99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測在男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性診斷中的敏感性與特異性探討

趙金彩 劉明霞 袁有法 王慶勝 張金樹

99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測在男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性診斷中的敏感性與特異性探討

趙金彩1劉明霞1袁有法1王慶勝1張金樹2

目的探究99mTc-甲氧異丁基乙腈(99mTc-MIBI)親腫瘤顯像聯(lián)合去整合素金屬蛋白酶9(ADAM-9)、性激素檢測在男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性診斷中的敏感性與特異性。方法選擇2014年12-2016年12月在我院接受CT檢查發(fā)現(xiàn)肺部存在性質(zhì)待定結(jié)節(jié)的78例男性患者作為本次研究對象，其中46例肺惡性結(jié)節(jié)患者作為惡性組，32例肺良性結(jié)節(jié)患者作為良性組，另選擇男性健康者40例作為對照組，比較三組支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的ADAM-9 mRNA表達水平、BALF和血清中ADAM-9蛋白表達水平以及血清性激素水平，并分析9mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測用于男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性診斷的陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準確性、特異性及靈敏性。結(jié)果惡性組患者BALF中的ADAM-9 mRNA表達水平以及BALF和血清中ADAM-9 蛋白表達水平均顯著高于對照組，而良性組患者上述各指標均顯著低于對照組，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)；惡性組患者雄激素、雌二醇及黃酮水平均顯著低于對照組和良性組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)；99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測用于男性肺結(jié)節(jié)良惡性診斷，其陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準確性和靈敏性均顯著優(yōu)于99mTc-MIBI親腫瘤顯像或ADAM-9和性激素檢測診斷方法，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。結(jié)論99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測在男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性診斷中具有重要臨床價值，其準確性、特異性與靈敏度均十分理想。

99mTc-MIBI；去整合素金屬蛋白酶9；性激素；肺結(jié)節(jié)；診斷；特異性；靈敏性

肺癌作為臨床一種常見腫瘤疾病，對人類生命安全存在嚴重威脅[1-2]。99mTc-甲氧異丁基異睛(99mTc-MIBI)是一種臨床常用腫瘤陽性顯像劑，可明顯提升肺癌診斷準確性及靈敏度[3]。報道指出，肺結(jié)節(jié)病及肺結(jié)核患者去整合素金屬蛋白酶9(A disintegrin and metalloproteinase-9, ADAM-9)陽性表達顯著低于正?；颊撸伟┗颊唢@著高于正?；颊遊4]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者存在性激素失衡及紊亂現(xiàn)象[5]。本文主要探討99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測在男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性診斷中的敏感性與特異性。

資料與方法

一、一般資料

選擇2014年12-2016年12月在我院接受CT檢查發(fā)現(xiàn)肺部存在性質(zhì)待定結(jié)節(jié)78例男性患者作為本次研究對象，其中經(jīng)病理檢查，確診46例肺惡性結(jié)節(jié)(惡性組)，年齡為38-75歲，平均(60.37±4.05)歲；有吸煙史患者32例；結(jié)節(jié)大小為1.3-4.8 cm，平均(2.84±0.42)cm；惡性組織學(xué)分型：腺癌20例，鱗狀細胞癌26例；32例良性結(jié)節(jié)(良性組)，年齡為39-74歲，平均(61.28±3.92)歲；有吸煙史患者24例；結(jié)節(jié)大小為1.4-4.6 cm，平均(2.73±0.39)cm；良性結(jié)節(jié)類型：肉芽腫6例，血腫7例，炎性病變12例，其他7例。另選擇男性健康者40例作為對照組，年齡為40-70歲，平均(59.86±4.17)歲；吸煙史29例。本研究方案已經(jīng)獲得本院倫理委員會批準，所有研究對象及其家屬均對該研究方案有詳細了解，且自愿簽署了知情同意書。

二、排納標準

納入標準：①所有肺結(jié)節(jié)患者均經(jīng)臨床影像學(xué)檢查及病理活檢確診，符合相關(guān)診斷標準；②所有肺結(jié)節(jié)患者均未接受過任何藥物治療、放療和化療；③肺結(jié)節(jié)惡性患者腫瘤分期為I期的患者；④同意接受99mTc-MIBI親腫瘤顯像檢查的肺結(jié)節(jié)患者。排除標準：①對99mTc-MIBI過敏的患者；②具有肝、腎等人體重要器官功能嚴重障礙的患者；③伴有神志不清，無法正常交流的患者；④依從性較差，無法有效配合醫(yī)師相關(guān)檢查的患者。

三、方法

199mTc-MIBI親腫瘤顯像[6]

采用SPECT顯像儀(SOPHA-DST，法國)通過低能高分辨準直器對所有肺結(jié)節(jié)患者進行檢查，其中MIBI試劑盒購自北京師宏藥物研制中心，锝液(99mTc)購自原子高科股份有限公司。圖像共采集64幅，矩陣256×256，采集圖像每幀1000K?；颊咴诮邮軝z查前一天內(nèi)需清淡飲食，檢查時在病灶對側(cè)通過肘前靜脈進行99mTc-MIBI注射，劑量為1110MBq，分別采集患者肺部斷層及平面早期(30min)和延遲(120min)圖像，通過衰減及濾波校正所選取的圖像，采用ROI勾勒法，分別計算患者早期及延遲相腫瘤放射性攝取量(即T值)和早期及延遲相正常組織放射性攝取量(即N值)，顯像結(jié)果判定標準為：T/Nlt;1.4為陰性，T/N≥1.4為陽性。

2 ADAM-9 檢測方法

分別對3組研究對象(惡性組、良性組及健康對照組)進行支氣管肺泡灌注，采集各研究對象支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)，并將其通過無菌紗布進行過濾，濾液放置于50mL試管(無菌且不含有RNA酶)中，采用低溫(4℃)離心機進行10min低速離心，收集細胞沉淀，通過磷酸緩沖液(0.01mol/L)輕輕沖洗，再進行10min低溫低速離心，細胞沉淀物通過Trizol試劑盒(購自美國Introgen公司)進行處理，并放置于-80℃保存待用，同時收集3組研究對象清晨空腹外周血5mL，離心15min(轉(zhuǎn)速為3000r/min)，收集血清，并放置于-80℃保存待用。BALF中的ADAM-9 mRNA表達水平通過熒光定量PCR儀(ABI Prism 7000型，購自上海普迪生物科技有限公司)進行熒光定量RT-PCR檢測[7]，其中SYBR Green I染料購自大連美侖生物技術(shù)有限公司，PCR引物購自生工生物工程(上海)股份有限公司。BALF和血清ADAM-9蛋白表達通過ELISA法檢測[8]。若研究對象ADAM-9 mRNA表達水平或ADAM-9蛋白表達水平顯著高于正常值則判定結(jié)果為陽性。

3 血清性激素檢測

采用上述ADAM-9蛋白表達檢測剩余血清進行檢測，分別檢測各研究對象血清黃酮、雌二醇及睪酮水平，通過ELISA法進行測定，試劑盒購自上海玉博生物科技有限公司，具體操作嚴格按照使用說明書進行。若研究對象三種雌激素水平均顯著低于正常值則判定結(jié)果為陽性。

499mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測診斷

聯(lián)合診斷陽性判斷標準為99mTc-MIBI親腫瘤顯像診斷陽性或單個指標判定為陽性。

四、統(tǒng)計學(xué)方法

本研究所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件分析，以百分數(shù)(%)表示計數(shù)資料，組間對比通過卡方檢驗(χ2)進行分析，以均數(shù)±標準差( ±s)表示計量資料，所有數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，采用獨立樣本t檢驗進行組間對比分析。當(dāng)Plt;0.05，表示數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、三組研究對象ADAM-9 mRNA表達水平及ADAM-9蛋白表達水平

與健康男性相比，男性肺結(jié)節(jié)惡性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表達水平顯著升高，而良性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表達水平顯著降低，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)；男性肺結(jié)節(jié)惡性患者BALF及血清中ADAM-9 蛋白表達水平均顯著高于健康男性人群，而良性患者BALF及血清中ADAM-9 蛋白表達水平均顯著低于健康男性人群，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，Plt;0.05。(見表1)。

表1 三組ADAM-9 mRNA及ADAM-9蛋白表達水平比較

二、三組研究對象血清性激素水平情況

健康男性人群中，雄激素、雌二醇及黃酮含量分別為(5.56±0.40)ng/mL、(33.52±3.61)pg/mL以及(0.58±0.16)ng/mL，檢測男性肺結(jié)節(jié)良性患者血清性激素水平發(fā)現(xiàn)，雄激素、雌二醇及黃酮水平雖然有下降趨勢，但與健康男性相比，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(Pgt;0.05)；而男性肺結(jié)節(jié)惡性患者雄激素、雌二醇及黃酮水平均顯著低于健康男性人群和性肺結(jié)節(jié)良性患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。(見表2)。

表2 三組血清性激素水平比較

三、99mTc-MIBI親腫瘤顯像檢查結(jié)果

99mTc-MIBI親腫瘤顯像檢查用于男性肺結(jié)核良惡性診斷，其陽性預(yù)測值為68.75%(33/48)，陰性預(yù)測值為56.67%(17/30)，準確性、特異性及靈敏性分別為64.10%、53.13%和71.74%。(見表3)。

表3 99mTc-MIBI親腫瘤顯像檢查結(jié)果

四、ADAM-9和性激素檢測判定結(jié)果

用ADAM-9和性激素檢測用于男性肺結(jié)核良惡性診斷，其陽性預(yù)測值為71.43%(30/42)，陰性預(yù)測值為55.56%(20/36)，準確性、特異性及靈敏性分別為64.10%、62.50%和65.22%。詳見表4。

表4 ADAM-9和性激素檢測判定結(jié)果

五、99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測判定

99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測用于男性肺結(jié)核良惡性診斷，其陽性預(yù)測值為89.58%(43/48)，陰性預(yù)測值為88.89%(24/27)，準確性、特異性及靈敏性分別為85.90%、75.00%和93.48%。(見表5)。

表5 99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測診斷男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性結(jié)果

顯像診斷、指標診斷以及二者聯(lián)合檢測診斷

99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測用于男性肺結(jié)核良惡性診斷，其陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準確性和靈敏性均顯著優(yōu)于99mTc-MIBI親腫瘤顯像或ADAM-9和性激素檢測診斷方法，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測用于男性肺結(jié)核良惡性診斷的特異性與ADAM-9和性激素檢測診斷以及99mTc-MIBI親腫瘤顯像診斷相比，不具有顯著性差異，Pgt;0.05。(見表6)。

表6 顯像診斷、指標診斷以及二者聯(lián)合檢測診斷

討 論

隨著人類社會不斷發(fā)展，環(huán)境污染逐漸加重，肺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，臨床早診早治十分必要。肺癌傳統(tǒng)影像學(xué)檢查主要為CT和核磁共振，但二者均存在不足之處[9]。CT對于判斷縱隔及胸壁侵犯或縱隔淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移難以取得令人滿意的效果，其診斷平均特異性為(0.77±0.02)，平均敏感性為(0.60±0.02)，陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值分別為50%和85%，診斷正確性僅能夠達到75%，具有較大局限性[10]。而核磁共振對于肺部細微結(jié)構(gòu)的觀察效果欠佳，難以顯示直徑低于1cm的結(jié)節(jié)；且體內(nèi)裝有支架、心臟起搏器等金屬物質(zhì)的患者無法采用核磁共振檢查；此外檢查時間較長，部分患者并不適用[11]。因此，臨床急需研究開發(fā)一種準確性更高的診斷方案。甲氧基異丁基乙腈是一種帶有正電荷的親脂分子，而線粒體內(nèi)膜帶有負電荷，兩者之間存在電位差，因此MIBI能夠進入機體細胞內(nèi)，且超過90%的MIBI可進入線粒體[12]。腫瘤細胞內(nèi)存在大量線粒體，導(dǎo)致MIBI被大量攝取，從而使MIBI在腫瘤組織和正常組織間分布存在明顯差異，并形成陽性顯像，基于該原理，99mTc-MIBI親腫瘤顯像已廣泛用于臨床肺結(jié)節(jié)良惡性診斷[13]。

ADAM是一類跨膜糖蛋白，可調(diào)節(jié)細胞與外基質(zhì)以及細胞與細胞間的相互作用，并可維持細胞的正常生理形態(tài)及功能，報道指出，在多種常見惡性腫瘤中，ADAM-9表達量均有明顯升高，可通過改變分子活性狀態(tài)和使細胞間黏附下降，發(fā)揮細胞遷移及外基質(zhì)重塑調(diào)節(jié)作用，為腫瘤生長、轉(zhuǎn)移提供生理條件[14]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，ADAM-9在正常肺組織肺泡間隔及肺泡腔內(nèi)有大量表達，且肺癌患者BALF中的ADAM-9 mRNA表達量顯著高于正常人群，且肺癌患者BALF和血清中ADAM-9 蛋白表達水平同樣顯著高于正常人群，可見ADAM-9異常高水平表達同肺癌發(fā)生密切相關(guān)[15]。本研究結(jié)果亦表明，男性肺結(jié)節(jié)惡性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表達水平顯著高于健康男性；且男性肺結(jié)節(jié)惡性患者BALF及血清中ADAM-9 蛋白表達水平同樣顯著高于健康男性人群，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)，該結(jié)果與前人研究相符。此外，ADAM-9還具有分解明膠和纖維結(jié)合素的作用，可能具有水解外基質(zhì)蛋白的作用。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，男性肺結(jié)節(jié)良性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表達水平顯著以及BALF和血清中ADAM-9 蛋白表達水平均顯著低于健康男性人群，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。分析原因可能與ADAM-9具有降低細胞與外基質(zhì)以及細胞與細胞間作用效果有關(guān)，使得細胞與細胞基質(zhì)間平衡被破壞，從而導(dǎo)致肉芽腫形成，并為肺纖維化的發(fā)生提供條件?？梢?，檢測肺結(jié)節(jié)患者BALF中的ADAM-9 mRNA表達水平以及BALF和血清中ADAM-9 蛋白表達水平，可用于肺結(jié)節(jié)良惡性診斷。

女性和男性中性激素水平具有較大差異，為了排除性別差異的干擾，本研究僅選擇男性患者進行研究，且所有肺結(jié)節(jié)惡性患者均經(jīng)病理證實處于I期，以探究性激素是否可以作為惡性腫瘤早期判斷依據(jù)。睪酮是一種由睪丸間質(zhì)細胞直接分泌的性激素，最終可在肝臟中轉(zhuǎn)化為雌激素或被滅活，男性人群體內(nèi)，大部分雌激素由睪酮轉(zhuǎn)化形成，睪丸僅分泌較小一部分[16]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，男性肺結(jié)節(jié)惡性患者雄激素、雌二醇及黃酮水平均顯著低于健康男性人群，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)；而男性肺結(jié)節(jié)良性患者上述三種性激素水平雖然有一定程度降低，但并不顯著(Pgt;0.05)。提示性激素水平檢測可能對男性肺結(jié)節(jié)惡性患者診斷具有一定輔助作用。該結(jié)果與張雙等學(xué)者[17]研究結(jié)果相同。研究發(fā)現(xiàn)，生理狀態(tài)下，雌激素和雄激素均參與肺細胞結(jié)構(gòu)與生理功能形成，如雌激素參與肺血管舒張反應(yīng)，睪酮可促進肺組織生長等[18]。肺癌將導(dǎo)致肺功能失調(diào)，從而造成男性患者血清性激素水平顯著下降，對于男性肺結(jié)節(jié)良性患者來說，該類病灶不會對性激素水平造成較大影響，因此患者血清性激素水平下降并不明顯。

本研究中采用99mTc-MIBI親腫瘤顯像對男性肺結(jié)節(jié)良惡性進行診斷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其假陽性率偏高，從而造成特異性下降，該結(jié)果與趙義剛等學(xué)者[19]研究結(jié)果保持一致。分析原因可能是因為外傷、感染及炎癥等良性改變均能夠?qū)е?9mTc-MIBI大量積聚，從而形成陽性表現(xiàn)。與男性健康人群相比，ADAM-9 和性激素等指標在男性肺結(jié)節(jié)惡性患者中差異十分顯著，因此可明顯提升指標診斷陽性率，但某些微小病灶無法被99mTc-MIBI親腫瘤顯像檢測出來，主要是因為SPECT分辨率不足，導(dǎo)致患者出現(xiàn)假陰性表現(xiàn)，而99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測能夠有效彌補該不足之處，因此，99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測用于男性肺結(jié)節(jié)良惡性診斷，其陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準確性和靈敏性均顯著優(yōu)于99mTc-MIBI親腫瘤顯像或ADAM-9和性激素檢測診斷方法，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.05)。

綜上所述，99mTc-MIBI親腫瘤顯像聯(lián)合ADAM-9、性激素檢測在男性肺結(jié)節(jié)患者良惡性診斷中具有重要臨床價值，其準確性與靈敏性均十分理想。因受到研究對象數(shù)量及來源限制，本研究尚存在一定不足，有待進一步擴大樣本容量和進行地區(qū)差異研究。

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Sensitivityandspecificityof99mTc-MIBIimagingcombinedwithADAM-9,sexhormoneindiagnosisofbenignandmalignantpulmonarynodulesofmales

JINCai-xia,LIUMing-xia,YUANYou-fa,WANGQing-sheng,ZHANGJin-shu
RadiologyDepartment,ChinesePeople’sLiberationArmyNO. 305Hospital,Beijing100017,China

ObjectiveTo explore the sensitivity and specificity of99mTc-MIBI imaging combined with disintegrin and metalloproteinase-9 (ADAM-9) and sex hormone in diagnosis of benign and malignant pulmonary nodules of males.Methods78 male patients who were detected pulmonary nodules by computed tomography (CT) in our hospital from December 2014 to December 2016 were selected as research objects. 46 patients of malignant pulmonary nodules was the malignant group, 32 patients of benign pulmonary nodules was the benign group, and 40 cases of male healthy as the control group. The ADAM-9 mRNA expression in bronchoalveolar lavage fluid (BALF), expression of ADAM-9 protein in BALF and serum, and serum sexual hormone level were compared in the three groups. The positive predictive value, negative predictive value, accuracy, specificity and sensitivity of99mTc-MIBI imaging combined with ADAM-9, sex hormone in diagnosis of benign and malignant pulmonary nodules of males were analyzed.ResultsThe expression of ADAM-9 mRNA in BALF and ADAM-9 protein in BALF and serum in the malignant group were significantly higher than those in the control group, and the benign group were significantly lower than the control group (Plt;0.05). The levels of male hormone, estradiol and flavone in the malignant group were significantly lower than those in the control group and the benign group (Plt;0.05). The positive predictive value, negative predictive value, accuracy and sensitivity of99mTc-MIBI imaging combined with ADAM-9, sex hormone in diagnosis of benign and malignant pulmonary nodules of males were significantly better than the diagnosis of99mTc-MIBI imaging or ADAM-9 and sex hormone detection (Plt;0.05).Conclusion99mTc-MIBI imaging combined with ADAM-9 and sex hormone detection has great clinical significance in identifying pulmonary nodules of males. It’s accuracy, sensitive and specify.

99mTc-MIBI; disintegrin and metalloproteinase-9; sex hormone; pulmonary nodules; diagnosis; specificity; sensitivity

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.12.036

100017 北京，中國人民解放軍第三〇五醫(yī)院 1.放射科 2.檢驗科

劉明霞，Email：youyo_775@163.com

2017-04-26]