非小細(xì)胞肺癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增情況及其與臨床病理特征的關(guān)系

蔡靜靜，苗健龍，王雨亮，劉瑞娟

(1 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧 272100；2 濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院)

非小細(xì)胞肺癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增情況及其與臨床病理特征的關(guān)系

蔡靜靜1,2，苗健龍1，王雨亮1,2，劉瑞娟1

(1 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧 272100；2 濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院)

目的觀察成纖維生長因子受體1(FGFR1)基因在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中的擴(kuò)增情況，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系。方法147例NSCLC患者，經(jīng)無痛纖維支氣管鏡檢查或經(jīng)皮肺穿刺檢查時取得腫瘤組織。采用熒光原位雜交(FISH)技術(shù)觀察組織中FGFR1基因擴(kuò)增情況，采用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法分析FGFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1基因擴(kuò)增11例。44例鱗癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增7例，74例腺癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增4例，鱗癌與腺癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增情況比較P<0.05。73例有吸煙史患者組織中FGFR1基因擴(kuò)增11例，74例無吸煙史患者組織中FGFR1基因擴(kuò)增0例，兩者相比P<0.05。結(jié)論FGFR1基因在NSCLC組織中存在擴(kuò)增，且有吸煙史較無吸煙史患者擴(kuò)增比例高，鱗癌較腺癌患者擴(kuò)增比例高。

肺腫瘤；非小細(xì)胞肺癌；成纖維生長因子受體1；基因擴(kuò)增

肺癌是世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡的主要原因。根據(jù)組織學(xué)特征，肺癌分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)[1]。腺癌和鱗狀細(xì)胞癌是NSCLC最常見的組織學(xué)亞型，約占50%和30%[2]。成纖維細(xì)胞生長因子受體1(FGFR1)位于染色體8p12，是人類癌癥中最常見的擴(kuò)增基因之一。FGFR1基因擴(kuò)增是腫瘤最常見的遺傳學(xué)改變之一，可見于胃癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌[3,4]，但其在NSCLC中的擴(kuò)增情況報道較少。因此，本研究觀察了FGFR1基因在NSCLC組織中的擴(kuò)增情況，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2017年7月于濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院治療的NSCLC患者147例，其中男109例、女38例，年齡(66.48±1.16)歲，有吸煙史73例，腫瘤直徑≤3 cm者55例，遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移98例，TNM分期(根據(jù)第八版肺癌分期)Ⅰ+Ⅱ期54例、Ⅲ+Ⅳ期93例，病理類型腺癌74例、鱗癌44例、其他29例。所有入選患者符合以下納入及剔除標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)無痛纖維支氣管鏡或經(jīng)皮肺穿刺檢查，取得病理組織，由2名病理科醫(yī)師使用蘇木精及伊紅染色證實了NSCLC的診斷；患者行FGFR1基因檢測前均未行放療及化療；病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者不同意行FGFR1基因檢測；組織標(biāo)本少，無法制作切片。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者知情同意。

1.2 FGFR1基因擴(kuò)增觀察 采用免疫熒光原位雜交技術(shù)(FISH)。使用市售的FISH探針(FGFR1/CEN8；ZytoVision，Bremerhaven，Germany)。在該探針中，用綠色熒光染料和具有橙色熒光染料的著絲粒參考探針(CEN8)標(biāo)記FGFR1基因座(FGFR1)。在雜交之前，將標(biāo)本切成5 mm切片，脫蠟并用商業(yè)預(yù)處理試劑盒Vysis(Abbott Molecular，Des Plaines，IL，USA)進(jìn)行預(yù)處理。在37 ℃的加濕室中進(jìn)行過夜雜交。然后用Vysis洗滌溶液洗滌載玻片并用Vysis DAPI(Abbott Molecular)進(jìn)行復(fù)染。使用裝有適當(dāng)濾器的熒光顯微鏡觀察FGFR1基因和CEN8信號數(shù)。在顯微鏡下對50個腫瘤細(xì)胞核進(jìn)行FGFR1基因和CEN8信號的計數(shù)，計算FGFR1與CEN8的比例。所有切片的染色結(jié)果均由2名病理科醫(yī)師在雙盲原則下分別做出判斷。FGFR1基因擴(kuò)增判定標(biāo)準(zhǔn)[5]：①FGFR1信號數(shù)/CEN8信號數(shù)≥2；②每個腫瘤細(xì)胞核的FGFR1信號的平均數(shù)≥6；③腫瘤細(xì)胞中FGFR1信號數(shù)≥15個或腫瘤細(xì)胞中基因簇的百分比≥10%；④≥50%的腫瘤細(xì)胞中FGFR1信號數(shù)≥5。其中,①②③表示FGFR1高水平基因擴(kuò)增，④表示FGFR1低水平基因擴(kuò)增。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1基因擴(kuò)增11例(8.8%)，其中鱗癌7例(15.9%)、腺癌4例(5.4%)。FGFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系見表1。

表1 FGFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系(例)

注：*采用Fisher′s確切概率法。

3 討論

表皮生長因子受體(EGFR)、棘皮動物微管樣蛋白4與間變性淋巴瘤激酶融合基因(EML4-ALK)、c-ros原癌基因1酪氨酸激酶(ROS1)以及RET激酶是近年來在肺癌中鑒定出的幾種致癌驅(qū)動突變基因。針對EGFR和ALK突變基因的分子靶向治療是成功的，但是攜帶EGFR突變或ALK融合基因的患者只占腺癌患者的一小部分，且EGFR突變集中在女性非吸煙患者中。目前對于肺鱗癌分子特征的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于肺腺癌，因此發(fā)現(xiàn)NSCLC中的新型致癌驅(qū)動因素對于改善目前的治療是至關(guān)重要的。FGFR酪氨酸激酶家族由FGFR1、2、3、4組成，對控制胚胎發(fā)育及細(xì)胞增殖、分化和遷移都至關(guān)重要[3]。FGFR酪氨酸激酶家族在腫瘤發(fā)病過程中也具有重要作用，可通過基因擴(kuò)增、點突變或易位導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。國內(nèi)外研究[5～10]結(jié)果顯示，NSCLC患者FGFR1擴(kuò)增率為6.5%～12.5%，鱗癌為10.5%～21.8%，腺癌為0～7%。本研究結(jié)果表明，147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1擴(kuò)增率為8.8%，鱗癌為15.9%，腺癌為5.4%，這與大多數(shù)研究結(jié)果是一致的。

Seo等[6]研究指出FGFR1基因擴(kuò)增主要見于吸煙者，肺鱗癌患者的FGFR1基因擴(kuò)增率顯著高于肺腺癌；Tran等[9]的研究表明，F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增與肺癌病理類型顯著相關(guān)，與吸煙、性別、腫瘤分期等臨床特征無關(guān)；另外，Kim等[11]也指出吸煙患者的FGFR1擴(kuò)增率(28.9%)明顯高于已戒煙者(2.5%)和從不吸煙的患者(0)，F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增與性別、腫瘤分期、血管浸潤、胸膜受侵等無明顯相關(guān)性。本研究結(jié)果表明，F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者吸煙狀態(tài)有關(guān)，并且鱗癌患者FGFR1基因擴(kuò)增率顯著高于腺癌。但Kohler等[7]研究指出，F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增在肺鱗癌患者中明顯高于肺腺癌，但是無統(tǒng)計學(xué)差異。不同結(jié)果產(chǎn)生的原因可能與研究的病例、FGFR1基因擴(kuò)增的判定標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)，但是吸煙是否可以導(dǎo)致FGFR1改變，吸煙和FGFR1基因改變相互獨(dú)立作用或兩者共同作用導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，需要進(jìn)一步研究。

目前研究表明，F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增的患者傾向于不良的生存預(yù)后。Miao等[12]結(jié)合中外研究指出，有無FGFR1基因擴(kuò)增的患者總生存期(OS)分別為43.9～70.8、42.4～115.0個月，無病生存期(DFS)分別為22.5～58.5、52.4～94.6個月。Seo等[6]研究表明，在單變量分析中，肺鱗癌患者的FGFR1擴(kuò)增與較短的OS和較短的DFS相關(guān)，提示FGFR1擴(kuò)增與預(yù)后不良相關(guān)。Tran等[9]認(rèn)為，F(xiàn)GFR1基因拷貝數(shù)升高是NSCLC有益的預(yù)后因子。Heist等[13]認(rèn)為，F(xiàn)GFR1與生存預(yù)后沒有關(guān)系。不同的研究得出不同的結(jié)論，分析原因可能是：參與研究的樣本太少；研究中包括不同疾病階段的患者；不同的標(biāo)準(zhǔn)用于確定FGFR1的擴(kuò)增；研究中入選病例觀察時間不同。因此，大的多中心研究將有助于闡明FGFR1擴(kuò)增在NSCLC預(yù)后中的意義。

綜上可見，F(xiàn)GFR1基因在NSCLC組織中存在擴(kuò)增，且有吸煙史較無吸煙史患者擴(kuò)增比例高，鱗癌較腺癌患者擴(kuò)增比例高。

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山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(2013WS0056)。

劉瑞娟(E-mail： mqb_6@163.com)

2017-04-16)