• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    呋咱氮氧化薯蕷皂苷元拼合物的合成及其抗腫瘤活性研究

    2017-12-06 02:14:57肖敏捷劉永謙梁家榮雷橋良招仲恒
    化學工程師 2017年11期
    關鍵詞:呋咱皂苷元薯蕷

    肖敏捷,劉永謙,梁家榮,邱 翔,雷橋良,招仲恒,王 濤*

    (1.佛山市婦幼保健院a.藥劑科;b.產(chǎn)二科,廣東 佛山 528000;2.廣東省婦幼保健院 藥學部,廣東 廣州510010;3.廣州中醫(yī)藥大學 中藥學院,廣東 廣州 510006)

    呋咱氮氧化薯蕷皂苷元拼合物的合成及其抗腫瘤活性研究

    肖敏捷1a,劉永謙2,梁家榮3,邱 翔3,雷橋良1b,招仲恒3,王 濤3*

    (1.佛山市婦幼保健院a.藥劑科;b.產(chǎn)二科,廣東 佛山 528000;2.廣東省婦幼保健院 藥學部,廣東 廣州510010;3.廣州中醫(yī)藥大學 中藥學院,廣東 廣州 510006)

    目的:合成強生物活性的薯蕷皂苷元衍生物并探討其體外抗腫瘤活性。方法:實驗通過環(huán)加成、縮合、氧化等反應,設計薯蕷皂苷元與呋咱氮氧化物類一氧化氮供體拼合得到目標化合物。并采用噻唑藍(MTT)法考察目標化合物對HT-29、HepG-2、MCF-7等3種腫瘤細胞株的體外細胞毒性。結(jié)果:實驗合成了6個新的呋咱氮氧化薯蕷皂苷元拼合物,其結(jié)構(gòu)均經(jīng)IR、1H NMR和、13C NMR等確證。同時MTT實驗結(jié)果表明,所合成目標化合物對HT-29、Hepg-2、MCF-7 3種腫瘤細胞均無明顯細胞毒性。結(jié)論:實驗設計的呋咱氮氧化薯蕷皂苷元拼合物合成路徑可行,但化合物的無明顯抗腫瘤活性,推測化合物NO釋放呈低濃度釋放,而低濃度NO釋放表現(xiàn)為抑制細胞凋亡。

    薯蕷皂苷元拼合物;合成;NO供體;抗腫瘤活性

    薯蕷皂苷元(Diosgenin,Dio)作為一種天然甾體化合物,早期主要用于合成甾體激素類藥物。但隨著研究的深入,其抗腫瘤作用也日益受到廣大學者的關注。有研究表明,Dio參與癌細胞發(fā)展的多個生物學過程從而發(fā)揮抗腫瘤作用[1],且作用效果呈明顯的劑量依賴性,并可通過抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表達和增加促凋亡蛋白半胱天冬酶-3(caspase-3)來誘導細胞凋亡[2,3]。也可促進巨噬細胞內(nèi)NO的分泌,改善特異性和非特異性細胞免疫反應、抑制survivin基因表達、抑制人胃低分化粘液腺癌MGC-803細胞的DNA合成以及人骨肉瘤U-2OS細胞MMP-9/TIMP-1 RNA的表達從而改善免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗腫瘤作用[4-6]。

    NO是具有高度反應性的小分子自由基,在細胞調(diào)控和超氧化介導細胞毒性中發(fā)揮重要作用。且高濃度的NO是化合物對腫瘤細胞產(chǎn)生細胞毒性的必備條件。Melissa等人發(fā)現(xiàn),NO可通過影響細胞線粒體膜的通透性以及調(diào)控細胞色素C氧化酶產(chǎn)生毒性作用[7]。

    而在已知的多種NO供體中,呋咱氮氧化物由于具有釋放NO更持久、更好的穩(wěn)定性、且不產(chǎn)生耐受的優(yōu)越性,在抗腫瘤新藥的研發(fā)中越來越受到重視[8]。目前,普遍認為其在巰基共同作用下釋放出NO從而發(fā)揮生物活性,而硝酸酯NO釋放則需要在酶激活下才能產(chǎn)生[9]。因此,實驗設計將薯蕷皂苷元與呋咱氮氧化合物進行拼接,期望合成出具有高活性的新型抗腫瘤化合物。

    1 合成路線

    方法[10],采用不同取代基的烯醛為原料環(huán)合,并經(jīng)瓊斯試劑氧化得到呋咱氮氧化合物NO供體片段。將Dio母核上的3位羥基酯化,引入鹵代酯片段,最后將Dio鹵代酯與呋咱氮氧化合物進行拼合得到目標化合物。見圖1。

    圖1 呋咱氮氧化薯蕷皂苷元拼合物的合成路線Fig.1 Synthesis route of diosgenin complex

    1 方法與結(jié)果

    1.1 儀器與試劑

    超導脈沖傅里葉變換核磁共振譜儀,Bruker AVANCE AV 400(美國Bruker公司);X-4數(shù)字顯示顯微熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司);DF-1型集熱式磁力攪拌器(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司);RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);L535R臺式冷凍離心機(湖南湘儀離心機儀器有限公司);SW-CJ-2FD超凈工作臺(江蘇蘇凈安泰公司);MCO-20AIC型培養(yǎng)箱(日本SANYO公司);光學倒置顯微鏡(重慶市奧利巴斯公司);Multiskan FC酶標儀(美國Themo公司)。

    薯蕷皂苷元(純度98%,南通飛宇生物科技有限公司);反式-2-戊烯醛、反式-2-己烯醛(純度99%,賽默飛世爾科技有限公司);MTT(噻唑藍,sigma M2128,sigma公司);順鉑(注射用,齊魯制藥有限公司);其余試劑、溶劑均為分析純。

    人-肝癌細胞HepG-2、人 -結(jié)腸癌細胞HT-29、人-乳腺癌細胞MCF-7(中科院上海細胞庫)。

    2.2 制備方法

    2.2.12 -[(3-乙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲酰氧基]乙酸薯蕷皂苷元酯的合成

    2.2.1.1 3-乙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-甲醛(b1)的合成 在氮氣保護下,50mL二頸瓶中加入1mL(10.2mmol) 反式 -2- 戊烯醛、2mL(35.5mmol)HAC,且在冰浴下攪拌5min后緩慢滴加2g(29.5mmol)NaNO2的飽和水溶液,0.5h內(nèi)滴完。滴加過程中保持冰浴,持續(xù)充氮氣反應3h。反應結(jié)束后,加入15mL飽和食鹽水,用乙醚(20mL×3)萃取,合并有機層。減壓濃縮后得淡黃液體1.28g,產(chǎn)率88.37%。

    2.2.1.2 3-乙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-甲酸(c1)的合成 將 1g(7.0mmol)化合物(A)用 20mL丙酮溶解于50mL二頸瓶中,冰浴攪拌下滴加新配制的Jones試劑(0.7g的CrO3溶于0.6mL濃H2SO4中,加H2O1.9mL稀釋即得)。滴加完畢后,升至室溫反應,TCL監(jiān)控反應,反應4h。反應結(jié)束后,加入15mL甲醇淬滅反應,繼續(xù)攪拌5min。減壓蒸干溶劑后,殘留物中加入20mL飽和食鹽水,用乙醚(20mL×3)萃取,合并有機層。有機層用20mL水洗滌后,無水MgSO4干燥過夜。過濾有機層,減壓蒸干溶劑,得黃色液體0.95g,產(chǎn)率:85.89%。

    2.2.1.3 3-O-溴乙酰-薯蕷皂苷元酯(e1)的合成稱取2g(4.8mmol)薯蕷皂苷元置于250mL三頸瓶

    中,加入50mL二氯甲烷使其溶解,加入0.04g(0.3mmol)DMAP作催化劑,冰浴攪拌下滴加1mL(11.5mmol)溴乙酰溴。滴加完后,繼續(xù)冰浴攪拌30min,升至室溫下反應,TLC監(jiān)控反應,反應3h。反應結(jié)束后,加入飽和NaHCO3水溶液調(diào)pH至中性,二氯甲烷(20mL×3)萃取,合并有機層,有機層用20mL洗滌后,加入無水MgSO4干燥過夜。過濾有機層,減壓蒸干溶劑,200-300目硅膠柱色譜分離,石油醚-乙酸乙酯(50∶1,V/V)洗脫得到白色固體 0.95 g,收率35.91%,m.p.196~198℃。

    2.2.1.42 -[(3-乙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲酰氧基]乙酸薯蕷皂苷元酯(f1)的合成 稱取0.9g(1.5mmol)化合物(C)和 1g(6mmol)化合物(B)置于50mL二頸瓶中,用20mL DMF溶解,加入0.1g(0.72mmol)無水碳酸鉀為催化劑,100℃回流攪拌反應3h,TLC監(jiān)控反應(石油醚:乙酸乙酯=50∶1,V/V)。反應結(jié)束后,待反應液冷卻至室溫,反應液中加入30mL蒸餾水,乙醚(20mL×4)萃取,合并有機層。有機層用20mL蒸餾水洗滌后,無水硫酸鎂干燥過夜。過濾有機層,減壓蒸干溶劑,200-300目硅膠柱色譜分離,石油醚-乙酸乙酯(50∶1,V/V)洗脫。得到白色固體0.41g,收率43.52%,m.p.155-156℃。

    2.2.22 -[(3-乙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲酰氧基]-丙酸薯蕷皂苷元酯(f2)、2-[(3-乙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲酰氧基]-異丁酸薯蕷皂苷元酯(f3)、2-[(3-丙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲酰氧基]-乙酸薯蕷皂苷元酯(f4)、2-[(3-丙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲酰氧基]-丙酸薯蕷皂苷元酯(f5)、2-[(3-丙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-)甲酰氧基]丙酸薯蕷皂苷元酯(f6)均參照化合物f1的制備方法進行合成,其氫譜及碳譜解析見表1、2。

    表1 薯蕷皂苷員呋咱氮氧拼合物氫譜數(shù)據(jù)Tab.1 1H NMR data of of diosgenin complex

    表2 目標化合物13C NMR數(shù)據(jù)Tab.2 13C NMR data of of diosgenin complex

    2.3 MTT法測定目標化合物的體外抗腫瘤活性

    分別取生長期的人肝癌細胞HepG-2、人結(jié)腸癌細胞HT-29、人乳腺癌細胞MCF-7于96孔細胞板培養(yǎng)12h后進行試驗。實驗分別設立藥物組、溶劑組、空白組以及陽性對照組(順鉑),其中藥物組中每藥設立 7個不同濃度組,分別為 60、30、15、7.5、3.75、1.875、0.9375μmol·L-1。藥物作用 48h 后,在培養(yǎng)板中加入0.5%MTT溶液,每孔10μL,繼續(xù)置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h。除去上層液,并加入150μL二甲基亞砜溶解藍紫色結(jié)晶。常溫下置微型振蕩器振搖10min,酶標儀檢測器在570nm波長處測定各孔吸光值,即OD值。由以下公式計算出目標化合物對三種癌細胞的增殖抑制率。細胞增殖抑制率(%)=[1-(給藥組平均OD值-空白組平均OD值)/(溶劑組平均OD值-空白組平均OD值)]×100%,并根據(jù)各濃度組的抑制率,求出各組作用48h后的IC50值。實驗結(jié)果表示,采用GraphPad Prisim 4.0軟件處理結(jié)果。并采用單因素方差檢驗進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果見表3:可見,實驗組與陰性組比較,并無明顯統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    表3 各組化合物作用于人HepG-2、MCF-7、HT-29細胞的IC50值Tab.3 Each group of compounds acted on the IC50values of human HepG-2,MCF-7 and HT-29 cells

    體外抗腫瘤活性篩選結(jié)果表明,目標產(chǎn)物對人肝癌細胞HepG-2、人結(jié)腸癌細胞HT-29、人乳腺癌細胞MCF-7 3種細胞的增殖抑制不明顯,推測目標產(chǎn)物具有持續(xù)釋放低濃度NO特性,而持續(xù)低濃度的NO可抑制細胞凋亡,對細胞具有保護和促進生長的作用;該化合物體外NO釋放規(guī)律值得進一步研究。

    2.4 討論

    烯醛環(huán)合的反應中,采用乙酸作溶劑,反應進行比較徹底,副產(chǎn)物較少,但使用的兩種烯醛原料在空氣中易氧化,因此,操作需在氮氣保護下進行。3-乙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-甲醛及3-丙基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物-4-甲醛結(jié)構(gòu)中有雙鍵及醛基,可采用多種催化劑,如活性MnO2、醋酸銅-醋酸錳等[11],而本實驗中則嘗試著使用了瓊斯試劑,結(jié)果顯示,該方法可行的,且具有反應時間短、產(chǎn)率較高的特點。在將呋咱氮氧化物與薯蕷皂苷元母體相連的反應中,2-溴丙酰溴和2-溴異丁酰溴由于支鏈較多,產(chǎn)生較大的空間阻礙,導致目標產(chǎn)物的產(chǎn)率較低。

    而從MTT實驗結(jié)果可知,目標產(chǎn)物對3種人源腫瘤細胞體外抑制活性不強,所有濃度組的抑制率均低于順鉑組,推測化合物NO釋放呈低濃度釋放,而低濃度NO釋放表現(xiàn)為抑制細胞凋亡。

    3 結(jié)論

    本實驗設計的合成路徑簡單可行,成功合成了6個新的呋咱氮氧化薯蕷皂苷元拼合物,可為NO供體薯蕷皂苷元的設計提供新思路。而體外抗腫瘤活性篩選亦表明,化合物NO釋放量或呈低濃度釋放,可為薯蕷皂苷元類抗腫瘤新藥的深入研究奠定基礎。

    參考文獻

    [1] 許麗娜,魏永麗,彭金詠.天然產(chǎn)物薯蕷皂苷的研究進展[J].中國中藥雜志,2015,40(1):36-41.

    [2] Raju J,Patlolla J.M.R.,Swamy M.V,et al.Diosgenin,a steroid saponin of trigonella foenum graecum(fenugreek),inhibits azoxymethaneinduced aberrant crypt foci formation in F344 rats and induces apoptosis in HT-29 human colon cancer cells[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2004,13(8):1392-1398.

    [3] He Z,Tian Y,Zhang X,et al.Antitumour and immunomodulating activities of diosgenin,a naturally occurring steroidal saponin[J].Nat Prod Res,2012,26(23):2243-2246.

    [4] 蘇贊妍,霍木蘭.薯蕷皂甙元誘導人卵巢癌細胞系HO-8910凋亡及對 Survivin基因表達的影響[J].中國醫(yī)師雜志,2006,8(9):1161-1163.

    [5] 洪振強,林建華.薯蕷皂苷元對U-2OS細胞MMP-9/TIMP-1mRNA的影響[J].福建中醫(yī)學院學報,2006,16(3):21-24.

    [6] 宋寧,何忠梅,李晶華,等.薯蕷皂苷元對人胃低分化粘液腺癌細胞作用的研究[J].北京中醫(yī)藥大學學報,2005,28(4):42-44.

    [7] Melissa M.Reynolds,Scott D.Witzeling,Vinod B.Damodaran,et al.Applications for nitric oxide in halting proliferation of tumor cells.Biochemical and Biophysical Research Communictions.2013,431:647-651.

    [8] 李澤民,李文赟,凌靜,等.氧化呋咱類一氧化氮供體藥物研究進展[J].中國抗生素雜志,2016,41(11):801-809.

    [9] Yasinalli Tamboli,Loretta Lazzarato,Elisabetta Marini,et al.Synthesis and preliminary biological profile of new NO-donor tolbutamide analogues[J].Bioorganicamp;Medicinal Chemistry Letters,2012,22:3810-3815.

    [10] Roberata Fruttero,Bruno Ferrarotti,Anna Serafino,et al.Unsymmetrically substituted furoxans.Part 11[J].Methylfuroxancar baldehydes,Cheminform,1990,21(11):1345-1347.

    [11] 蔣振武,唐萬果.巴豆醛氧化制備巴豆酸[J].廣西輕工業(yè),2005,(6):28-31.

    Study on the synthesis and antitumor activity of diosgenin complex

    XIAO Min-jie1a,LIU Yong-qian2,LIANG Jia-rong3,QIU Xiang3,LEI Qiao-liang1b,ZHAO Zhong-heng3,WANG Tao3,*
    (1.a.Faculty of pharmaceutical sciences ;b.The Second of Obstrics Departmen,F(xiàn)oshan Women and Children Hospital,F(xiàn)oshan 528000,China;2.Faculty of pharmaceutical sciences of Guangdong Provincial Maternal and Child Health Hospital,Guangzhou 510010,China;3.School of Chinese Materia Medica,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China)

    To synthesize a novel diosgenin derivative of nitric oxide and to investigate its antitumor activity in vitro.Methods:Diosgenin was designed to combine with nitric oxide donor of nitric oxide through the cycloaddition,condensation and oxidation reactions,to obtain the target compound.The cytotoxicity on cells of HT-29,HepG-2 and MCF-7,was evaluated by MTT.Results:The 6 new combinations of diosgenin were synthesized,and their structures were confirmed by IR,1H NMR and13C NMR.At the same time,MTT experiments showed that the target compounds were not obviously cytotoxic to HT-29,HepG2,MCF-7 cells.Conclusion:The synthetic route of the experiment is feasible,but there is no obvious anti-tumor activity of the new compound.It is speculated that the release of NO is low concentration,while the low concentration of NO release inhibits apoptosis.

    diosgenin combination;Synthesis;NO donor;antitumor activity

    R914

    A

    10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20171171

    2017-09-15

    肖敏捷(1990-),女,藥師,2016年畢業(yè)于廣州中醫(yī)藥大學藥物化學專業(yè),碩士研究生,佛山市婦幼保健院藥劑科,研究方向:天然化合物的結(jié)構(gòu)修飾及活性研究;醫(yī)院藥事管理。

    王 濤(1970-),女,教授,廣州中醫(yī)藥大學中藥學院,研究方向:天然化合物的結(jié)構(gòu)修飾及活性研究。

    猜你喜歡
    呋咱皂苷元薯蕷
    呋咱環(huán)構(gòu)建策略及其含能化合物合成研究進展
    對經(jīng)方薯蕷丸的認識及臨床思考
    3,4-二(氟二硝甲基)氧化呋咱: 一種高密度氧化劑
    火工品(2019年3期)2019-09-02 05:48:22
    薯蕷皂苷及兩種衍生固定相的制備、表征及性能評價
    3, 3′-二(四唑-5-基) -4, 4′-偶氮氧化呋咱的合成及性能預估
    火炸藥學報(2018年1期)2018-04-19 02:42:45
    黃姜中薯蕷皂苷元提取工藝的優(yōu)化
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:31
    薯蕷皂苷元納米混懸液的制備
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:28
    HPLC測定不同產(chǎn)地粉萆薢中原薯蕷皂苷和薯蕷皂苷含量
    遠志皂苷元對老年大鼠術后認知障礙的影響
    UPLC-PDA法測定白花延齡草根莖及果實提取物中薯蕷皂苷元含量
    久久99热6这里只有精品| 香蕉精品网在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 大香蕉久久网| 精品少妇久久久久久888优播| av视频免费观看在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 特大巨黑吊av在线直播| 日韩三级伦理在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产成人一区二区在线| 97超碰精品成人国产| 黄色欧美视频在线观看| 精品久久久精品久久久| 99热网站在线观看| 在线免费十八禁| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 午夜激情福利司机影院| 亚洲成人手机| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲人与动物交配视频| 欧美丝袜亚洲另类| 香蕉精品网在线| 在线观看人妻少妇| a级一级毛片免费在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 伊人久久国产一区二区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 最新中文字幕久久久久| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品三级大全| 草草在线视频免费看| 男人舔奶头视频| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美三级亚洲精品| 国产精品99久久久久久久久| av在线app专区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 大香蕉久久网| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产成人一区二区在线| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品,欧美精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲久久久国产精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 在线 av 中文字幕| 国产精品一二三区在线看| 内地一区二区视频在线| 免费人成在线观看视频色| 亚洲在久久综合| 国产有黄有色有爽视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 少妇的逼好多水| 国产黄片视频在线免费观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 一级片'在线观看视频| 黑人高潮一二区| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲图色成人| 精品酒店卫生间| 欧美日韩在线观看h| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品一区www在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美日韩综合久久久久久| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 免费观看无遮挡的男女| 国产高清有码在线观看视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品视频人人做人人爽| 国产免费福利视频在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久久99精品国语久久久| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产淫片久久久久久久久| 美女中出高潮动态图| 精品久久久精品久久久| 精品一区二区三区视频在线| 国产免费视频播放在线视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 一区二区av电影网| 午夜免费男女啪啪视频观看| 免费黄色在线免费观看| 高清日韩中文字幕在线| 在线播放无遮挡| 三级国产精品片| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 免费人成在线观看视频色| 亚洲人成网站在线播| 日本黄色片子视频| 秋霞在线观看毛片| 青春草国产在线视频| 亚洲人与动物交配视频| 中国美白少妇内射xxxbb| av又黄又爽大尺度在线免费看| 97在线视频观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲国产色片| 51国产日韩欧美| 精品人妻熟女av久视频| 国产人妻一区二区三区在| av一本久久久久| 美女主播在线视频| 在线天堂最新版资源| 久久这里有精品视频免费| 不卡视频在线观看欧美| 91久久精品电影网| 日韩制服骚丝袜av| 日韩成人av中文字幕在线观看| 女性被躁到高潮视频| 免费黄网站久久成人精品| 熟女av电影| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美日韩综合久久久久久| av视频免费观看在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 人妻系列 视频| 在线观看国产h片| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 男的添女的下面高潮视频| av免费观看日本| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产男女内射视频| 精品午夜福利在线看| 身体一侧抽搐| 亚洲久久久国产精品| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 老司机影院成人| 涩涩av久久男人的天堂| 性高湖久久久久久久久免费观看| 午夜福利在线在线| 永久网站在线| 中文字幕av成人在线电影| 成人毛片60女人毛片免费| 精品一品国产午夜福利视频| 国产淫片久久久久久久久| 久久 成人 亚洲| 亚洲国产av新网站| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日韩国内少妇激情av| 精品久久久噜噜| 亚洲三级黄色毛片| 免费人成在线观看视频色| 日韩国内少妇激情av| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日本wwww免费看| 久久久久人妻精品一区果冻| 欧美成人a在线观看| 丝袜脚勾引网站| 亚洲成人一二三区av| 特大巨黑吊av在线直播| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| av国产久精品久网站免费入址| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲精品乱久久久久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲欧洲日产国产| 老司机影院成人| 少妇精品久久久久久久| .国产精品久久| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲精品视频女| 永久网站在线| 亚洲久久久国产精品| 久久av网站| 国产午夜精品一二区理论片| 麻豆乱淫一区二区| 在线免费十八禁| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久99热这里只频精品6学生| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 丝袜喷水一区| 尾随美女入室| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲天堂av无毛| 精品久久久久久久久亚洲| 日本色播在线视频| 久久热精品热| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品国产av在线观看| 一级爰片在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 99久久精品一区二区三区| 中文天堂在线官网| 最近中文字幕2019免费版| 国产欧美亚洲国产| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美另类一区| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 97在线人人人人妻| 中文字幕制服av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 午夜老司机福利剧场| 黄色怎么调成土黄色| 日韩中文字幕视频在线看片 | 久久婷婷青草| 波野结衣二区三区在线| 久久热精品热| 99热网站在线观看| 国产综合精华液| 久久久久网色| 日本黄色片子视频| 伊人久久国产一区二区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产亚洲91精品色在线| 又大又黄又爽视频免费| 免费大片18禁| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 精品一区二区三卡| 五月开心婷婷网| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品精品国产色婷婷| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 丰满少妇做爰视频| 久久青草综合色| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲精品456在线播放app| 美女高潮的动态| 成人二区视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 黑丝袜美女国产一区| 一级毛片电影观看| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美另类一区| 久久青草综合色| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 亚洲天堂av无毛| 色哟哟·www| 六月丁香七月| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | kizo精华| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 成人国产麻豆网| 搡老乐熟女国产| 婷婷色综合www| 国产久久久一区二区三区| 国产在线视频一区二区| 街头女战士在线观看网站| 欧美性感艳星| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产精品成人在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 成年免费大片在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 国产免费一级a男人的天堂| 国产男女内射视频| 免费黄网站久久成人精品| 22中文网久久字幕| 亚洲va在线va天堂va国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一级a做视频免费观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久热精品热| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲最大成人中文| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品亚洲成国产av| 成人黄色视频免费在线看| 久久久久精品性色| 免费av不卡在线播放| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 五月天丁香电影| 九草在线视频观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久午夜欧美精品| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲久久久国产精品| 国产精品三级大全| 在线观看人妻少妇| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 日韩一区二区三区影片| 天堂中文最新版在线下载| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 午夜激情久久久久久久| 国产久久久一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲国产色片| 日本免费在线观看一区| 欧美zozozo另类| 18+在线观看网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 99热这里只有精品一区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 麻豆成人午夜福利视频| av福利片在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 尾随美女入室| 一级a做视频免费观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 久久精品国产自在天天线| 少妇 在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 日本黄色日本黄色录像| 激情 狠狠 欧美| 成人一区二区视频在线观看| 日韩三级伦理在线观看| av在线app专区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产免费一级a男人的天堂| 一级毛片我不卡| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 丰满乱子伦码专区| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲国产欧美在线一区| 中文字幕免费在线视频6| 久久久午夜欧美精品| 丝袜脚勾引网站| 天堂中文最新版在线下载| 成人无遮挡网站| 九草在线视频观看| 久久久久久久精品精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产精品欧美亚洲77777| 丝袜喷水一区| 街头女战士在线观看网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 欧美成人一区二区免费高清观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜视频国产福利| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 精品国产乱码久久久久久小说| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品,欧美精品| 99热6这里只有精品| 99国产精品免费福利视频| 青春草亚洲视频在线观看| 老熟女久久久| 国产乱人视频| av女优亚洲男人天堂| av.在线天堂| 亚洲精品国产av成人精品| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲国产精品999| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| av视频免费观看在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 精品一区二区三卡| 一级片'在线观看视频| 精品久久久噜噜| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产日韩欧美亚洲二区| 一级毛片 在线播放| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 少妇人妻久久综合中文| av在线app专区| 亚洲综合色惰| 久久久久久久久久久丰满| 久久99热这里只有精品18| 国产在线一区二区三区精| 久久久久精品久久久久真实原创| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日本av免费视频播放| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美日韩在线观看h| 超碰97精品在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久精品久久久久久久性| 久久久午夜欧美精品| 国产乱来视频区| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美bdsm另类| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品国产三级普通话版| 国产精品久久久久久精品古装| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲国产色片| 亚洲精品视频女| 国产精品国产三级国产专区5o| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日本黄色片子视频| av免费观看日本| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日日啪夜夜爽| av免费在线看不卡| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 日韩欧美一区视频在线观看 | 秋霞在线观看毛片| av播播在线观看一区| 亚洲精品456在线播放app| 日韩中字成人| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲av福利一区| 欧美97在线视频| 一边亲一边摸免费视频| a级一级毛片免费在线观看| 久久ye,这里只有精品| 免费看不卡的av| 一级毛片久久久久久久久女| 一个人看视频在线观看www免费| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲av二区三区四区| 精品久久久久久久末码| 精品国产露脸久久av麻豆| 最近手机中文字幕大全| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久99蜜桃精品久久| 91精品国产九色| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 精品一区二区三卡| 亚洲精品国产色婷婷电影| 麻豆成人av视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 免费播放大片免费观看视频在线观看| 高清在线视频一区二区三区| 中文资源天堂在线| 一级毛片电影观看| 国产成人freesex在线| 亚洲成人手机| 免费观看av网站的网址| 下体分泌物呈黄色| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产91av在线免费观看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产午夜精品一二区理论片| 舔av片在线| 内射极品少妇av片p| 亚洲成人手机| 边亲边吃奶的免费视频| 热re99久久精品国产66热6| 婷婷色综合大香蕉| tube8黄色片| 亚洲内射少妇av| kizo精华| 欧美成人a在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 国产亚洲一区二区精品| 日韩制服骚丝袜av| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 一个人看视频在线观看www免费| 大片免费播放器 马上看| 制服丝袜香蕉在线| 国产黄色视频一区二区在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 国产成人精品一,二区| 伦理电影免费视频| 国产欧美亚洲国产| 一本一本综合久久| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲精品国产av蜜桃| 各种免费的搞黄视频| 国产午夜精品一二区理论片| 一二三四中文在线观看免费高清| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 99久久精品国产国产毛片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产免费又黄又爽又色| 综合色丁香网| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产 一区精品| 老熟女久久久| 欧美国产精品一级二级三级 | 中文欧美无线码| 97在线人人人人妻| 亚洲精品国产成人久久av| 欧美激情极品国产一区二区三区 | av在线观看视频网站免费| 国产爽快片一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲久久久国产精品| 一区二区三区乱码不卡18| 男女啪啪激烈高潮av片| 久热久热在线精品观看| 国产精品人妻久久久影院| 另类亚洲欧美激情| 亚洲成人手机| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 中文字幕制服av| 国产男人的电影天堂91| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产在视频线精品| 国产精品偷伦视频观看了| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲精品国产成人久久av| 伦理电影大哥的女人| 国产片特级美女逼逼视频| 国产精品成人在线| 久久久a久久爽久久v久久| 精品一区在线观看国产| 国产精品.久久久| 国产淫片久久久久久久久| 日本色播在线视频| 国产色婷婷99| 天堂8中文在线网| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲美女视频黄频| 另类亚洲欧美激情| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产爽快片一区二区三区| 麻豆国产97在线/欧美| 黄色一级大片看看| 精品人妻熟女av久视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99九九线精品视频在线观看视频| 熟女电影av网| 最近的中文字幕免费完整| 哪个播放器可以免费观看大片| 精品久久久噜噜| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲av日韩在线播放| 免费看av在线观看网站| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲性久久影院| 高清不卡的av网站| 久久热精品热| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产视频首页在线观看| h日本视频在线播放| 水蜜桃什么品种好| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品人妻久久久久久| 国模一区二区三区四区视频| 久久99精品国语久久久| 精品亚洲成a人片在线观看 | 最近中文字幕2019免费版| 青春草国产在线视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精品一二三| 国模一区二区三区四区视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲人成网站高清观看| 午夜免费鲁丝| 日韩欧美 国产精品| 中文字幕亚洲精品专区| 黑人猛操日本美女一级片| 久久国产精品大桥未久av | 熟女av电影| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品成人在线| 国产色婷婷99| 在线观看免费高清a一片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久久久久国产电影| 国产亚洲最大av| 夫妻性生交免费视频一级片| 韩国高清视频一区二区三区| 777米奇影视久久| 女人久久www免费人成看片| 精品人妻熟女av久视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲无线观看免费| 五月天丁香电影| 少妇被粗大猛烈的视频| av专区在线播放| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 一级爰片在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产乱人视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 成人综合一区亚洲| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产毛片在线视频| 老司机影院成人| 亚洲美女视频黄频| 国产成人一区二区在线| 精品一区二区三区视频在线| 日韩制服骚丝袜av| 欧美人与善性xxx| 乱系列少妇在线播放| 我的女老师完整版在线观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 黄色视频在线播放观看不卡|