一種用于病理切片封固劑快速干燥的方法

包 驥，李 麗，陳 菲，鄧 楊，步 宏

邁新·技術(shù)交流

一種用于病理切片封固劑快速干燥的方法

包 驥，李 麗，陳 菲，鄧 楊，步 宏

病理切片；封固劑；快速干燥；真空加熱；紫外線

封固也叫封片，是制做常規(guī)組織切片標(biāo)準(zhǔn)步驟的最后一道工序[1]，封片的過程是將染色好的切片用封固劑封固起來，即把蓋玻片與載玻片用封固劑粘合在一起。切片完全干燥的衡量標(biāo)準(zhǔn)是在用兩手指較用力搓時，蓋玻片與載玻片間不應(yīng)有滑動。此后可將切片豎立，前后疊放，相互不會粘連。目前國內(nèi)病理實驗室多采用常溫自然干燥法，需將切片單層平放7～14天，封固劑才能完全干透，這種做法比較費時，而且會占用許多空間。在其完全干透之前，該病理切片既不利于用來進行全片數(shù)字掃描(容易滑動或卡片)，也不利于存放(容易和其他切片相互粘連)。因此，使用新的方法和設(shè)備縮短病理切片制作過程中封固劑的干燥時間，對于病理切片的制作來說有著重要的意義。而在目前國內(nèi)大多數(shù)文獻中，有關(guān)封片步驟的研究報道極少，更極少有報道研究加快封固劑干燥的方法或設(shè)備[2-4]。本文現(xiàn)介紹一種簡單快速的干燥方法，其設(shè)備是本團隊自主研發(fā)、供病理切片干燥專用。

1 材料與方法

1.1材料HE染色切片；中性快干膠封固劑(江源中性快干膠，100 mL，批號14102202)；紫外真空加熱干燥箱(病理切片快干箱；主要部件包括箱體、顯示屏、切片載板、抽氣管、紫外光燈(圖1)；型號PSFD-01；接入電源220～240 V；冷臺(賽默飛公司；Histostar Cold Module；220～240 V～50/60 Hz，230 VA)；烘箱(賽默飛公司；Heratherm OMS100；230 V，13.3 A，3.06 kW)。

1.2方法(1)封固：將已經(jīng)染色完成的病理切片用中性快干膠封固劑封片。(2)干燥：將剛封固好的病理切片放入紫外真空加熱干燥箱中進行真空加熱干燥+人工紫外光照射25 min(50 ℃，氣壓500 Pa，人工紫外光燈功率36 W)。(3)冷卻：將該切片置于冷臺上進行冷卻5 min。(4)回溫：將該切片放置常溫下干燥30 min。對照組分別使用常溫自然干燥法或烘箱加熱(50 ℃)干燥法。

圖1病理切片紫外真空加熱干燥箱結(jié)構(gòu)圖：A.真空干燥區(qū)域(病理切片干燥的區(qū)域，內(nèi)置氣壓感應(yīng)計與溫度計)；B.加熱區(qū)域(封閉的水加熱區(qū)域，內(nèi)置電熱絲)；C.顯示屏(顯示和設(shè)置箱內(nèi)的溫度、氣壓以及干燥時間)；D.切片載板(裝載病理切片)；E.抽氣管(與真空泵相連)；F.紫外光燈

2 結(jié)果

經(jīng)上述步驟處理的切片，封固劑在1 h內(nèi)完全干透(圖2)，之后可用于全片數(shù)字化切片掃描。此后也可將切片豎立，前后疊放，相互不會粘連，長期保存，顏色亦不受影響。便于儲存、提高效率、降低成本、改善環(huán)境。對照組切片封固劑均在7天后完全干透。

ABCD

圖2使用烘箱加熱干燥(50 ℃)和本組實驗中的紫外真空加熱干燥箱干燥1 h后的結(jié)果對比：A.使用烘箱加熱干燥(50 ℃)的切片；B.用手指推蓋玻片后，蓋玻片明顯傾斜；C.使用紫外真空加熱干燥箱干燥的切片；D.用手指推蓋玻片后，蓋玻片不能被推動

3 討論

封固劑干燥的過程主要是溶劑的蒸發(fā)以及膠體的凝固，本實驗?zāi)軌驅(qū)崿F(xiàn)快速干燥主要有以下幾方面的原因：一方面，真空+加熱能夠使得膠體內(nèi)的水分受熱后迅速向周圍的準(zhǔn)真空環(huán)境滲透蒸發(fā)；另一方面，由于紫外光是一種電磁波，在其穿透溶劑時會帶動分子震動和轉(zhuǎn)動，從而產(chǎn)生熱量，加速水分的蒸發(fā)，由于是直接作用到分子級內(nèi)部，所以該方法比單純的加熱干燥效果更好、更省時間。而封固劑凝固本是一個放熱的過程，膠體水分基本蒸發(fā)后，放到冷臺上冷卻，能夠加速凝固過程。

本組實驗使用3種方法進行對比實驗：(1)傳統(tǒng)干燥法：讓病理切片在常溫下自然干燥，使用這種方法中性快干膠需要7天時間才能完全干透。(2)用烘箱加熱(50 ℃)法：然而實驗表明單純的加熱不能有效縮短封固劑干燥時間，使用該方法讓中性快干膠完全干透仍需要約7天時間。(3)本組新方法：中性快干膠干燥花費的時間在1 h左右，大大地加快了切片干燥的速度。注意事項：紫外真空加熱干燥箱溫度過低<45 ℃時，干燥時間會大為延長；溫度>55 ℃時，中性快干膠內(nèi)易出現(xiàn)小泡；溫度如再增高>75 ℃，中性快干膠黏性反而降低，甚至冒出煙霧，切片會損毀。而加熱使用中真空度如果過高，氣壓<500 Pa，中性快干膠內(nèi)易出現(xiàn)小的氣泡；而加熱使用中真空度如果過低，氣壓>10 000 Pa，干燥時間明顯延長，超過1 h，中性快干膠易出現(xiàn)收縮，致蓋玻片移位。

而使用上述方法的條件，在保證切片質(zhì)量的前提下，從一開始的真空加熱干燥一直到最后的自然干燥，中性快干膠干燥總花費時間控制在1 h左右，大大地加快了切片干燥的速度，達到了預(yù)期目的。使病理切片可以盡快的用于全片數(shù)字化切片掃描，也更便于儲存、提高了效率、降低了人工成本及改善室內(nèi)環(huán)境。

[1] 付先利, 吳建農(nóng). 一種解決切片干燥的方法[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2013,29(7):807.

[2] 陸敏華, 錢夢曄, 印永祥, 張煒明. 浸染式全自動HE染色封片一體機的使用和維護保養(yǎng)體會[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2015,31(5):592-593.

[3] 朱育連, 張麗芳, 鄭巧靈, 等. Leica全自動染色封片一體化工作站在病理常規(guī)制片中的應(yīng)用體會[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2014,30(11):1324-1325.

[4] 朱小蘭, 駱新蘭, 武鴻美, 等. Symphony全自動染色封片工作站在常規(guī)病理中的應(yīng)用[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2015,31(4):473-474.

R 361+.2

B

1001-7399(2017)10-1165-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.10.029

時間：2017-10-23 13:30 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20171023.1330.029.html

接受日期：2017-06-19

四川省衛(wèi)生計生委科研課題(16PJ336)

四川大學(xué)華西醫(yī)院病理研究室，成都 610041

包 驥，男，副研究員。E-mail: baoji@scu.edu.cn

步 宏，男，博士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，教授