流式細(xì)胞儀檢測(cè)惡性淋巴瘤患者外周血T細(xì)胞亞群的臨床研究

王景勝 劉正君 陳 楠 李 丹 高會(huì)廣

流式細(xì)胞儀檢測(cè)惡性淋巴瘤患者外周血T細(xì)胞亞群的臨床研究

王景勝 劉正君 陳 楠 李 丹 高會(huì)廣

目的探討流式細(xì)胞儀檢測(cè)惡性淋巴瘤患者外周血T細(xì)胞亞群的效果及其與臨床病理、腫瘤類型的關(guān)系。方法選取我院于2014年8月—2016年9月收治的98例惡性淋巴瘤患者為研究組，同期選取98例健康體檢者為對(duì)照組。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組外周血T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)并進(jìn)行比較。結(jié)果研究組CD3+、CD4+/CD8+水平分別為(55.63±11.25)，(1.32±0.62)，顯著低于對(duì)照組的(68.96±12.63)，(1.59±0.59)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；研究組CD4+、CD8+水平(33.67±8.14)，(26.02±4.67)與對(duì)照組的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平分別為(54.63±11.36)，(1.22±0.65)和(55.52±12.02)，(1.34±0.71)，顯著低于對(duì)照組的(68.96±12.63)，(1.59±0.59)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD4+、CD8+水平分別為(33.78±8.23)，(25.74±4.88)和(33.62±8.74)，(26.32±4.85)與對(duì)照組的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期惡性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平分別為(52.66±12.47)，(28.25±6.32)，(1.30±0.62)明顯低于對(duì)照組的(68.96±12.63)，(34.12±8.33)，(1.59±0.59)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Ⅰ～Ⅱ期惡性淋巴瘤患者CD3+水平為(58.63±11.85)，顯著低于對(duì)照組的(68.96±12.63)，而CD8+水平為(29.63±3.57)，顯著高于對(duì)照組的(25.67±4.53)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血T細(xì)胞亞群可以作為診斷惡性淋巴瘤患者的病情、分期以及免疫狀態(tài)的重要手段，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

流式細(xì)胞儀；惡性淋巴瘤；外周血T細(xì)胞亞群

惡性淋巴瘤是臨床比較常見的一種惡性腫瘤，原發(fā)于淋巴結(jié)或淋巴組織，具有較高的發(fā)病率[1]?；颊吲R床表現(xiàn)以淋巴結(jié)無痛性、進(jìn)行性腫大、發(fā)熱、乏力、盜汗、貧血等為主，嚴(yán)重危害人類健康[2]。臨床發(fā)現(xiàn)，大部分惡性淋巴瘤患者伴有機(jī)體免疫機(jī)能紊亂和下降，且在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用[3]。本研究采用流式細(xì)胞儀對(duì)不同類型、臨床分期的惡性淋巴瘤患者及健康體檢者的外周血T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)和比較，旨在探討流式細(xì)胞儀檢測(cè)惡性淋巴瘤患者外周血T細(xì)胞亞群的效果及T細(xì)胞亞群與本病的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，為了臨床更好的診治惡性淋巴瘤提供依據(jù)[4]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院于2014年8月—2016年9月收治的98例惡性淋巴瘤患者為研究組，其中男56例，女42例；年齡42～69歲，平均年齡(55.63±3.74)歲；腫瘤類型：霍奇金淋巴瘤18例，非霍奇金淋巴瘤80例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期48例，Ⅲ～Ⅳ期50例。選取98例同時(shí)期健康體檢者為對(duì)照組，其中男58例，女40例；年齡40～66歲，平均年齡(55.42±3.56)歲。研究組患者性別、年齡等一般資料與對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可進(jìn)行比較研究。

1.2 方法

采用美國BD公司生產(chǎn)的BD FACSCanto II流式細(xì)胞儀對(duì)CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平進(jìn)行測(cè)定。抽取兩組2 mL靜脈血，使用乙二胺四乙酸二鈉進(jìn)行抗凝。各試管中加入20 μL的CD3+/CD4+/CD8+三色標(biāo)記的單克隆抗體及100 μL抗凝全血，混勻后室溫避光染色10 min～15 min。使用磷酸鹽緩沖液洗滌1遍，棄上清后加入磷酸鹽緩沖液重懸細(xì)胞0.5 mL。立即加入15 mL肝素抗凝，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。并分離出單個(gè)的核細(xì)胞，將核細(xì)胞進(jìn)行洗滌，將細(xì)胞數(shù)量控制在(1～3)×106。再取試管中加入100 μL的核細(xì)胞，依次在每支試管中加入20 μL熒光標(biāo)記過的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等。

1.2 觀察指標(biāo)

觀察比較研究組、對(duì)照組患者的惡性腫瘤類型，臨床分期對(duì)CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK細(xì)胞水平的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血T細(xì)胞亞群比較

研究組CD3+、CD4+/CD8+水平分別為(55.63±11.25)，(1.32±0.62)，均明顯低于對(duì)照組(68.96±12.63)，(1.59±0.59)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；研究組CD4+、CD8+水平(33.67±8.14)，(26.02±4.67)與對(duì)照組的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

2.2 霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者T細(xì)胞亞群與對(duì)照組比較

霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平分別為(54.63±11.36)，(1.22±0.65)和(55.52±12.02)，(1.34±0.71)，較對(duì)照組的(68.96±12.63)，(1.59±0.59)均明顯偏低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同類型惡性淋巴瘤患者CD4+、CD8+水平分別為(33.78±8.23)，(25.74±4.88)和(33.62±8.74)，(26.32±4.85)與對(duì)照組的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

表1 兩組外周血T細(xì)胞亞群比較

表2 霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者T細(xì)胞亞群與對(duì)照組比較

2.3 不同臨床分期惡性淋巴瘤患者T細(xì)胞亞群與對(duì)照組比較

Ⅲ～Ⅳ期惡性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平分別為(52.66±12.47)，(28.25±6.32)，(1.30±0.62)較對(duì)照組的(68.96±12.63)，(34.12±8.33)，(1.59±0.59)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Ⅰ～Ⅱ期惡性淋巴瘤患者CD3+水平為(58.63±11.85)較對(duì)照組的(68.96±12.63)明顯偏低，而CD8+水平為(29.63±3.57)較對(duì)照組的(25.67±4.53)明顯偏高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

GroupsCD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+Controlgroup(n=98)68.96±12.6334.12±8.3325.67±4.531.59±0.59Ⅰ～Ⅱperiod(n=48)58.63±11.8534.52±8.4429.63±3.571.49±0.66Ⅲ～Ⅳperiod(n=50)52.66±12.4728.25±6.3226.02±4.951.30±0.62F31.3310.8013.723.68P<0.01<0.01<0.010.027

3 討論

近年來，我國惡性淋巴瘤的發(fā)病率不斷上升，給患者的生存質(zhì)量造成嚴(yán)重的負(fù)面影響[5]。惡性淋巴瘤發(fā)病原因復(fù)雜，目前研究提示可能與人類皰疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、免疫功能低下、免疫抑制劑的應(yīng)用及幽門螺桿菌等有關(guān)[6-7]。流式細(xì)胞術(shù)是一種將計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、免疫熒光化學(xué)與單克隆抗體進(jìn)行結(jié)合的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)，可快速測(cè)定細(xì)胞或細(xì)胞器生物學(xué)性質(zhì)，具有速度快、對(duì)異常細(xì)胞鑒別能力高、準(zhǔn)確性好、可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤的診治中[8-10]。

惡性淋巴瘤是一類全身性疾病，與機(jī)體免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)密切相關(guān)[11]。細(xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤的主要免疫效應(yīng)，尤其是T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫[12]。當(dāng)T細(xì)胞亞群的功能及數(shù)量出現(xiàn)異常時(shí)，可導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生免疫紊亂，降低機(jī)體免疫功能，引發(fā)一系列病理變化[13-14]。本研究結(jié)果顯示，研究組CD3+、CD4+/CD8+水平較對(duì)照組均明顯更低。表明惡性淋巴瘤患者的免疫功能低下[15]。分析原因?yàn)镃D3+僅存在于T細(xì)胞表面，由6條肽鏈組成，可與T細(xì)胞受體進(jìn)行結(jié)合，形成復(fù)合物，參與T細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，且與T細(xì)胞的活化密切相關(guān)。惡性淋巴瘤患者的CD3+水平與T細(xì)胞的功能密切相關(guān)，CD3+分子的數(shù)量與T細(xì)胞功能呈正相關(guān)[16]。CD4+、CD8+作用T細(xì)胞表面的輔助分子，在組織相容性復(fù)合體限制性T細(xì)胞的活化起到重要作用[17]。大部分CD4+細(xì)胞為輔助性T細(xì)胞，可分泌大量的淋巴因子，對(duì)其他效應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行激活，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)和CD8+細(xì)胞參與了初次免疫反應(yīng)，而CD4+細(xì)胞在再次抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮著巨大作用[18]。在CD4+細(xì)胞和其分泌的淋巴因子作用下，可殺死一部分腫瘤細(xì)胞(主要為帶有致敏抗原肽-MHCⅠ類分子的細(xì)胞)及抑制性T細(xì)胞，對(duì)NK細(xì)胞及T細(xì)胞的活性進(jìn)行抑制[19]。CD4+/CD8+的動(dòng)態(tài)平衡可決定機(jī)體的免疫水平及免疫狀態(tài)，若CD4+/CD8+下降，抑制NK細(xì)胞的活性，為腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及擴(kuò)散提供了有利條件。

武曉博研究指出[20]，淋巴瘤患者化療前外周血CD4+、CD4+/CD8+水平低于對(duì)照組，CD3+、CD8+水平高于對(duì)照組；但本研究的結(jié)果顯示，不同類型惡性淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平較對(duì)照組低，其中，Ⅲ～Ⅳ期惡性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對(duì)照組，CD4+、CD4+/CD8+水平變化則與武曉博的研究數(shù)據(jù)有較好的一致性，CD3+水平變化與之相反，低于對(duì)照組患者。但在喬文斌等的研究中[21]，淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平較對(duì)照組低，本研究結(jié)果與之具有一致性。

在本研究中，Ⅰ～Ⅱ期惡性淋巴瘤患者CD3+水平低于對(duì)照組，而CD8+更高。可能是因?yàn)閻盒粤馨土龌颊咴谠缙跁r(shí)，其免疫功能下降，但機(jī)體可通過自身免疫調(diào)節(jié)功能對(duì)T細(xì)胞亞群的數(shù)量進(jìn)行調(diào)控，減少CD8+細(xì)胞數(shù)量，減輕對(duì)CD4+細(xì)胞的抑制程度。Ⅲ～Ⅳ期惡性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較對(duì)照組明顯更低，與淋巴系統(tǒng)損傷有關(guān)；因?yàn)閻盒粤馨土龌颊咴谕砥跁r(shí)，其淋巴系統(tǒng)受到嚴(yán)重?fù)p害，增加CD8+細(xì)胞數(shù)量，增強(qiáng)對(duì)CD4+細(xì)胞的抑制程度，從而降低CD4+/CD8+水平。本研究中，不同類型的惡性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平未見明顯差異，表明不同類型惡性淋巴瘤患者均存在免疫功能下降的情況。

綜上所述，流式細(xì)胞儀檢測(cè)惡性淋巴瘤患者外周血T細(xì)胞亞群對(duì)于判斷患者病情、臨床分期及免疫狀態(tài)具有重要意義。

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ClinicalstudyofperipheralbloodTcellsubsetsinpatientswithmalignantlymphomabyflowcytometry

WANGJingsheng，LIUZhengjun，CHENGNan，LIDan，GAOHuiguang

Department of Clinical Laboratory，The 404th Hospital of PLA，Weihai 264200，China

ObjectiveThe aim of this study was to investigate the effect of flow cytometry on peripheral blood T cell subsets in patients with malignant lymphoma and its relationship with clinicopathological and tumor types.MethodsNinety-eight patients with malignant lymphoma treated in our hospital from August 2014 to September 2016 were selected as the study group.Ninety-eight healthy subjects were selected as the control group.The peripheral blood T cell subsets(CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+)were detected in patients and healthy controls by flow cytometry.ResultsThe levels of CD3+and CD4+/CD8+in the study group were(55.63±11.25)and(1.32±0.62)，respectively，which were significantly lower than those(68.96±12.63)and(1.59±0.59)of the control group(P<0.05).The levels of CD4+and CD8+were(33.67±8.14)and(26.02±4.67)，respectively in the study group，were no difference from the control group(34.12±8.33)and(25.67±4.53)(P>0.05).The levels of CD3+and CD4+/CD8+in patients with Hodgkin′s lymphoma were(54.63±11.36)，(1.22±0.65)，respectively，and(55.52±12.02)，(1.34±0.71)for non-hodgkin lymphoma.They were significantly decreoseg in the control group(68.96±12.63 for CD3+and 1.59±0.59 for CD4+/CD8+)(P<0.05).The level of CD4+and CD8+were no difference amoupst Hodgkin′s lymphoma(33.78±8.23 for CD4+and 25.74±4.88 for CD8+)，non-Hodgkin′s lymphoma(25.74±4.88 for CD4+and 33.62±8.74 for CD8+)and control group(34.12±8.33 for CD4+and 25.67±4.53 for CD8+)(P>0.05).The levels of CD3+，CD4+and CD4+/CD8+in patients with Ⅲ ～Ⅳ stage malignant lymphoma were(52.66±12.47)，(28.25±6.32)and(1.30±0.62)，respectively，which were significantly lower than those(68.96±12.63)，(34.12±8.33)and(1.59±0.59)in the control group(P<0.05).The level of CD3+in patients with phase I-II malignant lymphoma(58.63±11.85)was significantly lower than that in the control group(68.96±12.63)(P<0.05).The level of CD8+in patients with phase I-II malignant lymphoma(29.63±3.57)was significantly higher than that in the control group(25.67±4.53)(P<0.05).ConclusionThe detection of peripheral blood T cell subsets by flow cytometry can be used as an important methods to diagnose the disease，staging and immune status of patients with malignant lymphoma，which has high application value.

Flow cytometry；Malignant lymphoma；Peripheral blood T cell subsets

解放軍第404醫(yī)院檢驗(yàn)科(威海 264200)

王景勝，男，(1960-)，本科，主任技師，從事檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，血液病診斷的研究。

王景勝，E-mail：hamosk@sina.com

R733

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.05.008

(收稿：2017-05-11)