HPLC法測(cè)定糞箕篤中肉桂酸的含量

廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530200

藥物研究

HPLC法測(cè)定糞箕篤中肉桂酸的含量

龐丹清魏中璇陳勇*闕祖亮魏江存張昕

廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530200

目的建立高效液相色譜法定量測(cè)定糞箕篤中肉桂酸的含量。方法采用色譜柱：Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(24∶76)；流速：1mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：285nm。結(jié)果肉桂酸在0.0217～0.0760μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，加樣回收率為100.46%，RSD為2.20%，含量在0.004%～0.022%之間。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于糞箕篤的質(zhì)量控制。

糞箕篤；肉桂酸；HPLC

糞萁篤(StephanialongaLour.)為防己科千金藤屬植物，味苦，性寒，中醫(yī)認(rèn)為其具有清熱解毒、利濕消腫、祛風(fēng)活絡(luò)等功效，壯醫(yī)認(rèn)為該藥材具有清熱毒，祛風(fēng)毒，調(diào)龍路、火路，通谷道等功效，主要用于痢疾、水腫、黃疸等[1]。研究表明，糞箕篤藥材具有利尿、鎮(zhèn)痛、治療前列腺增生等作用[2-3]。糞箕篤的化學(xué)成分主要含有蓮花烷類(lèi)生物堿成分和肉桂酸等非堿性物質(zhì)[4-6]。肉桂酸具有抗炎、抗真菌作用，作為植物生長(zhǎng)促進(jìn)劑、長(zhǎng)效殺菌劑、果品蔬菜的防腐劑和作為測(cè)定鈾、釩及分離釷的試劑，是合成藥品治療冠心冠“可心安”的重要中間體[7-8]；肉桂酸將是一種有前途的防治心肌缺血再灌注損傷的藥物[9]。綜合各因素考慮，實(shí)驗(yàn)選擇肉桂酸成分為糞箕篤藥材中的指標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定，為糞箕篤的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀(G1311B四元梯度泵，G1314F紫外檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司)；SQP電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；TGL-16G離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；KQ5200B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 乙腈、甲醇(色譜純，賽默飛世爾科技有限公司)；甲醇、乙醇(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；超純水(法國(guó)默克密里博純水儀)；磷酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；肉桂酸對(duì)照品(批號(hào)：20160610，寶雞市辰光生物科技有限公司)。

糞箕篤藥材來(lái)源于廣西壯族自治區(qū)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院郭敏副教授和梁子寧副教授鑒定為防己科千金藤屬植物糞箕篤(StephanialongaLour.)的地上部分。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(24∶76)；檢測(cè)波長(zhǎng)：285nm；流速：1mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量：10μL。色譜圖如圖1、2所示。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取肉桂酸對(duì)照品適量，加甲醇溶液制成濃度為0.53mg/mL的肉桂酸對(duì)照品儲(chǔ)備液，取上述溶液800μL，置于5mL的容量瓶中，加甲醇定容，配置成每1mL含有8.48μg 的肉桂酸對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 稱(chēng)取糞箕篤藥材粉末1g，精密稱(chēng)定，置50mL錐形瓶中，精密加入70%乙醇溶液10mL，搖勻，超聲提取60min，放置室溫后，補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，13000r離心10min，即得供試品溶液[10-11]。

2.4 線性關(guān)系的考察 取肉桂酸對(duì)照品溶液適量，置于2mL容量瓶，用甲醇定容，置成每1mL含有5.43μg的肉桂酸對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣4、6、8、10、12、14μL。用肉桂酸含量為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸：Y=8200.1429X-0.3582，相關(guān)系數(shù)r2=0.9995，結(jié)果(如圖2所示)表明肉桂酸在0.0217～0.0760μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定肉桂酸的峰面積。結(jié)果肉桂酸峰面積RSD為0.63%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取6份同一批次糞箕篤藥材粉末1g，精密稱(chēng)定，按照“2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算肉桂酸的含量及RSD，平均含量為0.0556mg/g，RSD=0.60%，表明此方法具有良好的重復(fù)性。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取1份糞箕篤藥材粉末1g，精密稱(chēng)定，按照“2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD為0.50%， 表明供試品溶液在24h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取6份已知含量的糞箕篤藥材粉末，置于錐形瓶，每份約0.5g，精密稱(chēng)定。各加入0.0265mg肉桂酸對(duì)照品，按照“2.3”項(xiàng)制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算肉桂酸含量及RSD，計(jì)算加樣回收率，平均回收率為100.46%，RSD為2.20%，結(jié)果見(jiàn)表1。由以上結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確性良好。

表1 肉桂酸加樣回收結(jié)果 (n=6)

2.9 樣品含量測(cè)定 11批糞箕篤藥材均來(lái)源于廣西壯族自治區(qū),取不同產(chǎn)地和采集時(shí)間的糞箕篤藥材粉末各1g，精密稱(chēng)定，按照“2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 糞箕篤藥材中肉桂酸含量

由上表實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，在11批糞箕篤藥材中，2014年7月在廣西橫縣采集的藥材中肉桂酸的含量最高，為0.2225mg/g；而在對(duì)廣西欽州與上林兩地的藥材進(jìn)行肉桂酸的含量測(cè)定時(shí)，由于峰面積太小無(wú)法積分難以計(jì)算出肉桂酸的含量。

3 討論

通過(guò)測(cè)定11批不同批次的糞箕篤藥材中的肉桂酸成分發(fā)現(xiàn)，各產(chǎn)地藥材中肉桂酸的含量差異較大，實(shí)驗(yàn)研究初步判斷肉桂酸在藥材中含量的差異是由于各地區(qū)土壤的差異及不同采集時(shí)間對(duì)植物的影響造成的，仍待進(jìn)一步研究觀察。但本實(shí)驗(yàn)建立的實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、易操作、穩(wěn)定性好，且重現(xiàn)性強(qiáng)，可為糞箕篤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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DeterminationofCinnamicAcidinPlantsofStephanialongaLour.byHPLC

PANG Danqing WEI Zhongxuan CHEN Yong*QUE Zuliang WEI Jiangcun ZHANG Xin

Guangxi University of Chinese Traditional Medicine, Nanning 530200, China

ObjectiveTo establish a method for determining catechin ofStephanialongaLour. by HPLC.MethodsStephanialongaLour. was determined by HPLC on a Inertsil Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm) column，acetonitrile -0.1% phosphoricacid solution(24∶76)as mobile phase，flow rate wsa 1mL/min，column temperature was main-tained at 30℃,and detection wavelength was set at 285nm.ResultsCinnamic acid showed good linear relationship within 0.0217～0.0760μg, the recovery was 100.46%,RSDwas 2.20%, The content was within the 0.004%～0.022%.ConclusionThe method is simple and accurate, It can be used for the quality control ofStephanialongaLour.

StephanialongaLour.;Cinnamic acid;HPLC

國(guó)家自然科學(xué)基金(NO:81260673，81660701)；廣西中醫(yī)藥大學(xué)科。研創(chuàng)新項(xiàng)目(NO:JS201625)；廣西高校中藥提取純化與質(zhì)量分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(桂教科研〔2014〕6號(hào))。

龐丹清(1993-)，女，漢族，碩士研究生，研究方向?yàn)樗幬镔|(zhì)量控制。E-mail: 1450358251@qq.com

陳勇(1961-)，男，漢族，本科，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幖捌渲苿┵|(zhì)量分析。E-mail: cy6381@163.com

R284.1

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1007-8517(2017)21-0010-03

2017-09-15 編輯：鄧佳麗)