膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型建立的研究現(xiàn)狀

宋寒冰++++++趙峰++++++葛圓圓2++++++楊丹++++++于英君

[摘要] 本文基于對(duì)膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎病因和治療機(jī)制的基礎(chǔ)研究的不斷探索，深入分析發(fā)現(xiàn)當(dāng)前建立骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型所選動(dòng)物以鼠、兔為主，其他動(dòng)物如狗、豬、雞等應(yīng)用較少。常用造模方法主要有自發(fā)性模型、手術(shù)造模以及其他方法等，不同動(dòng)物及不同方法有著較為嚴(yán)格的區(qū)別，因此在選擇模型時(shí)應(yīng)根據(jù)研究需要綜合考慮。

[關(guān)鍵詞] 膝關(guān)節(jié)；骨關(guān)節(jié)炎；動(dòng)物模型

[中圖分類(lèi)號(hào)] R684.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）10（c）-0046-04

Research status of establishment of animal model of knee osteoarthritis

SONG Hanbing1 ZHAO Feng2 GE Yuanyuan2 YANG Dan2 YU Yingjun3▲

1.The Third Department of Orthopaedics， the First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine， Heilongjiang Province， Harbin 150040， China； 2.Graduate School， Heilongjiang University of Chinese Medicine， Heilongjiang Province， Harbin 150040， China； 3.School of Basic Medicine， Heilongjiang University of Chinese Medicine， Heilongjiang Province， Harbin 150040， China

[Abstract] Based on the continuous exploration on the fundamental researches of etiology and treatment mechanism of knee osteoarthritis， this paper takes in-depth analysis and finds that the animals used for establishing animal models with osteoarthritis at present are mainly rats and rabbits， the application of other animals， such as dogs， pigs， chickens and others， is less. The commonly model replicating methods are spontaneous models， operation models， and other methods， different animals and different methods have relatively strict distinction， so the choice of models should be based on the need of study.

[Key words] Knee joint； Osteoarthritis； Animal model

膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎是在骨科臨床中常見(jiàn)的一種以關(guān)節(jié)退行性改變?yōu)橹鞯募膊。欣夏耆巳憾喟l(fā)，主要癥狀為膝關(guān)節(jié)增生樣腫脹、關(guān)節(jié)內(nèi)翻畸形、屈伸活動(dòng)受限，負(fù)重行走尤其上下樓梯時(shí)疼痛明顯加重，關(guān)節(jié)磨糙音、彈響，部分患者會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)腔積液[1]。目前，對(duì)于膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的臨床和基礎(chǔ)研究越來(lái)越廣泛，但是膝骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生的病因和治療機(jī)制的基礎(chǔ)研究尚不豐富，有待于進(jìn)一步的探索。在試驗(yàn)過(guò)程中，能夠制造最為接近人的膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病因及轉(zhuǎn)歸的動(dòng)物模型則尤其重要。

經(jīng)過(guò)造模方法的不斷深入研究，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的造模方法較多，利用兔和大鼠來(lái)造模的方式是最為常見(jiàn)的，動(dòng)物模型一般有自發(fā)性模型、誘發(fā)性模型、手術(shù)方法造模等。為了能夠更順利地完成膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，在目前文獻(xiàn)研究報(bào)道的基礎(chǔ)上，本文總結(jié)了動(dòng)物模型的常見(jiàn)建立方法，以利于研究者能夠更順利地運(yùn)用膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

1 鼠類(lèi)模型的制作

1.1 喂養(yǎng)造模

Silberberg等[2]給以含高脂肪、高動(dòng)物油脂的飼料喂養(yǎng)C57BL小鼠，經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)炎出現(xiàn)率較高，脂肪酸Omega-3代替必需脂肪酸Omega-6可導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨纖維的退行性改變。

1.2 自發(fā)性模型

許多動(dòng)物可以因自身關(guān)節(jié)軟骨退變形成骨關(guān)節(jié)炎，這種骨關(guān)節(jié)炎甚至不需任何干預(yù)。由Silberberg等[3]經(jīng)過(guò)觀察發(fā)現(xiàn)C57黑鼠和STRPort小鼠具有可以自我發(fā)生骨性關(guān)節(jié)炎的特征，主要累及脛內(nèi)側(cè)軟骨，雄性STRPort小鼠病變較重，發(fā)生率較高[4]。激素水平影響可以產(chǎn)生自發(fā)性模型，研究發(fā)現(xiàn)性激素可以干預(yù)雌性STRPort小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1與白介素-4表達(dá)，此效應(yīng)可以保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨，降低關(guān)節(jié)軟骨炎的發(fā)生率[5]。另外，Yamamoto等[6]通過(guò)對(duì)栗鼠行走方式進(jìn)行干預(yù)，使其以特殊的步態(tài)行走，發(fā)現(xiàn)當(dāng)栗鼠以這種步態(tài)行走一段時(shí)間后，栗鼠踝關(guān)節(jié)軟骨的邊緣會(huì)出現(xiàn)不同程度的增生、關(guān)節(jié)面龜裂等形態(tài)變化，光鏡觀察可以發(fā)現(xiàn)，栗鼠關(guān)節(jié)產(chǎn)生類(lèi)似于人類(lèi)骨關(guān)節(jié)炎病理變化的改變，如軟骨細(xì)胞數(shù)目減少、排列紊亂等。這些改變可以進(jìn)行類(lèi)似骨關(guān)節(jié)病遺傳學(xué)及關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞退行性改變方面的研究[7]。

1.3 基因技術(shù)模型

轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷創(chuàng)新，骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型可以通過(guò)基因技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)，目前主要是Col9a1和Col2a1基因部分縮短、缺失或者基因的突變、銅轉(zhuǎn)運(yùn)基因缺陷、Col11a1基因的1-bp處缺失、MMP-13基因的過(guò)度表達(dá)以及組織特異性BMP-1a型受體缺乏等，以及下列基因的敲除，這些基因包括ADAM-15基因、MMP-14基因、白介素-6基因、Mig-6基因、a-1整合素基因、纖維調(diào)節(jié)素和基膜聚糖基因雙鏈、纖維調(diào)節(jié)素和二聚糖基因單鏈或者雙鏈等。研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)控軟骨細(xì)胞凋亡的基因被剔除，軟骨細(xì)胞退變，破壞速度會(huì)加速[8]。Arita等[9]發(fā)現(xiàn)并制造轉(zhuǎn)基因小鼠模型，表達(dá)人突變Ⅱ型前膠原基因，電鏡下發(fā)現(xiàn)相比于正常組，軟骨示Ⅱ型膠原纖維的密度減少，此等變化與因該基因突變而造成的全身骨關(guān)節(jié)炎患者相似。endprint

雖然轉(zhuǎn)基因小鼠骨關(guān)節(jié)炎模型對(duì)于研究骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的特殊基因或蛋白質(zhì)的作用十分重要，然而骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制是基因的異常，并不能反映臨床上因勞累、環(huán)境因素等造成的關(guān)節(jié)炎，另外，進(jìn)行基因改造后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否具有其他可引起關(guān)節(jié)改變的病理變化尚不明確，因此轉(zhuǎn)基因能否作為評(píng)價(jià)骨關(guān)節(jié)炎治療方法的普通模型還存在爭(zhēng)議。

1.4 關(guān)節(jié)固定

如果將大鼠關(guān)節(jié)較長(zhǎng)時(shí)間固定，可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨的退變，從而產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎。如果固定于關(guān)節(jié)伸直位時(shí)施加壓力可以加大關(guān)節(jié)面壓力和磨損，從而促進(jìn)關(guān)節(jié)炎發(fā)生的進(jìn)程。另有學(xué)者通過(guò)采用過(guò)屈位和過(guò)伸位將模型進(jìn)行固定，發(fā)現(xiàn)兩者均能得到滿(mǎn)意的動(dòng)物模型，但過(guò)屈位造模方法優(yōu)于過(guò)伸位所造的模型[10]。

1.5 關(guān)節(jié)注射

盧鋒等[11]將白陶土的生理鹽水懸浮液和弗式佐劑注射液分別注射于大鼠后肢踝趾關(guān)節(jié)，用來(lái)觀察鹽酸氨基葡萄糖抑制骨關(guān)節(jié)炎的病變程度，結(jié)果顯示鹽酸氨基葡萄糖對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎存在保護(hù)作用，具有輔助性療效。Hagmann等[12]對(duì)雄性Wistar大鼠的膝關(guān)節(jié)注射碘乙酸鈉，建立膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎模型，該方法比較簡(jiǎn)便。

1.6 Hulth法造模

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，早期曾有關(guān)節(jié)內(nèi)手術(shù)方法，但關(guān)節(jié)內(nèi)手術(shù)方法容易導(dǎo)致創(chuàng)傷性滑膜炎對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，因此目前較為常用的手術(shù)方法為Hulth法，采用Hulth法制作鼠類(lèi)動(dòng)物模型，首先將膝關(guān)節(jié)的內(nèi)側(cè)副韌帶離斷，然后把內(nèi)側(cè)半月板和前后交叉韌帶依次切除，飼養(yǎng)8周后即可成功制作出所需要的動(dòng)物模型。例如有學(xué)者報(bào)道，將4～5個(gè)月齡大鼠以上述方法制得模型[13]。有學(xué)者[14]選擇豚鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行研究，方法主要是切斷豚鼠的臀大肌和深面臀小肌、臀中肌，來(lái)對(duì)髖關(guān)節(jié)的平衡維持能力、穩(wěn)定能力以及負(fù)重能力進(jìn)行干預(yù)性破壞。12周之后，研究人員發(fā)現(xiàn)其膝關(guān)節(jié)的軟骨面出現(xiàn)水平裂隙及軟骨剝脫等早期骨關(guān)節(jié)炎的典型表現(xiàn)，軟骨細(xì)胞形成灶巢樣增生、雙柱狀病理改變，可以見(jiàn)到新骨的形成。豚鼠關(guān)節(jié)軟骨表面在24周之后，可以觀察到破潰更加嚴(yán)重，呈絨毛樣外觀，裂隙加深，軟骨下骨常常呈象牙狀裸露。這種造模通常不會(huì)造成創(chuàng)傷性滑膜炎，因此可以作為骨關(guān)節(jié)炎早期病理變化的較好模型。

1.7 誘發(fā)性模型

寒冷刺激誘發(fā)模型、藥物誘發(fā)模型是誘發(fā)性模型的兩種主要類(lèi)型，其中藥物誘發(fā)模型主要的造模方式是藥物的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，常用的藥物主要有雌激素、蛋白水解酶、腎上腺皮質(zhì)激素、尿激酶、腫瘤壞死因子、白介素等，由于這些藥物影響了膝關(guān)節(jié)軟骨的代謝，直接對(duì)關(guān)節(jié)軟骨造成了破壞，因而誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎。

寒冷刺激可以誘發(fā)關(guān)節(jié)液成分的改變，進(jìn)一步改變滑膜通透性，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的內(nèi)環(huán)境造成破壞，可誘發(fā)關(guān)節(jié)炎。此外，寒冷刺激可以造成關(guān)節(jié)軟骨的直接損傷，研究發(fā)現(xiàn)，局部?jī)霪?個(gè)月后可發(fā)現(xiàn)誘發(fā)關(guān)節(jié)軟骨微小的損傷，12個(gè)月后可以觀察到關(guān)節(jié)更加顯著的損傷[15]，因此可以說(shuō)明，關(guān)節(jié)損傷后常在受傷的數(shù)月后或數(shù)年后發(fā)生關(guān)節(jié)疼痛，尤其是在冬季容易加重。林木南等[16]在研究中指出，寒冷刺激可以使細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞顯著簇集，可見(jiàn)細(xì)胞核縮、核溶、甚至細(xì)胞消失等現(xiàn)象，基質(zhì)染色不均、淡染，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)明顯疏松，膠原纖維顯著減少，新生毛細(xì)血管出現(xiàn)在軟骨中，軟骨退化現(xiàn)象十分顯著。

關(guān)節(jié)軟骨及其附近的內(nèi)環(huán)境十分脆弱，即使只是每日多次注射10%鹽水，就算是生理鹽水也可以誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎。因而得知，關(guān)節(jié)內(nèi)環(huán)境的改變影響了關(guān)節(jié)軟骨代謝，兩者關(guān)系十分密切，這種微創(chuàng)非特異性造模方法也可以作為較理想的造模方法用于研究藥物對(duì)膝關(guān)節(jié)病的治療。

1.8 其他方法造模

劉安軍等[17]根據(jù)長(zhǎng)期低溫環(huán)境可導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎的理論，采用冷水（溫度約為4℃）對(duì)小鼠冷凍刺激方式進(jìn)行膝關(guān)節(jié)造模。在造模后的第30天，觀察小鼠的膝關(guān)節(jié)的狀態(tài)并對(duì)其腫脹程度評(píng)分，提取膝關(guān)節(jié)軟骨組織作標(biāo)本，檢測(cè)其血清中透明質(zhì)酸水平以及腫瘤壞死因子含量。第30天時(shí)發(fā)現(xiàn)模型組小鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）遠(yuǎn)高于正常組，最高可達(dá)3.8，對(duì)模型小鼠進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，可見(jiàn)小鼠典型的骨關(guān)節(jié)炎病變，模型組血清中透明質(zhì)酸、腫瘤壞死因子-α的含量顯著升高，出現(xiàn)骨關(guān)節(jié)炎典型的病理改變，而且其血清中腫瘤壞死因子和透明質(zhì)酸的含量都可見(jiàn)明顯升高，說(shuō)明冷水刺激可導(dǎo)致小鼠骨關(guān)節(jié)炎，這種造模方法可作為具有地域特異性的骨關(guān)節(jié)炎模型。

有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，小鼠在行卵巢切除術(shù)后會(huì)出現(xiàn)明顯的關(guān)節(jié)軟骨退變，而且代表軟骨變化的CTX2Ⅱ和代表骨吸收的CTX2Ⅰ顯著升高[18]。這表明，關(guān)節(jié)變化與CTX2Ⅱ和CTX2Ⅰ的水平呈明顯相關(guān)性，這說(shuō)明了卵巢分泌的一類(lèi)激素可以對(duì)關(guān)節(jié)軟骨起到一定的保護(hù)作用，并且得出卵巢切除術(shù)可用于激素水平及年齡相關(guān)的骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。

2 兔模型的制作

2.1 Hulth法造模

兔模型也多以Hulth法為主，兔Hulth法[19]為兔經(jīng)典手術(shù)干預(yù)造模方法，其方法大致為：以耳緣靜脈麻醉法麻醉實(shí)驗(yàn)兔，實(shí)驗(yàn)組是將兔的膝關(guān)節(jié)皮下組織切開(kāi)，將內(nèi)側(cè)副韌帶、前后交叉韌帶切斷，把內(nèi)側(cè)半月板一同完整切除，術(shù)后常規(guī)處理，固定但不制動(dòng)傷肢，1周后每天驅(qū)趕兔子行走2次，共30 min，連續(xù)4周。當(dāng)實(shí)驗(yàn)兔因手術(shù)導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)正常力線(xiàn)破壞時(shí)，關(guān)節(jié)負(fù)重面減少，局部受力更加集中，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨磨損程度增加，加重了其退行性變的速度，促使關(guān)節(jié)軟骨發(fā)生退行性改變。3個(gè)月后對(duì)實(shí)驗(yàn)兔受損關(guān)節(jié)的觀察顯示，軟骨出現(xiàn)裂隙、破壞[20]。

對(duì)實(shí)驗(yàn)兔采用Hulth造模法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，骨關(guān)節(jié)常常會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似骨關(guān)節(jié)炎中晚期的改變，病變較重，因此學(xué)者往往對(duì)其進(jìn)行改良，例如李炳輝等[21]應(yīng)用改良Hulth法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)造模，其主要步驟為將實(shí)驗(yàn)兔下肢內(nèi)側(cè)副韌帶、內(nèi)側(cè)半月板以及前交叉韌帶切斷，在Hulth法操作中保留后交叉韌帶，自術(shù)后1周每天驅(qū)趕實(shí)驗(yàn)兔行走30 min，并持續(xù)16周。16周后可同樣發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)兔的膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)間隙不同程度的變窄，關(guān)節(jié)面明顯不平，邊緣骨贅形成，細(xì)胞檢測(cè)可見(jiàn)軟骨胞膜破損，細(xì)胞核固縮。相對(duì)于傳統(tǒng)Hulth法，改良后創(chuàng)傷較小，操作簡(jiǎn)單，一定程度上維持了膝關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性，更有利于造模成功。endprint

2.2 其他造模方法

除了Hulth法之外，李釗等[22]使用小針刀在20只實(shí)驗(yàn)大兔脛骨平臺(tái)、雙側(cè)股骨髁軟骨表面上刻痕，每一側(cè)刻痕均為4～5道，刻痕不超過(guò)軟骨層，不能損傷半月板，術(shù)后第2天開(kāi)始每天驅(qū)趕動(dòng)物活動(dòng)半小時(shí)。由于小針刀閉合刻痕對(duì)關(guān)節(jié)滑膜影響小，故該方法不會(huì)出現(xiàn)滑膜炎等。該方法5周后發(fā)現(xiàn)造模組關(guān)節(jié)軟骨具有典型的骨關(guān)節(jié)炎病理改變。

Okazaki等[23]通過(guò)將實(shí)驗(yàn)兔下肢關(guān)節(jié)伸直位制動(dòng)持續(xù)14 d后，兔關(guān)節(jié)的軟骨可以見(jiàn)到早期退變改變，制動(dòng)28 d后可見(jiàn)到關(guān)節(jié)軟骨退變程度達(dá)中度，42 d后則可達(dá)重度退變，同時(shí)發(fā)現(xiàn)p53 mRNA參與該過(guò)程的發(fā)生。一份實(shí)驗(yàn)[24]以成年新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，將其左后肢膝關(guān)節(jié)固定于伸直位，造模6周后對(duì)比其左右后肢關(guān)節(jié)軟骨及滑膜發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞在制動(dòng)后1周即開(kāi)始發(fā)生凋亡，6周時(shí)無(wú)論從微觀或宏觀角度，實(shí)驗(yàn)兔手術(shù)關(guān)節(jié)均符合呈典型的骨關(guān)節(jié)炎病理改變特征。

3 其他動(dòng)物模型的制作

相比于上述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，因?qū)嶒?yàn)動(dòng)物倫理要求，其他模型在實(shí)踐中應(yīng)用相對(duì)較少，僅僅在某些特殊方法時(shí)才考慮應(yīng)用。有學(xué)者嘗試以關(guān)節(jié)鏡切除豬雙膝外側(cè)部分半月板，術(shù)后12周時(shí)大體觀察結(jié)果表現(xiàn)為局限性軟骨表面纖維化，伴股骨髁間切跡骨贅形成；組織學(xué)檢測(cè)表現(xiàn)為軟骨細(xì)胞數(shù)量和蛋白多糖含量減少、成簇排列細(xì)胞數(shù)量增加，說(shuō)明已產(chǎn)生退行性變；核磁檢查表現(xiàn)為軟骨厚度變薄、軟骨信號(hào)強(qiáng)度改變[25]。因此以關(guān)節(jié)鏡行半月板部分切除能有效建立豬雙膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，但因關(guān)節(jié)鏡設(shè)備限制，關(guān)節(jié)鏡造模僅在大型動(dòng)物中可以應(yīng)用。

易彩霞[26]嘗試以豬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行造模，其方法為取外側(cè)入路進(jìn)入豬左膝關(guān)節(jié)腔，將其前交叉韌帶切斷后并完全將外側(cè)半月板切除。右側(cè)膝關(guān)節(jié)不予處理作為空白對(duì)照側(cè)。以手術(shù)方式建立以豬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的活體骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，觀察關(guān)節(jié)軟骨退變的不同階段和T1ρ和T2mapping成像變化。然后分析膠原含量（軟骨番紅O染色和Van Gieson染色后所測(cè)OD值）、T2值、T1ρ值蛋白多糖（PG）含量，并分析它們之間的相關(guān)關(guān)系。此方法由于幾乎完全不同于以前的任何研究方法，與臨床的實(shí)際情況更加接近，其結(jié)論為：退變的軟骨T2值、T1ρ值的改變與退變軟骨中蛋白多糖含量和膠原含量的改變相關(guān)。在檢測(cè)蛋白多糖含量時(shí)，與T2mapping比較，T1ρ成像更為敏感；而在檢測(cè)膠原含量的過(guò)程中，T2mapping更敏感。

因?qū)嶒?yàn)兔關(guān)節(jié)內(nèi)劃痕可造成滑膜損傷，因此為了避免這一點(diǎn)，Marijnissen等[27]提出一種新的關(guān)節(jié)刻痕造模方法，以狗為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在不損傷軟骨下骨的前提下，在狗的膝關(guān)節(jié)軟骨上用圓絞刀人為造成軟骨劃痕，術(shù)后將對(duì)側(cè)肢體限制活動(dòng)，并以術(shù)肢負(fù)重活動(dòng)，每周3 d，每天4 h，持續(xù)20周。造模后發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)軟骨局部可出現(xiàn)明顯變性的軟骨細(xì)胞、基質(zhì)中異染物質(zhì)消失等類(lèi)似人類(lèi)臨床中膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病理改變，且關(guān)節(jié)炎癥相對(duì)輕微，因此這種方法可作為一個(gè)觀察骨關(guān)節(jié)炎早期表現(xiàn)及治療效果的理想模型。另外，劉媛等[28]以雞為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)其膝關(guān)節(jié)進(jìn)行冰水浴，每天冰浴2 h，共進(jìn)行30 d，然后利用電鏡掃描進(jìn)行觀察，可以發(fā)現(xiàn)軟骨表面出現(xiàn)波浪狀低平的病理性結(jié)構(gòu)，拱形結(jié)構(gòu)明顯消失，表面部分出現(xiàn)斷裂，出現(xiàn)軟骨細(xì)胞及膠原纖維裸露等退行性改變。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳臨新.膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的診療[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2009， 12（2B）：297-298.

[2] Silberberg M，Silberberg R. Effects of a high fat diet on the joints of aging mice [J]. AMA Arch Pathol，1950，50（6）：828-846.

[3] Silberberg M，Silberberg R. Age changes of bones and joints various strains of mice [J]. American Journal of Anatomy，1941，68（1）：69-95.

[4] Prieto-Alhambra D，Judge A，Javaid MK，et al. Incidence and risk factors for clinically diagnosed knee，hip and hand osteoarthritis：influences of age，gender and osteoarthritis affecting other joints [J]. Ann Rheum Dis，2014， 73（9）：1659-1664.

[5] 陳福靈，張健.膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎治療進(jìn)展[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（12）：1596-1598.

[6] Yamamoto K，Shushed T，Mazurka T，et al. Morphs logical studies on the ageing and osteoarthritis of the auricular cartilage in C57 black mice [J]. J Orton Surge（Hong Kong），2005，13（1）：8-18.

[7] Yamamoto H，Iwase N，Kohno M. Histopathological characterization of spontaneously developing osteoarthropathy in the BCBC/Y mouse established newly from B6C3F1 mice [J]. Exp Toxicol Pathol，1999，51（1）：15-20.

[8] 章權(quán)，章建華.骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡及其調(diào)控基因的研究進(jìn)展[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，23（3）：242-244.endprint

[9] Arita M，Li SW，Kopen G，et al. Fertala. Skeletal abnormalities and ultrastructural changes of cartilage in transgenic mice expressing a collagen Ⅱ gene（COL2A1）with a Cys for Arg-α1-519 substitution [J]. Osteoarthritis Cartilage，2002，10（10）：808-815.

[10] 張引紅，李美寧，王春芳，等.補(bǔ)骨脂素對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的免疫調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2017， 25（2）：207-210.

[11] 盧鋒，郭紅衛(wèi).鹽酸氨基葡萄糖對(duì)骨關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制的初步探討[J].衛(wèi)生研究，2003，32（6）：594-597.

[12] Hagmann S，Moradi B，F(xiàn)rank S，et al. Different culture media affect growth characteristics，surface marker distribution and chondrogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells [J]. BMC Musculoskelet Disord，2013，14：223.

[13] 余闐，彭力平，馬篤軍，等.牛膝總皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)兔膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜組織的影響[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2017， 25（6）：1-5.

[14] 閆金銀.甲狀旁腺激素1-34對(duì)DH豚鼠原發(fā)性膝骨性關(guān)節(jié)炎的潛在保護(hù)作用及其作用機(jī)制[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2016.

[15] 邢潤(rùn)麟，王培民，茆軍，等.基于thermoTRP介導(dǎo)冷痛敏機(jī)制對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎虛寒冷痛的研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，32（4）：347-348.

[16] 林木南，李西海，林艷紅，等.溫?zé)崾杳懿ú煌ǘ螌?duì)實(shí)驗(yàn)性膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨病理變化的影響[J].康復(fù)學(xué)報(bào)，2016，26（1）：38-42.

[17] 劉安軍，陳宏碩，張國(guó)蓉.小鼠骨性關(guān)節(jié)炎的模型制備及評(píng)價(jià)[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（8）：1045-1053.

[18] Amiot A，Mansour H，Baumgaertner I，et al. The detection of the methylated Wif-1 gene is more accurate than a fecal occult blood test for colorectal cancer screening [J]. PLoS One，2014，9（7）：e99233.

[19] Weimer A，Madry H，Venkatesan JK，et al. Benefits of recombinant adeno-associated virus（rAAV）-mediated insulinlike growth factor Ⅰ（IGF-Ⅰ）overexpression for the long-term reconstruction of human osteoarthritic cartilage by modulation of the IGF-Ⅰ axis [J]. Mol Med，2012，18（1）：346-358.

[20] 袁鈺祺，張海寧，孔霞，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中環(huán)氧化酶2及聚蛋白多糖酶1沉默與胰島素樣生長(zhǎng)因子1過(guò)表達(dá)[J].中國(guó)組織工程研究，2015，19（10）：1488-1494.

[21] 李炳輝，牛東生，孫璽淳，等.直立負(fù)重法與Hulth法建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型的對(duì)比研究[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35（3）：256-257.

[22] 李釗，節(jié)曉光，蘇紅梅，等.閉合關(guān)節(jié)刻痕法骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的建立[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29（6）：63-64.

[23] Okazaki R，Sakai A，Ootsuyama A，et al. Apoptosis and p53 expression in chondrocytes relate to degeneration in articular cartilage of immobilized knee joints [J]. J Rheumatol，2003，30（3）：559-566.

[24] 程紅，楊敏.電針調(diào)控新西蘭兔骨關(guān)節(jié)炎性疼痛及對(duì)脊髓IL-17、IL-17R表達(dá)的影響[J].重慶醫(yī)學(xué)，2017，46（17）：2326-2327.

[25] 李忠，楊柳，戴剛，等.關(guān)節(jié)鏡下半月板部分切除制備骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型[J].第三軍醫(yī)大學(xué)報(bào)，2007，5（29）：919-920.

[26] 易彩霞.硫酸軟骨素、前列腺素E2對(duì)豬軟骨細(xì)胞增殖分化以及胞內(nèi)鈣響應(yīng)影響研究[D].重慶：重慶大學(xué)，2014.

[27] Marijnissen AC，van Roermund PM，Verzijl N，et al. Steady progression of osteoarthritic features in the canine groove model [J]. Osteoarthritis Cartilage，2002，10（4）：282-289.

[28] 劉媛，趙駐軍，王紅芹，等.寒冷刺激雞膝關(guān)節(jié)軟骨顯微結(jié)構(gòu)變化觀察[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，31（2）：93-95.

（收稿日期：2017-06-21 本文編輯：張瑜杰）endprint