在運(yùn)用中的準(zhǔn)確性， 需要對(duì)以下幾方面內(nèi)容加以重視：①做好檢測(cè)前質(zhì)量控制工作。在檢測(cè)前需考慮采集者是否存在黃疸、高脂血癥等， 同時(shí)更需要考慮到采集方式是否會(huì)導(dǎo)致溶血情況發(fā)生等。②檢測(cè)中質(zhì)量控制。在正式對(duì)待檢測(cè)樣本進(jìn)行檢測(cè)過(guò)程中， 檢驗(yàn)醫(yī)師需要做好檢測(cè)前樣本檢測(cè)工作， 確保樣本質(zhì)量符合檢測(cè)要求。同時(shí)， 各方面檢測(cè)操作均需要嚴(yán)格按照操作流程進(jìn)行。同時(shí)， 為避免不同處理方式對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。針對(duì)疑似樣本， 還需要通過(guò)其他方式進(jìn)一步進(jìn)行檢測(cè)。必要時(shí)對(duì)脫氧核糖核酸（HBV-DNA）水平進(jìn)行測(cè)定[4-7]。

結(jié)合本次分析可知， 在采用ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原過(guò)程中， 在多方面因素的共同作用下， 將直接影響到檢測(cè)準(zhǔn)確性， 很容易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)生[8-10]。在使得被采集者形成巨大心理壓力的同時(shí)， 更容易誘發(fā)醫(yī)療糾紛， 不利于醫(yī)療工作的順利進(jìn)行。

總之， 為使得該檢測(cè)方式的臨床綜合價(jià)值進(jìn)一步得到彰顯， 實(shí)現(xiàn)對(duì)乙肝的有效篩查， 還需要對(duì)檢測(cè)過(guò)程中各方面細(xì)節(jié)問(wèn)題加以重視， 嚴(yán)格按照操作流程實(shí)施檢測(cè)， 以保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

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[收稿日期：2017-07-14]endprint