孫千鴻
(昆明醫(yī)科大學(xué) 海源學(xué)院,昆明 650106)
油茶蒲中總?cè)铺崛」に囇芯?/p>
孫千鴻
(昆明醫(yī)科大學(xué) 海源學(xué)院,昆明 650106)
以油茶蒲為原料,利用甲醇作為浸提劑,研究了總?cè)频奶崛」に?。采用單因素試?yàn)考察了甲醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、浸提溫度和浸提時(shí)間對(duì)總?cè)铺崛⌒Ч挠绊懀⑼ㄟ^(guò)正交試驗(yàn)分析確定了總?cè)频淖罴烟崛」に嚄l件。結(jié)果表明:影響總?cè)铺崛〉囊蛩刂鞔雾樞驗(yàn)榻釙r(shí)間gt;料液比gt;甲醇體積分?jǐn)?shù)gt;浸提溫度;最佳提取工藝條件為甲醇體積分?jǐn)?shù)80%、料液比1∶25、浸提溫度80℃、浸提時(shí)間2.0 h,在此條件下,總?cè)飘a(chǎn)率為0.115%。
油茶蒲;總?cè)疲唤?;正交試?yàn)
油茶為我國(guó)特有木本油料樹(shù)種,與油橄攬、油棕、椰子并稱(chēng)為世界四大木本油料植物[1],與烏桕、油桐和核桃并稱(chēng)為我國(guó)四大木本油料植物[2]。油茶果實(shí)是由果殼(又稱(chēng)為油茶蒲)、油茶籽殼和種仁組成,分別占63.64%、14.38%和21.98%[3],其中油茶蒲提取物具有抗癌[4]、清除自由基[5]、減肥[6]、降糖[7]、改善良性前列腺增生[8]等作用。目前很多茶油企業(yè)對(duì)油茶蒲只是簡(jiǎn)單利用,并沒(méi)有發(fā)揮其全面價(jià)值。
大多數(shù)三萜類(lèi)化合物是一類(lèi)基本母核由30個(gè)碳原子(含6個(gè)異戊二烯單位)縮合而成的萜類(lèi)化合物,也是一類(lèi)重要的中藥化學(xué)成分。目前已發(fā)現(xiàn)的三萜類(lèi)化合物,多數(shù)為四環(huán)三萜和五環(huán)三萜,少數(shù)為鏈狀、單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)三萜。三萜類(lèi)化合物具有廣泛的生理活性,即保肝、抗腫瘤、抗HIV-1 及HIV-1蛋白酶活性、抗帶狀皰疹病毒及增加免疫力等諸多功效[9-11]。本研究以油茶蒲總?cè)飘a(chǎn)率為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化油茶蒲中總?cè)频奶崛」に?,旨在為生產(chǎn)和制劑研究提供依據(jù)。
1.1 試驗(yàn)材料
油茶蒲:取自于湖南大三湘油茶科技有限公司,超微粉碎,過(guò)60目分析篩,水分為17.53%。熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品:購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司;甲醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸等均為分析純。
AUW220D電子天平:日本島津;UV-3600紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì):日本島津。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 油茶蒲總?cè)铺崛」に嘯12]
油茶蒲→粉碎(60目)→甲醇浸提→過(guò)濾→旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)→總?cè)平唷?/p>
1.2.2 總?cè)坪康臏y(cè)定
1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制
精確稱(chēng)量熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品2.000 g,用80%甲醇溶液稀釋定容至50 mL,配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別取1.0~10.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液加入5%香草醛-冰醋酸0.4 mL、高氯酸1 mL,稀釋至50.00 mL,60℃水浴顯色45 min,將系列標(biāo)準(zhǔn)溶液在波長(zhǎng)548 nm處測(cè)定吸光度。以熊果酸的微克數(shù)(X)為橫坐標(biāo),吸光度(A)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。得到的回歸方程為:A=0.060 5X+0.160 3(R2=0.997 7)。
1.2.2.2 樣品測(cè)定
稱(chēng)取2.000 g浸膏,加入80%甲醇溶液定容至50 mL容量瓶中。取1 mL溶液于具塞試管中,沸水浴加熱揮干溶劑。按照1.2.2.1進(jìn)行顯色。冷卻后加入冰醋酸約3.6 mL,測(cè)定548 nm處吸光度,代入回歸方程計(jì)算總?cè)坪俊?/p>
1.2.3 總?cè)飘a(chǎn)率的計(jì)算
總?cè)飘a(chǎn)率=總?cè)平嘀锌側(cè)瀑|(zhì)量/油茶蒲質(zhì)量×100%。
2.1 單因素試驗(yàn)
2.1.1 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
在料液比1∶20、浸提溫度70℃、浸提時(shí)間1.5 h條件下,考察甲醇體積分?jǐn)?shù)為50%、60%、70%、80%和90%對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響。結(jié)果如圖1所示。
圖1 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
由圖1可知,隨著甲醇體積分?jǐn)?shù)的增大,總?cè)飘a(chǎn)率也逐漸增大,但甲醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到80%以后,總?cè)飘a(chǎn)率反而減少。可見(jiàn)甲醇體積分?jǐn)?shù)和總?cè)频娜芙舛扔芯o密關(guān)系,在達(dá)到溶解度最大的條件下繼續(xù)加大甲醇體積分?jǐn)?shù),會(huì)導(dǎo)致副產(chǎn)物沉淀的出現(xiàn)[13],反而影響總?cè)飘a(chǎn)率。因此,選擇甲醇體積分?jǐn)?shù)60%~80%進(jìn)行正交優(yōu)化試驗(yàn)。
2.1.2 料液比對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
在甲醇體積分?jǐn)?shù)80%、浸提溫度70℃、浸提時(shí)間1.5 h條件下,考察料液比為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25和1∶30對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響。結(jié)果如圖2所示。
圖2 料液比對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
由圖2可知,隨著料液比增大,總?cè)飘a(chǎn)率增加,但變化幅度不大。因?yàn)樵诹弦罕仍龃髸r(shí),總?cè)频漠a(chǎn)率主要還是需要極性溶劑溶出,過(guò)大的原料量并不能增加過(guò)多的總?cè)坪?。因此,選擇料液比1∶15~1∶25進(jìn)行正交優(yōu)化試驗(yàn)。
2.1.3 浸提溫度對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
在甲醇體積分?jǐn)?shù)80%、料液比1∶20、浸提時(shí)間1.5 h條件下,考察浸提溫度為50、60、70、80℃和90℃ 對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響。結(jié)果如圖3所示。
圖3 浸提溫度對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
由圖3可知,總?cè)飘a(chǎn)率隨浸提溫度升高先增加后下降,當(dāng)浸提溫度達(dá)到70~80℃時(shí),總?cè)飘a(chǎn)率最大。溫度對(duì)總?cè)铺崛∵^(guò)程有兩方面的作用,一方面,溫度與傳質(zhì)效率呈正比,傳質(zhì)速率隨溫度升高而增大;另一方面,溫度升高,溶解在溶劑中的膠質(zhì)增加,使得溶劑混合液黏度增加,影響總?cè)频奶崛⌒Ч⑶覝囟冗^(guò)高,會(huì)造成總?cè)七@類(lèi)天然活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)遭到破壞[14]。因此,選擇提取效果較好的浸提溫度60~80℃時(shí)進(jìn)行正交優(yōu)化試驗(yàn)。
2.1.4 浸提時(shí)間對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
在甲醇體積分?jǐn)?shù)80%、料液比1∶20、浸提溫度70℃條件下,考察浸提時(shí)間為0.5、1.0、1.5、2.0 h和2.5 h對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響。結(jié)果如圖4所示。
圖4 浸提時(shí)間對(duì)總?cè)飘a(chǎn)率的影響
由圖4可知,總?cè)飘a(chǎn)率隨浸提時(shí)間延長(zhǎng)先增大后趨于平衡,當(dāng)浸提1.5 h時(shí),總?cè)飘a(chǎn)率增加到最大,當(dāng)浸提時(shí)間超過(guò)1.5 h,總?cè)飘a(chǎn)率不再增加。浸提時(shí)間對(duì)總?cè)铺崛∵^(guò)程的影響主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面:一方面,溶劑與油茶蒲混合,溶劑不斷向油茶蒲內(nèi)部擴(kuò)散,從細(xì)胞內(nèi)部溶解總?cè)?;另一方面,溶解總?cè)频娜軇┫蚣?xì)胞外擴(kuò)散到溶劑主體中,直至細(xì)胞內(nèi)部總?cè)茲舛扰c溶劑主體總?cè)茲舛鹊竭_(dá)一致時(shí),傳質(zhì)過(guò)程保持動(dòng)態(tài)平衡,但浸提時(shí)間不足,則總?cè)铺崛〔煌耆瑫r(shí)間過(guò)多易改變成分并且增加能耗。因此,選擇提取效果較好的浸提時(shí)間1.0~2.0 h進(jìn)行正交優(yōu)化試驗(yàn)。
2.2 正交優(yōu)化試驗(yàn)
在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,對(duì)甲醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、浸提溫度和浸提時(shí)間進(jìn)行四因素三水平正交優(yōu)化試驗(yàn)。正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 正交試驗(yàn)結(jié)果
由表1可知,影響總?cè)飘a(chǎn)率的影響因素主次順序?yàn)镈(浸提時(shí)間)gt;B(料液比)gt;A(甲醇體積
分?jǐn)?shù))gt;C(浸提溫度)。油茶蒲中總?cè)谱罴烟崛」に嚱M合為A3B3C3D3,即甲醇體積分?jǐn)?shù)80%、料液比1∶25、浸提溫度80℃、浸提時(shí)間2.0 h。在最佳提取條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),總?cè)破骄a(chǎn)率為0.115%。
從油茶蒲中提取總?cè)?,采用單因素試?yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。得到從油茶蒲中提取總?cè)频淖罴压に嚄l件為:甲醇體積分?jǐn)?shù)80%,料液比1∶25,浸提溫度80℃,浸提時(shí)間2.0 h。在最佳提取條件下,總?cè)飘a(chǎn)率為0.115%。
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Extractionprocessoftotaltriterpenoidsfromfruithullofoil-teacamellia
SUN Qianhong
(Haiyuan College, Kunming Medical University, Kunming 650106, China)
With methanol as extraction agent, the extraction process of total triterpenoids from fruit hull of oil-tea camellia was studied. The effects of volume fraction of methanol, ratio of solid to liquid, extraction temperature and extraction time on extraction effect were studied by single factor experiment, and the extraction conditions were optimized by orthogonal experiment. The results showed that the extraction time had the greatest effect on extraction of total triterpenoids, followed by ratio of solid to liquid, volume fraction of methanol and extraction temperature. The optimal process conditions were obtained as follows: volume fraction of methanol 80%, ratio of solid to liquid 1∶25, extraction temperature 80℃ and extraction time 2.0 h. Under these conditions, the yield of total triterpenoids was 0.115%.
fruit hull of oil-tea camellia; total triterpenoids; extraction; orthogonal experiment
TS229;S565
A
1003-7969(2017)11-0121-03
2017-04-01;
2017-08-17
孫千鴻(1980),女,講師,研究方向?yàn)榛瘜W(xué)化工(E-mail)lindasunqianhong@163.com。