• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    丙酮酸激酶M2蛋白表達(dá)與各期胃癌臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性分析

    2017-12-06 08:21:08陳光俠何曉華吳倩倩高立永吳傳楠陳卓
    臨床外科雜志 2017年11期
    關(guān)鍵詞:賦值進(jìn)展胃癌

    陳光俠 何曉華 吳倩倩 高立永 吳傳楠 陳卓

    ·論著·

    丙酮酸激酶M2蛋白表達(dá)與各期胃癌臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性分析

    陳光俠 何曉華 吳倩倩 高立永 吳傳楠 陳卓

    目的觀察丙酮酸激酶M2(PKM2)蛋白在胃癌組織表達(dá)及其與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。方法淺表性胃炎病人20例(對照組),早期胃癌組32例,進(jìn)展期胃癌組40例。應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測PKM2蛋白在上述組織中表達(dá)情況,并統(tǒng)計(jì)分析其表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果對照組和早期胃癌組中PKM2陽性表達(dá)率分別為5%(1/20)和61.8%(21/34),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)展期胃癌組織中PKM2蛋白表達(dá)水平與TNM分期、病理分級相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。早期胃癌PKM2表達(dá)強(qiáng)度越高,預(yù)后越差(P<0.05);TNM分期是進(jìn)展期胃癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。結(jié)論P(yáng)KM2蛋白在胃癌組織中表達(dá)升高,促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展,并影響病人預(yù)后。PKM2蛋白表達(dá)與進(jìn)展期胃癌TNM分期、病理分級相關(guān)。

    胃癌; 丙酮酸脫氫酶2; 臨床病理特征; 預(yù)后

    有研究表明,丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)的高表達(dá)可促進(jìn)肝癌的轉(zhuǎn)移,并可作為預(yù)后不良的指標(biāo),但對非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后評估卻毫無價(jià)值[1-2]。PKM2可通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄水平Bcl-xL表達(dá)從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長[3]。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測20例淺表性胃炎,32例早期胃癌及40例不同分期的進(jìn)展期胃癌PKM2蛋白的表達(dá),并分析其表達(dá)與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

    對象與方法

    一、對象

    2006年1月~2013年12月,我院行胃癌切除的胃癌組織標(biāo)本40例(進(jìn)展期胃癌組),行早期胃癌外科切除的早期胃癌標(biāo)本32例(早期胃癌組),內(nèi)鏡下活檢淺表性胃炎組織標(biāo)本20例(對照組),術(shù)前均未行放療、化療及免疫治療。共92例,其中男性45例,女性47例。年齡21~80歲,平均年齡55.39歲。胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)及臨床分期參照文獻(xiàn)[4],早期胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[5]。

    二、方法

    20例淺表性胃炎、32例早期胃癌及40例進(jìn)展期胃癌組織蠟塊連續(xù)切片,采用免疫組化SP法,按照烤片、水化、抗原修復(fù)、封閉,1∶1000比例稀釋PKM2一抗,過夜后加入二抗,DAB顯色、蘇木素襯染、酒精分化,脫水,透明、中性樹膠封片、顯微鏡觀察等步驟進(jìn)行。兔抗人PKM2抗體均購自Abcam公司,SP檢測試劑盒及DAB顯色液均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。PKM2以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性,每張切片由2位資深病理專家讀片,于400倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)不同視野,每個(gè)視野得分由陽性細(xì)胞比例或顯色強(qiáng)度決定。陽性細(xì)胞比例≤25%為0分,26~50%為1分,51~75%為2分,≥76%為3分;顯色強(qiáng)度未著色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。

    三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    應(yīng)用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,多組間比較采用單因素方差分析,PKM2表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理因素之間的關(guān)系應(yīng)用Chi-square test或確切概率法,與生存時(shí)間的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存率曲線,運(yùn)用COX回歸模型進(jìn)行多因素比例風(fēng)險(xiǎn)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1.PKM2在對照組、早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組中表達(dá):均值分別為0.05、1.067、1.316,早期胃癌組及進(jìn)展期胃癌組中PKM2表達(dá)水平與對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PKM2的表達(dá)水平在早期胃癌組即明顯升高,當(dāng)腫瘤繼續(xù)發(fā)展至進(jìn)展期,雖然其表達(dá)水平繼續(xù)升高,但在進(jìn)展期胃癌組與早期胃癌組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖1)。

    2.PKM2表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系:早期胃癌組織中PKM2表達(dá)陽性21例,陰性11例。PKM2表達(dá)與病人年齡、性別、病理分級無明顯相關(guān),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。進(jìn)展期胃癌組織中PKM2表達(dá)陽性28例,陰性12例。PKM2表達(dá)與TNM分期、病理分級相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與年齡、性別無明顯相關(guān),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

    表1 早期胃癌中PKM2表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

    注:統(tǒng)計(jì)方法為確切概率法

    表2 進(jìn)展期胃癌中PKM2表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

    注:統(tǒng)計(jì)方法為Chi-square test

    3.PKM2表達(dá)與病人預(yù)后的關(guān)系:所有病例隨訪時(shí)間48~94個(gè)月,平均72.9個(gè)月。20例淺表性胃炎組病人全部完成隨訪,無死亡,存活率100%。32例早期胃癌組病人全部隨訪完成,隨訪率100%,因病死亡3例,采用Kaplan-Meier法對PKM2表達(dá)進(jìn)行累積生存時(shí)間分析;PKM2表達(dá)強(qiáng)度越高,預(yù)后越差(P<0.05)。見圖2A。40例進(jìn)展期癌病人,失訪23例,失訪率57.5%,存活10例,死亡7例,死亡率17.5%,同樣采用Kaplan-Meier法對PKM2表達(dá)進(jìn)行累積生存時(shí)間分析,PKM2表達(dá)與預(yù)后無明顯相關(guān)(P>0.05)。見圖2B。

    (A)早期胃癌PKM2表達(dá)強(qiáng)度越高,預(yù)后越差(χ2=11.677,P=0.009);(B)進(jìn)展期胃癌PKM2表達(dá)強(qiáng)度與預(yù)后無關(guān)。圖2 不同分期胃癌PKM2表達(dá)強(qiáng)度與病人預(yù)后的關(guān)系

    4.胃癌病人生存時(shí)間的多因素分析:運(yùn)用COX回歸多因素模型分別對早期胃癌及進(jìn)展期胃癌各因素進(jìn)行分析,各變量賦值如下:年齡:<60歲賦值為0,≥60歲賦值為1;性別:女賦值為0,男賦值為1;TNM分期:Ⅰ/Ⅱ期賦值為0,Ⅲ/Ⅳ期賦值為1;病理類型:中高分化賦值為0,低分化/印戒細(xì)胞癌賦值為1;PKM2表達(dá):無表達(dá)賦值為0,有表達(dá)賦值為1;T表示病人生存時(shí)間,單位為月;Y表示病人結(jié)局:死亡賦值為0,截尾賦值為1(早期胃癌組無TNM分期,病理類型:中高分化及瘤變賦值為0,低分化/印戒細(xì)胞癌賦值為1)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):早期胃癌COX回歸多因素模型分析,各協(xié)變量對病人生存時(shí)間的影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。進(jìn)展期胃癌COX回歸多因素模型(P<0.05),此檢驗(yàn)?zāi)P途哂薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義,TNM分期是進(jìn)展期胃癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。在進(jìn)展期胃癌中各協(xié)變量在均值時(shí)的生存曲線見圖3。

    圖3 進(jìn)展期胃癌中各協(xié)變量在均值時(shí)的生存曲線

    討 論

    全球范圍內(nèi),胃癌是第3位癌癥相關(guān)的死亡原因[6]。我國胃癌的發(fā)病率處于惡性腫瘤的第2位。腫瘤的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為是引起死亡的重要原因。腫瘤維持其惡性生物學(xué)行為需要充足的能量供給,糖代謝是腫瘤最主要的供能方式。根據(jù)“Warburg效應(yīng)”,腫瘤細(xì)胞在缺氧或不缺氧條件下,都優(yōu)先進(jìn)行糖酵解[7],PKM2是糖酵解的關(guān)鍵酶[8]。有研究表明,在食管鱗癌組織中,PKM2表達(dá)升高,且與病人預(yù)后不良有關(guān)。PKM2亦可促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖,影響病人預(yù)后[9-10]。因此,靶向PKM2信號通路成為一種重要的抗腫瘤治療策略[11]。

    我們通過免疫組化發(fā)現(xiàn),PKM2的表達(dá)水平在對照組僅有1例呈陽性表達(dá),早期胃癌組即明顯升高,與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明在早期胃癌,腫瘤就開始依靠著高水平的糖酵解提供生長代謝的能量來源,而當(dāng)胃癌繼續(xù)發(fā)展至進(jìn)展期,其表達(dá)水平繼續(xù)升高,但與早期胃癌組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明糖酵解的供能方式貫穿在整個(gè)胃癌的進(jìn)展過程中。行Kaplan-Meier法進(jìn)行累積生存分析發(fā)現(xiàn),在早期胃癌組織中,PKM2表達(dá)強(qiáng)度越高,預(yù)后越差。進(jìn)展期胃癌預(yù)后差,5年生存率低,失訪率高。通過COX回歸多因素模型分析,在進(jìn)展期胃癌組織中,TNM分期的相對危險(xiǎn)度是8.925,是預(yù)后的獨(dú)立影響因素。TNM分期能夠較好的反映腫瘤進(jìn)展的程度,TNM分期越高,病人預(yù)后越差。Angelov等[12]回顧性研究統(tǒng)計(jì)分析155例胃癌病人預(yù)后與臨床病理參數(shù)(包括年齡,性別,血型,腫瘤分化程度,腫瘤位置,手術(shù)類型和輔助治療)之間的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn),TNM分期是影響病人預(yù)后的唯一因素。在進(jìn)展期胃癌組織中,PKM2表達(dá)與TNM分期和病理分級有相關(guān)性,但在進(jìn)一步的COX多因素模型分析中,卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能與各協(xié)變量之間相互作用及病例樣本量較少有關(guān)。

    PKM2在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用,阻斷其信號通路,有可能成為腫瘤治療的靶點(diǎn)。有研究表明,二甲雙胍可通過抑制HIF1α/PKM2信號通路,從而抑制腫瘤糖代謝,進(jìn)一步抑制腫瘤惡性生物學(xué)行為[13]。對內(nèi)鏡下活組織檢查或術(shù)后組織切片免疫組化檢測,PKM2可作為判斷早期胃癌病人預(yù)后的有用指標(biāo)。

    [1] Liu WR,Tian MX,Yang LX,et al.PKM2 promotes metastasis by recruiting myeloid-derived suppressor cells and indicates poor prognosis for hepatocellular carcinoma[J].Oncotarget,2015,6(2):846-861.

    [2] Kobierzycki C,Pula B,Werynska B,et al.The lack of evidence for correlation of pyruvate kinase M2 expression with tumor grade in non-small cell lung cancer[J].Anticancer Res,2014,34(7):3811-3817.

    [3] Kwon OH,Kang TW,Kim JH,et al.Pyruvate kinase M2 promotes the growth of gastric cancer cells via regulation of Bcl-xL expression at transcriptional level[J].Biochem Biophys Res Commun,2012,423(1):38-44.

    [4] 胡祥.胃癌的臨床分期及其重要意義[J].中國實(shí)用外科雜志,2011,31(8):652-656.

    [5] 廖專,孫濤,吳浩,等.中國早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識(shí)意見(2014年,長沙)[J].中華消化雜志,2014,34(7):433-448.

    [6] Torre LA,Bray F,Siegel RL,et al.Global cancer statistics,2012[J].CA Cancer J Clin,2015,65(2):87-108.

    [7] Warburg O.On the origin of cancer cells[J].Science,1956,123(3191):309-314.

    [8] Chaneton B,Gottlieb E.Rocking cell metabolism:revised functions of the key glycolytic regulator PKM2 in cancer[J].Trends Biochem Sci,2012,37(8):309-316.

    [9] Zhang X,He C,He C,et al.Nuclear PKM2 expression predicts poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma[J].Pathol Res Pract,2013,209(8):510-515.

    [10] Kwon OH,Kang TW,Kim JH,et al.Pyruvate kinase M2 promotes the growth of gastric cancer cells via regulation of Bcl-xL expression at transcriptional level[J].Biochem Biophys Res Commun,2012,423(1):38-44.

    [11] Gupta V,Wellen KE,Mazurek S,et al.Pyruvate Kinase M2:Regulatory Circuits and Potential for Therapeutic Intervention[J].Curr Pharm Des,2014,20(15):2595-2606.

    [12] Angelov KG,Vasileva MB,Grozdev KS,et al .Clinical and pathological characteristics,and prognostic factors for gastric cancer survival in 155 patients in Bulgaria[J].Hepatogastroenterology,2014,61(136):2421-2424.

    [13] Chen G,F(xiàn)eng W,Zhang S,et al.Metformin inhibits gastric cancer via the inhibition of HIF1α/PKM2 signaling[J].Am J Cancer Res,2015,5(4):1423-1434.

    AcorrelationanalysisoftheexpressionofpyruvatekinaseM2andthepathologyandprognosisingastriccancer

    CHENGuangxia,HEXiaohua,WUQianqian,etal.
    (DepartmentofGastroenterology,DepartmentofPathology,F(xiàn)irstPeople'sHospitalofXuzhou,Xuzhou221000,China)

    ObjectiveTo observe the expression of pyruvate kinase(PK)M2 in gastric cancer(GC)and analyze its relation with the clinicopathological features and prognosis and of GC.MethodsTwenty cases with superficial gastritis were made as control group,32 cases with early gastric carcinoma and 40 cases with advanced GC were made as experiment groups.Immunohistochemistry were used to detect the protein expression of PKM2 in GC tissues from the three groups.And the correlation between the expression level of PKM2 and clinicopathological characteristics and prognosis was analyzed.ResultsThe expression of PKM2 in the control group and early GC group was 5.0%(1/20)and 61.8%(21/34),respectively,the difference was significant(P<0.05).The expression level of PKM2 was associated with TNM stage(P<0.05)and pathological grade(P<0.01)in the advanced GC group.The higher expression of PKM2 in early GC suggested its poorer prognosis(χ2=11.677,P=0.009).And TNM staging was an independent factor affecting the prognosis of advanced GC(P<0.05).ConclusionThe expression of PKM2 in GC tissue promotes the occurrence,development of GC and impacts on its prognosis.It is associated with TNM stage and pathological grade in advanced GC.

    gastric cancer; pyruvate kinase M2; clinicopathological features; prognosis

    10.3969/j.issn.1005-6483.2017.11.019

    國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81602101);江蘇省333工程科研項(xiàng)目資助(BRA2016277);江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)臨床科技發(fā)展基金(JLY20160145);江蘇省衛(wèi)生廳科技計(jì)劃基金(Q201413);徐州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(社會(huì)發(fā)展- KC14SH007),徐州市衛(wèi)計(jì)委青年后備人才資助(2014002)

    221002 江蘇省徐州市第一人民醫(yī)院消化科(陳光俠、何曉華、吳倩倩、吳傳楠、陳卓);病理科(高立永)

    何曉華,Email:hexiaohua00@126.com

    2017-04-12)

    楊澤平)

    猜你喜歡
    賦值進(jìn)展胃癌
    關(guān)于1 1/2 … 1/n的一類初等對稱函數(shù)的2-adic賦值
    L-代數(shù)上的賦值
    Micro-SPECT/CT應(yīng)用進(jìn)展
    強(qiáng)賦值幺半群上的加權(quán)Mealy機(jī)與加權(quán)Moore機(jī)的關(guān)系*
    利用賦值法解決抽象函數(shù)相關(guān)問題オ
    P53及Ki67在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義
    胃癌組織中LKB1和VEGF-C的表達(dá)及其意義
    胃癌組織中VEGF和ILK的表達(dá)及意義
    寄生胎的診治進(jìn)展
    中醫(yī)辨證結(jié)合化療治療中晚期胃癌50例
    国产成人一区二区在线| 亚洲av中文av极速乱| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久草成人影院| 亚洲不卡免费看| 中文资源天堂在线| av播播在线观看一区| 色吧在线观看| 一本久久精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一个人看的www免费观看视频| av播播在线观看一区| 久久久久久久午夜电影| 大香蕉97超碰在线| 天堂网av新在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 亚洲欧美清纯卡通| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 全区人妻精品视频| 国产精品久久久久久精品电影| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲国产精品成人久久小说| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲国产精品合色在线| 少妇被粗大猛烈的视频| 青青草视频在线视频观看| 能在线免费观看的黄片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产av码专区亚洲av| 国产一区二区在线观看日韩| 偷拍熟女少妇极品色| 水蜜桃什么品种好| 日本欧美国产在线视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 一级爰片在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲自偷自拍三级| 午夜福利视频1000在线观看| 国产成人a区在线观看| 国产探花极品一区二区| 美女大奶头视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 成人性生交大片免费视频hd| 久久久久久久久中文| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品,欧美在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 干丝袜人妻中文字幕| 97超碰精品成人国产| 成人毛片60女人毛片免费| 日日撸夜夜添| 日本欧美国产在线视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| av在线蜜桃| 黑人高潮一二区| 亚洲综合精品二区| 免费人成在线观看视频色| 国产精品一区二区在线观看99 | 亚洲四区av| 简卡轻食公司| 美女cb高潮喷水在线观看| 插阴视频在线观看视频| 成人av在线播放网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 性色avwww在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产乱来视频区| 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品蜜桃在线观看| 国产久久久一区二区三区| 最近最新中文字幕大全电影3| 联通29元200g的流量卡| 99热精品在线国产| 国产午夜精品论理片| 亚洲最大成人中文| 国内精品美女久久久久久| av播播在线观看一区| 国产高清国产精品国产三级 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 天美传媒精品一区二区| 久久久久久久久久久丰满| 白带黄色成豆腐渣| 久久久久久伊人网av| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲国产精品国产精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 欧美性感艳星| 久久久久久久国产电影| 熟女电影av网| 男女国产视频网站| 久久精品国产亚洲网站| 国产精品国产三级国产专区5o | 久久久精品欧美日韩精品| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲精品乱久久久久久| 一夜夜www| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 夜夜爽夜夜爽视频| 黄色配什么色好看| 我的老师免费观看完整版| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲在久久综合| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩一本色道免费dvd| 午夜a级毛片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产不卡一卡二| 国产男人的电影天堂91| 色综合站精品国产| 91久久精品国产一区二区成人| 久久韩国三级中文字幕| 国内精品宾馆在线| 一级黄片播放器| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 国产三级在线视频| 男女边吃奶边做爰视频| 一区二区三区乱码不卡18| 国产在线一区二区三区精 | 男的添女的下面高潮视频| 黄片wwwwww| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 永久网站在线| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 亚洲欧美精品自产自拍| 美女大奶头视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 高清在线视频一区二区三区 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美日韩综合久久久久久| 身体一侧抽搐| 我要搜黄色片| 丝袜喷水一区| 国产极品天堂在线| 性插视频无遮挡在线免费观看| 高清在线视频一区二区三区 | 国产视频首页在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成年版毛片免费区| 日韩制服骚丝袜av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 免费观看人在逋| 人妻系列 视频| 国产在视频线在精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国语自产精品视频在线第100页| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久久久久久久大av| 久久久精品欧美日韩精品| av在线播放精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| .国产精品久久| 久久久久久九九精品二区国产| 男人舔奶头视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 一级毛片电影观看 | 超碰av人人做人人爽久久| 六月丁香七月| 久久久国产成人精品二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产一区二区三区av在线| 国产亚洲91精品色在线| 男女视频在线观看网站免费| 三级毛片av免费| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品一区二区在线观看99 | 久久久精品大字幕| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产av码专区亚洲av| av免费观看日本| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久99热这里只频精品6学生 | 可以在线观看毛片的网站| 国产精品一区二区在线观看99 | 插逼视频在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 免费大片18禁| 久久人妻av系列| 久久久午夜欧美精品| 日日干狠狠操夜夜爽| 真实男女啪啪啪动态图| 国产乱人视频| 国产精品久久视频播放| 欧美97在线视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 18禁在线播放成人免费| 亚洲人成网站高清观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 男插女下体视频免费在线播放| 国产午夜精品一二区理论片| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产一区二区三区av在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产成人一区二区在线| 国产成人福利小说| 国产大屁股一区二区在线视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 免费观看性生交大片5| 真实男女啪啪啪动态图| 黄片wwwwww| 亚洲国产色片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 天美传媒精品一区二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 国产精品国产三级国产专区5o | 热99re8久久精品国产| 色综合色国产| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲在线观看片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲欧美日韩东京热| 国产成年人精品一区二区| 又爽又黄无遮挡网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 18禁在线播放成人免费| 久久人妻av系列| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲欧美清纯卡通| 麻豆成人av视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产高清有码在线观看视频| 欧美潮喷喷水| 亚洲怡红院男人天堂| 少妇熟女欧美另类| 身体一侧抽搐| 丝袜美腿在线中文| 91狼人影院| 五月玫瑰六月丁香| 国产在线一区二区三区精 | 久久久国产成人免费| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲精品国产成人久久av| av黄色大香蕉| 欧美日韩在线观看h| 日本一二三区视频观看| 免费无遮挡裸体视频| 男女国产视频网站| 成人综合一区亚洲| 最新中文字幕久久久久| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩一本色道免费dvd| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 九色成人免费人妻av| 成人亚洲精品av一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 丰满少妇做爰视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 精品免费久久久久久久清纯| 联通29元200g的流量卡| 久久久久久久久久黄片| 亚洲国产精品国产精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品一区二区三区人妻视频| 午夜免费激情av| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | www.av在线官网国产| 长腿黑丝高跟| 男女那种视频在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品一区二区性色av| 国产免费视频播放在线视频 | 亚洲av中文av极速乱| 成人无遮挡网站| 久久久欧美国产精品| 99久久中文字幕三级久久日本| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久99蜜桃精品久久| 1024手机看黄色片| 天堂中文最新版在线下载 | 男女下面进入的视频免费午夜| 一级黄片播放器| 国产一级毛片七仙女欲春2| 丝袜美腿在线中文| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 天美传媒精品一区二区| 国产成人一区二区在线| 嫩草影院精品99| 黄色欧美视频在线观看| 日韩三级伦理在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| av国产免费在线观看| 一级黄片播放器| 1000部很黄的大片| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 免费看美女性在线毛片视频| 中文资源天堂在线| 嫩草影院精品99| 国产精品电影一区二区三区| 久久精品影院6| 国产在线一区二区三区精 | 少妇人妻精品综合一区二区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| www.av在线官网国产| 99九九线精品视频在线观看视频| 在线播放无遮挡| 亚洲av成人av| 亚洲av成人精品一区久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 色视频www国产| 日韩一本色道免费dvd| 国内精品宾馆在线| 插逼视频在线观看| 一本久久精品| 日韩国内少妇激情av| 99热网站在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产成人a区在线观看| 亚洲色图av天堂| 男女边吃奶边做爰视频| 99久国产av精品| 亚洲无线观看免费| 少妇被粗大猛烈的视频| 精品欧美国产一区二区三| 欧美潮喷喷水| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美又色又爽又黄视频| 毛片一级片免费看久久久久| 国产成人精品一,二区| 波多野结衣高清无吗| 欧美zozozo另类| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲国产精品成人综合色| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 亚洲在久久综合| 国产精品,欧美在线| 麻豆乱淫一区二区| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品久久久久久电影网 | 男人舔奶头视频| 成人av在线播放网站| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 嫩草影院精品99| 联通29元200g的流量卡| 美女黄网站色视频| 亚洲图色成人| 久久久久久久久大av| 亚洲国产精品国产精品| 日韩大片免费观看网站 | 村上凉子中文字幕在线| 亚洲一区高清亚洲精品| av国产免费在线观看| 国产精品伦人一区二区| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 又爽又黄a免费视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 中文字幕制服av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲色图av天堂| 色播亚洲综合网| 尾随美女入室| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜久久久久精精品| 高清日韩中文字幕在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 日韩大片免费观看网站 | 成人国产麻豆网| 99热这里只有精品一区| 精品一区二区免费观看| 亚洲av成人精品一区久久| 黑人高潮一二区| 国产成人a区在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 午夜精品在线福利| 亚洲欧美日韩东京热| 欧美性猛交黑人性爽| 99热这里只有是精品50| 精华霜和精华液先用哪个| 国产淫片久久久久久久久| 少妇高潮的动态图| 一级毛片电影观看 | 亚洲真实伦在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 亚洲国产精品成人久久小说| 黄色配什么色好看| 久久精品综合一区二区三区| 久久久a久久爽久久v久久| 久久精品国产自在天天线| 99久国产av精品国产电影| 美女被艹到高潮喷水动态| 成人三级黄色视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产午夜精品一二区理论片| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久国产成人精品二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 精品久久久久久久末码| 91精品一卡2卡3卡4卡| 97超视频在线观看视频| 国产精品蜜桃在线观看| 午夜福利高清视频| 一级毛片我不卡| 麻豆成人av视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久99久视频精品免费| 波野结衣二区三区在线| 18禁在线播放成人免费| 美女被艹到高潮喷水动态| av免费在线看不卡| 日本黄色片子视频| 男的添女的下面高潮视频| 午夜免费激情av| 女人久久www免费人成看片 | 久久热精品热| 超碰97精品在线观看| av国产免费在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日韩欧美三级三区| 中文字幕av在线有码专区| 免费看美女性在线毛片视频| 免费在线观看成人毛片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久综合国产亚洲精品| www.av在线官网国产| av国产久精品久网站免费入址| 中文亚洲av片在线观看爽| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久久久久久久久久免费av| 2021少妇久久久久久久久久久| 午夜福利网站1000一区二区三区| 青春草国产在线视频| 看非洲黑人一级黄片| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产一区二区在线av高清观看| 18+在线观看网站| 精品免费久久久久久久清纯| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 女人被狂操c到高潮| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 波野结衣二区三区在线| 欧美色视频一区免费| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲精品456在线播放app| 精品久久久久久电影网 | 视频中文字幕在线观看| 小说图片视频综合网站| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 插阴视频在线观看视频| 中文字幕av成人在线电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 搡女人真爽免费视频火全软件| 一级爰片在线观看| 亚洲最大成人av| 国内精品一区二区在线观看| 毛片女人毛片| 男人舔奶头视频| 老司机福利观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 看片在线看免费视频| 国产精品女同一区二区软件| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲人与动物交配视频| 少妇丰满av| 国产 一区 欧美 日韩| 色哟哟·www| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久久久九九精品影院| 波多野结衣高清无吗| 欧美另类亚洲清纯唯美| 天堂√8在线中文| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美精品国产亚洲| 免费人成在线观看视频色| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99久久精品热视频| 九九爱精品视频在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲国产最新在线播放| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲最大成人av| 国产欧美日韩精品一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 99热6这里只有精品| 99视频精品全部免费 在线| 天美传媒精品一区二区| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久99热这里只有精品18| 免费在线观看成人毛片| 男的添女的下面高潮视频| 最近手机中文字幕大全| 国产成人一区二区在线| 国产成人91sexporn| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲国产最新在线播放| 中文资源天堂在线| 久久精品综合一区二区三区| 高清在线视频一区二区三区 | 91精品伊人久久大香线蕉| 一个人看视频在线观看www免费| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久久久免费精品人妻一区二区| 丝袜美腿在线中文| 久久久久久九九精品二区国产| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲av福利一区| 内射极品少妇av片p| 毛片女人毛片| 日韩欧美精品v在线| 日韩欧美国产在线观看| 欧美性感艳星| 亚洲电影在线观看av| 麻豆乱淫一区二区| av免费在线看不卡| 91狼人影院| 午夜福利视频1000在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 久久综合国产亚洲精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 干丝袜人妻中文字幕| 亚州av有码| 国产探花极品一区二区| 久久久久网色| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美潮喷喷水| 一个人观看的视频www高清免费观看| av在线蜜桃| 成人亚洲精品av一区二区| 麻豆国产97在线/欧美| 看十八女毛片水多多多| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 色综合亚洲欧美另类图片| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产在视频线精品| 深夜a级毛片| 亚洲人成网站高清观看| 成人毛片60女人毛片免费| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 天堂√8在线中文| 女人久久www免费人成看片 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精品久久久噜噜| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲不卡免费看| 亚洲最大成人av| 日本免费在线观看一区| 91精品国产九色| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久久久国产网址| 国产真实乱freesex| 在线观看一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免| 午夜免费激情av| 免费观看a级毛片全部| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美zozozo另类| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产在线一区二区三区精 | 成人一区二区视频在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产在线一区二区三区精 | 国产精品野战在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 99热这里只有是精品50| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久鲁丝午夜福利片| 能在线免费看毛片的网站| 男的添女的下面高潮视频| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费观看在线日韩| 听说在线观看完整版免费高清| 波多野结衣巨乳人妻| 有码 亚洲区| 欧美97在线视频| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 又爽又黄无遮挡网站| 免费看a级黄色片| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产单亲对白刺激| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜激情福利司机影院| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 在线免费十八禁| 亚洲av日韩在线播放| 美女内射精品一级片tv| 黄色配什么色好看| 久久6这里有精品| 不卡视频在线观看欧美|