甲慶栓微生物限度檢查的方法學(xué)驗證

章陽　黃杰

【中圖分類號】R951 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）11-0-02

1 前言

甲慶栓微生物限度檢查條件的不斷變化，對其方法學(xué)驗證提出了新的要求。因此有必要對其相關(guān)課題展開深入研究與探討，以期用以指導(dǎo)相關(guān)工作的開展與實(shí)踐，并取得理想效果。基于此，本文從概述相關(guān)內(nèi)容著手本課題的研究。

2 概述

某些藥品本身具有抗菌活性，能夠抑制成藥中微生物的生長，如果按常規(guī)法檢驗得到的結(jié)果不可信，必須采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄏ驕p弱藥物的抑菌活性，使微生物正常生長。要判斷檢驗方法的正確性和可行性，必須進(jìn)行方法驗證，確定藥品是否具有抑菌性以便確定檢驗方法。甲慶栓是中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院生產(chǎn)的院內(nèi)制劑，系由甲硝唑和慶大霉素組成的常用藥，用于預(yù)防和治療腹部切口感染，對肛周炎、附件炎及牙周炎有良好的治療作用。我們對甲慶栓的微生物限度檢查按文獻(xiàn)[1]的規(guī)定進(jìn)行了方法學(xué)的驗證，確立了準(zhǔn)確可行的微生物限度檢查方法。

3 儀器與試驗材料

3.1 恒溫水浴鍋、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、渦旋混合器、甲慶栓（20061207、20070120）

3.2 驗證菌株金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtillis）[CMCC（B）63501]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC （F）98001]、黑曲菌（Aspergillusniger）[CMCC（F）98003][2]。

3.3 陰性對照菌株：大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]。

4 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計效方法的驗證

菌種：驗證菌種所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5 代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，保證試驗菌株的生物學(xué)特性[3]。

4.1 供試液的制備取供試品5g（含聚山梨醇80），加45℃pH為7.0的無菌氯化鈉- 蛋白胨緩沖液至100ml，制成供試液。

4.2 菌液的制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24h；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48h。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml 含菌數(shù)為50～100 cfu 的菌懸液。接種黑曲菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 天，加入3～5 ml 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸孢子懸液至無菌試管中，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 ml 含孢子數(shù)為50～100 cfu 的孢子懸液。

4.3 驗證方法進(jìn)行3 次獨(dú)立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。試驗組1：2000 的供試液檢出試驗菌，故按此濃度制備供試品，按菌落計數(shù)方法測定供試品的本底菌數(shù)。稀釋劑對照組采用0.9% 無菌氯化鈉溶液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml 供試液含50～100 cfu，按試驗組以供試液制備方法示菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。

5 試驗結(jié)果

回收率計算：回收率應(yīng)不低于70%?；厥章?[（試驗組平均菌落數(shù)-供試品對照組平均菌落數(shù)）÷菌液組平均菌落數(shù)]×100%。

通過驗證數(shù)據(jù)，應(yīng)用本法對甲慶栓進(jìn)行細(xì)菌、霉菌和酵母菌的菌落計數(shù)，試驗組及稀釋劑對照組的菌數(shù)回收率均大于70%，符合制劑質(zhì)量控制要求。

6 討論

6.1 對甲慶栓的微生物限度檢查原采用供試品1：20作為最低稀釋級樣品，由于該樣品含有抑菌性藥物，通過方法驗證改為1：2000。

6.2 試驗中菌液經(jīng)稀釋至適宜濃度后，應(yīng)放入冰箱保存，每次使用前35～45℃水浴活化30min，確保細(xì)菌活性及菌數(shù)穩(wěn)定。

7 結(jié)束語

通過對甲慶栓微生物限度檢查方法學(xué)驗證的研究，我們可以發(fā)現(xiàn)，該項工作良好實(shí)踐效果的取得，有賴于對其多項影響因素與關(guān)鍵環(huán)節(jié)的充分掌控，有關(guān)人員應(yīng)該從其客觀實(shí)際情況出發(fā)，研究制定最為符合實(shí)際的應(yīng)對實(shí)施措施。

參考文獻(xiàn)

國家藥典委員會編.中國藥典〔S〕.2005（二部）.附錄ⅪA.

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馬緒榮，蘇德模.藥品微生物學(xué)檢驗手冊[M].北京：科學(xué)出版社， 2000： 58endprint