蔡靜靜,苗健龍,王雨亮,劉瑞娟
(1 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院,山東濟(jì)寧 272100;2 濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院)
非小細(xì)胞肺癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增情況及其與臨床病理特征的關(guān)系
蔡靜靜1,2,苗健龍1,王雨亮1,2,劉瑞娟1
(1 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院,山東濟(jì)寧 272100;2 濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院)
目的觀察成纖維生長因子受體1(FGFR1)基因在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中的擴(kuò)增情況,并探討其與臨床病理特征的關(guān)系。方法147例NSCLC患者,經(jīng)無痛纖維支氣管鏡檢查或經(jīng)皮肺穿刺檢查時取得腫瘤組織。采用熒光原位雜交(FISH)技術(shù)觀察組織中FGFR1基因擴(kuò)增情況,采用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法分析FGFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1基因擴(kuò)增11例。44例鱗癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增7例,74例腺癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增4例,鱗癌與腺癌組織中FGFR1基因擴(kuò)增情況比較P<0.05。73例有吸煙史患者組織中FGFR1基因擴(kuò)增11例,74例無吸煙史患者組織中FGFR1基因擴(kuò)增0例,兩者相比P<0.05。結(jié)論FGFR1基因在NSCLC組織中存在擴(kuò)增,且有吸煙史較無吸煙史患者擴(kuò)增比例高,鱗癌較腺癌患者擴(kuò)增比例高。
肺腫瘤;非小細(xì)胞肺癌;成纖維生長因子受體1;基因擴(kuò)增
肺癌是世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡的主要原因。根據(jù)組織學(xué)特征,肺癌分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)[1]。腺癌和鱗狀細(xì)胞癌是NSCLC最常見的組織學(xué)亞型,約占50%和30%[2]。成纖維細(xì)胞生長因子受體1(FGFR1)位于染色體8p12,是人類癌癥中最常見的擴(kuò)增基因之一。FGFR1基因擴(kuò)增是腫瘤最常見的遺傳學(xué)改變之一,可見于胃癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌[3,4],但其在NSCLC中的擴(kuò)增情況報道較少。因此,本研究觀察了FGFR1基因在NSCLC組織中的擴(kuò)增情況,并探討其與臨床病理特征的關(guān)系。
1.1 臨床資料 選擇2014年1月~2017年7月于濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院治療的NSCLC患者147例,其中男109例、女38例,年齡(66.48±1.16)歲,有吸煙史73例,腫瘤直徑≤3 cm者55例,遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移98例,TNM分期(根據(jù)第八版肺癌分期)Ⅰ+Ⅱ期54例、Ⅲ+Ⅳ期93例,病理類型腺癌74例、鱗癌44例、其他29例。所有入選患者符合以下納入及剔除標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)無痛纖維支氣管鏡或經(jīng)皮肺穿刺檢查,取得病理組織,由2名病理科醫(yī)師使用蘇木精及伊紅染色證實了NSCLC的診斷;患者行FGFR1基因檢測前均未行放療及化療;病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):患者不同意行FGFR1基因檢測;組織標(biāo)本少,無法制作切片。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),所有患者知情同意。
1.2 FGFR1基因擴(kuò)增觀察 采用免疫熒光原位雜交技術(shù)(FISH)。使用市售的FISH探針(FGFR1/CEN8;ZytoVision,Bremerhaven,Germany)。在該探針中,用綠色熒光染料和具有橙色熒光染料的著絲粒參考探針(CEN8)標(biāo)記FGFR1基因座(FGFR1)。在雜交之前,將標(biāo)本切成5 mm切片,脫蠟并用商業(yè)預(yù)處理試劑盒Vysis(Abbott Molecular,Des Plaines,IL,USA)進(jìn)行預(yù)處理。在37 ℃的加濕室中進(jìn)行過夜雜交。然后用Vysis洗滌溶液洗滌載玻片并用Vysis DAPI(Abbott Molecular)進(jìn)行復(fù)染。使用裝有適當(dāng)濾器的熒光顯微鏡觀察FGFR1基因和CEN8信號數(shù)。在顯微鏡下對50個腫瘤細(xì)胞核進(jìn)行FGFR1基因和CEN8信號的計數(shù),計算FGFR1與CEN8的比例。所有切片的染色結(jié)果均由2名病理科醫(yī)師在雙盲原則下分別做出判斷。FGFR1基因擴(kuò)增判定標(biāo)準(zhǔn)[5]:①FGFR1信號數(shù)/CEN8信號數(shù)≥2;②每個腫瘤細(xì)胞核的FGFR1信號的平均數(shù)≥6;③腫瘤細(xì)胞中FGFR1信號數(shù)≥15個或腫瘤細(xì)胞中基因簇的百分比≥10%;④≥50%的腫瘤細(xì)胞中FGFR1信號數(shù)≥5。其中,①②③表示FGFR1高水平基因擴(kuò)增,④表示FGFR1低水平基因擴(kuò)增。
1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1基因擴(kuò)增11例(8.8%),其中鱗癌7例(15.9%)、腺癌4例(5.4%)。FGFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系見表1。
表1 FGFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系(例)
注:*采用Fisher′s確切概率法。
表皮生長因子受體(EGFR)、棘皮動物微管樣蛋白4與間變性淋巴瘤激酶融合基因(EML4-ALK)、c-ros原癌基因1酪氨酸激酶(ROS1)以及RET激酶是近年來在肺癌中鑒定出的幾種致癌驅(qū)動突變基因。針對EGFR和ALK突變基因的分子靶向治療是成功的,但是攜帶EGFR突變或ALK融合基因的患者只占腺癌患者的一小部分,且EGFR突變集中在女性非吸煙患者中。目前對于肺鱗癌分子特征的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于肺腺癌,因此發(fā)現(xiàn)NSCLC中的新型致癌驅(qū)動因素對于改善目前的治療是至關(guān)重要的。FGFR酪氨酸激酶家族由FGFR1、2、3、4組成,對控制胚胎發(fā)育及細(xì)胞增殖、分化和遷移都至關(guān)重要[3]。FGFR酪氨酸激酶家族在腫瘤發(fā)病過程中也具有重要作用,可通過基因擴(kuò)增、點突變或易位導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。國內(nèi)外研究[5~10]結(jié)果顯示,NSCLC患者FGFR1擴(kuò)增率為6.5%~12.5%,鱗癌為10.5%~21.8%,腺癌為0~7%。本研究結(jié)果表明,147例NSCLC腫瘤組織中FGFR1擴(kuò)增率為8.8%,鱗癌為15.9%,腺癌為5.4%,這與大多數(shù)研究結(jié)果是一致的。
Seo等[6]研究指出FGFR1基因擴(kuò)增主要見于吸煙者,肺鱗癌患者的FGFR1基因擴(kuò)增率顯著高于肺腺癌;Tran等[9]的研究表明,F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增與肺癌病理類型顯著相關(guān),與吸煙、性別、腫瘤分期等臨床特征無關(guān);另外,Kim等[11]也指出吸煙患者的FGFR1擴(kuò)增率(28.9%)明顯高于已戒煙者(2.5%)和從不吸煙的患者(0),F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增與性別、腫瘤分期、血管浸潤、胸膜受侵等無明顯相關(guān)性。本研究結(jié)果表明,F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增與NSCLC患者吸煙狀態(tài)有關(guān),并且鱗癌患者FGFR1基因擴(kuò)增率顯著高于腺癌。但Kohler等[7]研究指出,F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增在肺鱗癌患者中明顯高于肺腺癌,但是無統(tǒng)計學(xué)差異。不同結(jié)果產(chǎn)生的原因可能與研究的病例、FGFR1基因擴(kuò)增的判定標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān),但是吸煙是否可以導(dǎo)致FGFR1改變,吸煙和FGFR1基因改變相互獨(dú)立作用或兩者共同作用導(dǎo)致腫瘤發(fā)生,需要進(jìn)一步研究。
目前研究表明,F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增的患者傾向于不良的生存預(yù)后。Miao等[12]結(jié)合中外研究指出,有無FGFR1基因擴(kuò)增的患者總生存期(OS)分別為43.9~70.8、42.4~115.0個月,無病生存期(DFS)分別為22.5~58.5、52.4~94.6個月。Seo等[6]研究表明,在單變量分析中,肺鱗癌患者的FGFR1擴(kuò)增與較短的OS和較短的DFS相關(guān),提示FGFR1擴(kuò)增與預(yù)后不良相關(guān)。Tran等[9]認(rèn)為,F(xiàn)GFR1基因拷貝數(shù)升高是NSCLC有益的預(yù)后因子。Heist等[13]認(rèn)為,F(xiàn)GFR1與生存預(yù)后沒有關(guān)系。不同的研究得出不同的結(jié)論,分析原因可能是:參與研究的樣本太少;研究中包括不同疾病階段的患者;不同的標(biāo)準(zhǔn)用于確定FGFR1的擴(kuò)增;研究中入選病例觀察時間不同。因此,大的多中心研究將有助于闡明FGFR1擴(kuò)增在NSCLC預(yù)后中的意義。
綜上可見,F(xiàn)GFR1基因在NSCLC組織中存在擴(kuò)增,且有吸煙史較無吸煙史患者擴(kuò)增比例高,鱗癌較腺癌患者擴(kuò)增比例高。
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山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(2013WS0056)。
劉瑞娟(E-mail: mqb_6@163.com)
2017-04-16)