武當(dāng)山區(qū)市售重樓飲片中總皂苷含量分析研究

胡懷明++++++沈婷++++葉方+++++黃良永+++++梁文斌

[摘要] 目的 比較武當(dāng)山區(qū)市售重樓飲片中總皂苷的含量，考察醫(yī)院、藥店等醫(yī)藥市場(chǎng)上銷售的重樓飲片質(zhì)量情況，為中藥重樓的生產(chǎn)、經(jīng)銷、臨床使用和監(jiān)管提供參考。 方法 收集武當(dāng)山區(qū)（以湖北省十堰市為主）醫(yī)院、藥店中重樓飲片樣品，用高氯酸顯色，在406 nm波長(zhǎng)處使用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定重樓飲片中總皂苷含量。 結(jié)果 市售重樓飲片中重樓總皂苷的含量差異明顯，收集到的23個(gè)樣本中總皂苷含量最低的只有1.79%，最高達(dá)11.79%。 結(jié)論 市售重樓飲片的質(zhì)量參差不齊，會(huì)影響臨床用藥的安全性、有效性。需要加強(qiáng)對(duì)中藥重樓的生產(chǎn)、經(jīng)銷監(jiān)管。推動(dòng)中藥材規(guī)范化種植，以保證中藥質(zhì)量的穩(wěn)定可控。

[關(guān)鍵詞] 重樓；總皂苷；含量

[中圖分類號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）10（c）-0132-04

Research of the content of total saponins in commercially available Paris polyphylla from Wudang Mountain Area

HU Huaiming1，2 SHEN Ting3 YE Fang1，2 HUANG Liangyong1，2 LIANG Wenbin1，2

1.Department of Pharmacy， Shiyan City Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 2.Engineering Research Center for Herbal Utilization of Hubei Province， Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 3.College of Pharmacy， Hubei University of Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan 430065， China

[Abstract] Objective To compare the content of total saponins in commercially available Paris polyphylla from Wudang Mountain Area to investigate the quality of herbal pieces purchased from hospitals， pharmacies and other pharmaceutical markets. It provides a reference for production， distribution， clinical application and regulation of Paris polyphylla. Methods Herbal pieces of the Paris polyphylla were collected from hospitals and pharmacies in Wudang Mountain Area （mainly in Shiyan， Hubei Province）. The content of total saponins in Paris polyphylla was determined by an ultraviolet-visible spectrophotometer at 406 nm with perchloric acid as chromogenic reagent. Results The content of saponins in Paris polyphylla from 23 samples had obvious differences， the minimum was 1.79%， and the maximum was up to 11.79%. Conclusion The quality of Paris polyphylla is unstable which can affect the safety and efficacy of clinical application. The supervision of the production and marketing of Paris polyphylla need to be strengthened. Only by promoting the standardized planting of Chinese medicine materials， the stable quality of Paris polyphylla can be ensured.

[Key words] Paris polyphylla； Total saponins； Content

重樓為百合科重樓屬植物[1]，有清熱解毒，消腫止痛，涼肝定驚之功效?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)重樓具有免疫調(diào)節(jié)、止血、抗腫瘤[2-4]、心血管系統(tǒng)作用[5]等多種藥理活性，其活性成分主要為重樓總皂苷[6]和黃酮類化合物[7-8]。我國(guó)主要分布在云南、貴州、四川、湖北等地[9-10]，武當(dāng)山區(qū)分布有2種6變種[11]，《中國(guó)藥典》（2015版）規(guī)定藥用重樓為云南重樓[Paris polyphylla Sm. var. yunnanensis（Franch.）Hand.-Mzt.]或七葉一枝花[P. polyphylla Sm. var. chinensis（Franch.）Hara.]的干燥根莖[12]。但藥農(nóng)在采挖野生重樓過(guò)程中沒(méi)有區(qū)分是否藥典規(guī)定的品種，藥材收購(gòu)商也無(wú)鑒別真?zhèn)文芰Γ援?dāng)前我國(guó)中藥材市場(chǎng)上存在著中藥品種不純正、摻假造假等多種現(xiàn)象，影響臨床療效和安全[13]，因此加強(qiáng)質(zhì)量控制和監(jiān)管是保證中藥材質(zhì)量的關(guān)鍵舉措。《中國(guó)藥典》[12]采用HPLC法測(cè)定重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量作為質(zhì)量控制方法，而中藥的特點(diǎn)是整體性和模糊性[14]，幾種單體成分不能完全反映中藥的整體質(zhì)量。采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定重樓中總皂苷的含量可以作為重樓質(zhì)量控制方法的有益補(bǔ)充[15]。endprint

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TU-1901全自動(dòng)紫外可見(jiàn)分光光度儀（北京通用普析儀器有限責(zé)任公司）；TDL-5A高速離心機(jī)（德國(guó)菲恰爾）；FA-2004電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；AUW-120D型電子分析天平（日本島津）；電熱恒溫水浴鍋（北京醫(yī)療設(shè)備廠）；XT-NX1氮吹儀（Made in U.S.A.）。

1.2 試藥

重樓皂苷Ⅶ對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111593-201303，含量92.5%），重樓飲片樣本搜集于以湖北省十堰市為主的武當(dāng)山區(qū)醫(yī)院藥房、社會(huì)藥店等地。樣本粉碎過(guò)三號(hào)篩備用。甲醇為色譜純，無(wú)水乙醇、高氯酸等試劑為分析純，水為自制超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

精密稱取2.0 g重樓飲片粉末置磨口三角燒瓶中，加入90%乙醇24 mL，水浴回流提取1 h，3000 r/min離心5 min，濾渣重復(fù)提取1次，上清液合并至100 mL量瓶中，用90%乙醇定容至刻度[16]。精密吸取提取液1.0 mL于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到供試品溶液A1～A23。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取重樓皂苷Ⅶ適量，精密稱定，加甲醇稀釋成每毫升含0.1 mg的對(duì)照品溶液。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液A1適量，置于10 mL具塞試管中，氮?dú)獯蹈珊蠹尤? mL高氯酸，密塞，60℃水浴反應(yīng)15 min后，置冷水浴中冷至室溫，在350～600 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果樣品和對(duì)照品溶液均在406 nm處有最大吸收，且較穩(wěn)定，因此確定406 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，置于10 mL具塞試管中，按“2.3”項(xiàng)下處理顯色后，在406 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，重樓皂苷Ⅶ對(duì)照品含量（X，mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=3.7855 X-0.0026，R2=0.9944。表明重樓皂苷Ⅶ含量在0.00962～0.2886 mg之間時(shí)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液1 mL于具塞試管中，按“2.3”項(xiàng)下方法操作顯色后，在406 nm波長(zhǎng)下連續(xù)測(cè)定吸光度，結(jié)果得吸光度的RSD為0.99%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取16號(hào)重樓飲片粉末2 g，共計(jì)6份，按“2.1”項(xiàng)下方法處理后，分別精密吸取各溶液1 mL于6只具塞試管中，按“2.3”項(xiàng)下方法顯色后，在406 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算總皂苷含量。結(jié)果得6份樣品平均含量為2.58%，RSD為0.79%（n = 6），表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取A1號(hào)供試品溶液1 mL于具塞試管中，按“2.3”項(xiàng)下方法顯色后，在0、0.5、1.0、2.0、4.0 h時(shí)測(cè)定其吸光度，結(jié)果得RSD為1.93%（n = 5），表明樣品溶液在顯色后4 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同批次20號(hào)重樓飲片粉末約1 g，共計(jì)6份，按“2.1”項(xiàng)下方法提取定容至100 mL量瓶中后，精密吸取提取液1.0 mL于10 mL量瓶中，再加入濃度為0.2405 mg/mL對(duì)照品溶液1.0 mL，混勻，用甲醇定容至刻度。精密量取混合溶液1.0 mL置于具塞試管中，按“2.3”項(xiàng)下方法顯色后，在406 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，計(jì)算加樣回收率。見(jiàn)表1。

2.5 樣品含量測(cè)定

精密量取供試品溶液A1～A23各1 mL，分別置于具塞試管中，揮干后加入5 mL高氯酸，置60℃水浴中15 min，取出，冷水浴至室溫，在406 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中重樓總皂苷的含量。見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 市售重樓中藥飲片質(zhì)量參差不齊

從測(cè)定的23個(gè)重樓飲片樣本中總皂苷含量的結(jié)果分析可以看出，武當(dāng)山區(qū)市售重樓飲片中重樓總皂苷的含量差異較明顯，最低的只有1.79%，最高達(dá)11.79%。雖然樣本主要收集于以十堰市及其周邊地區(qū)為主的醫(yī)院、藥店，范圍較小，樣本量也不足，但從收集的信息看，這些樣本產(chǎn)于湖北、云南、四川幾個(gè)重樓主產(chǎn)區(qū)，主要經(jīng)銷公司包括湖北、安徽、河南幾個(gè)省，輻射面可能很廣，所以這些樣本具有一定的代表性。各樣本之間總皂苷存在明顯差異，說(shuō)明藥材市場(chǎng)上重樓飲片的質(zhì)量參差不齊，肯定會(huì)影響臨床用藥的安全性、有效性。

3.2 保證中藥飲片質(zhì)量要從源頭做起

由于重樓對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求較高，而且需要生長(zhǎng)五年以上才能藥用[17-19]。重樓價(jià)格逐年上漲，剛采挖的鮮品售價(jià)每公斤超過(guò)百余元，藥農(nóng)為逐利不再遵循采大留小的傳統(tǒng)，進(jìn)行滅絕性采挖，重樓中的有效成分含量富集不足[19-20]，藥農(nóng)在采挖過(guò)程中也不能區(qū)分品種，藥材的質(zhì)量就不能保證。通過(guò)分析比較市售重樓飲片總皂苷含量也驗(yàn)證了目前重樓資源現(xiàn)狀。武當(dāng)山區(qū)是南水北調(diào)中線工程上游水源地，優(yōu)良的自然環(huán)境適于推廣重樓等中藥材種植[9-10]。應(yīng)當(dāng)以保護(hù)上游水資源、發(fā)展生物產(chǎn)業(yè)為契機(jī)，推動(dòng)中藥材規(guī)范化、產(chǎn)業(yè)化種植，以保證中藥質(zhì)量的穩(wěn)定可控，為本地區(qū)中藥資源的合理開(kāi)發(fā)利用和可持續(xù)發(fā)展做出應(yīng)有的貢獻(xiàn)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1978：86-96.

[2] 葉方，柳施一，胡培，等.武當(dāng)山區(qū)重樓屬植物基于ITS2的種內(nèi)鑒別研究[J].中草藥，2017，48（3）：550-558.endprint

[3] Zheng JY，Wang H，Chen XX，et al. Microsatellite markers for assessing genetic diversity of the medicinal plant Paris polyphylla var.chinensis（Trilliaceae） [J]. Genet Mol Res，2012，11（3）：1975-1980.

[4] Song Y，Li MF，Xu J，et al. Polymorphic microsatellite markers in the traditional Chinese medicinal plant Paris polyphylla var.yunnanensis [J]. Genet Mol Res，2015，14（3）：9939-9942.

[5] Li P，F(xiàn)u JH，Wang JK，et al. Extract of Paris polyphylla Simth protects cardiomyocytes from anoxia-reoxia injury through inhibition of calcium overload [J]. Chin J Integr Med，2011，17（4）：283-289.

[6] 年四輝，劉麗敏.重樓地上部分初步開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2007，28（4）：35-36.

[7] 鐘月姣，劉瑩，于新海，等.重樓活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016，2：69-71.

[8] Malla B，Gauchan DP，Chhetri RB. An ethnobotanical study of medicinal plants used by ethnic people in Parbat district of western Nepal [J]. J Ethnopharmacol，2015，165：103-117.

[9] 葉方，程鎮(zhèn)，楊光義，等.重樓植物的栽培技術(shù)研究進(jìn)展[J].中南藥學(xué)，2015，13（11）：1186-1189.

[10] 楊光義，胡培，葉方.重樓資源分布與可持續(xù)利用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥師，2016，19（1）：159-162.

[11] 葉方，胡培，楊光義，等.湖北武當(dāng)山地區(qū)重樓資源調(diào)查[J].中藥材，2015，38（8）：1616-1618.

[12] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：260.

[13] 陳芳萍.中藥質(zhì)量影響中醫(yī)臨床療效[J].海峽藥學(xué)，2016， 28（3）：197-198.

[14] 楊光義，葉方，郝新才.半仿生提取法在中藥新藥研究中的應(yīng)用[J].中國(guó)藥師，2010，13（8）：1188-1190.

[15] 葉方，程鎮(zhèn)，楊光義，等.紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定武當(dāng)山區(qū)重樓屬植物總皂苷的含量[J].中國(guó)藥師，2015， 18（11）：1983-1985.

[16] 盧偉，楊光義，葉方，等.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選重樓總皂苷提取工藝[J].中國(guó)藥師，2015，18（9）：1484-1487.

[17] 葉方，黃良永，陳黎，等.武當(dāng)山區(qū)人工種植重樓中9種重樓皂苷含量分析[J].中南藥學(xué)，2016，14（11）：1244-1248.

[18] 楊光義，胡培，葉方，等.武當(dāng)山區(qū)重樓屬植物皂苷類成分含量比較[J].中南藥學(xué)，2016，14（1）：77-81.

[19] 吳建平，葉方，陳黎，等.武當(dāng)山區(qū)栽培重樓根莖與須根中九種重樓皂苷含量比較[J].海南醫(yī)學(xué)，2016，27（22）：3613-3617.

[20] 楊金霞，張慧，葉方，等.武當(dāng)山區(qū)不同采收期寬葉重樓地上部分總黃酮的累積規(guī)律[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016， 13（24）：16-20.

（收稿日期：2017-07-25 本文編輯：李亞聰）endprint