兒童斑禿患者外周血Th17及IL-17水平研究

蘇湘川，石青青，任小麗，胡雅玉，陳祥恩，陳健

（浙江省臺州市立醫(yī)院，臺州318000）

·論著·

兒童斑禿患者外周血Th17及IL-17水平研究

蘇湘川，石青青，任小麗，胡雅玉，陳祥恩，陳健

（浙江省臺州市立醫(yī)院，臺州318000）

目的研究兒童斑禿患者外周血Th17細(xì)胞及白細(xì)胞介素（IL）-17的變化，探討其在兒童斑禿患者發(fā)病中的作用。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測兒童斑禿患者外周血Th17細(xì)胞的比例，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）測定培養(yǎng)上清液中IL-17表達水平，以健康兒童作為對照。結(jié)果兒童斑禿患者外周血與健康兒童比較，外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平增高（P<0.05）；重度兒童斑禿患者與輕度兒童斑禿患者比較，外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17水平增高（P<0.05）；穩(wěn)定期兒童斑禿患者與活動期兒童斑禿患者外周血比較，外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平增高（P<0.05）。結(jié)論Th17細(xì)胞及IL-17可能在兒童斑禿的發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

斑禿；Th17細(xì)胞；白細(xì)胞介素-17

斑禿是一種快速發(fā)生的圓形或橢圓形片狀脫發(fā)，受累范圍小至1片頭皮，大至整個頭顱的全禿，甚至全身性脫發(fā)，稱作普禿。斑禿可發(fā)生于任何年齡，尤其好發(fā)于青少年，一般輕者愈合較好，50%病例有復(fù)發(fā)，特別是初發(fā)于兒童者復(fù)發(fā)較多，全禿發(fā)生于兒童者很難恢復(fù)[1]。目前，對于斑禿的病因及發(fā)病機制尚未探究清楚，多認(rèn)為是遺傳因素、機體免疫系統(tǒng)平衡失調(diào)為主，同時摻雜環(huán)境因素、精神壓力等因素共同作用所致[2]。本文研究兒童斑禿患者外周血Th17細(xì)胞及白細(xì)胞介素-17（IL-17）的變化，并分析其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2015年1月—2016年8月就診于

臺州市立醫(yī)院皮膚科兒童輕型斑禿患者40例、重型斑禿20例、活動期與靜止期斑禿患者各30例。患者年齡1～14歲，均符合斑禿的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有其他系統(tǒng)疾病、精神疾患等病史者；②有其他炎癥性、腫瘤性或自身免疫性等皮膚?。虎?個月內(nèi)接受過任何口服藥物（糖皮質(zhì)激素類、復(fù)方甘草酸苷等）、注射或照射等治療；④1周內(nèi)外用過糖皮質(zhì)激素、米諾地爾等。健康體檢兒童30例為對照組，各組年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義。斑禿的分類與分期：按嚴(yán)重程度將斑禿分為輕型斑禿（頭皮脫發(fā)面積＜50%）和重型斑禿（頭部脫發(fā)面積≥50%及全禿和普禿）。按病情活動情況分為活動期斑禿及穩(wěn)定期斑禿，活動期斑禿為脫發(fā)區(qū)不斷擴大或有新的脫發(fā)區(qū)出現(xiàn)，拔發(fā)試驗陽性，非活動期斑禿為脫發(fā)區(qū)面積未擴大及無新的脫發(fā)區(qū)出現(xiàn)，拔發(fā)試驗陰性[3]。

1.2方法

1.2.1 試劑和儀器PE-抗IL-17流式抗體，PEIL-6流式抗體，PE-IgG1同型對照抗體均為美國eBioscience公司產(chǎn)品；佛波酯、離子霉素、植物血凝素、固定劑和破膜劑為美國Sigma公司；美能星、流式細(xì)胞儀為BD公司；RPMI1640培養(yǎng)基為Gibco產(chǎn)品。

1.2.2 外周血Th17細(xì)胞的檢測[4]取100 μL者全血，用100 μL RPMI1640培養(yǎng)基等量稀釋，加入1 μL/mL佛波酯工作液4 μL，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4～6 h。加入10 μL PECy5抗CD3和10 μL FITC抗CD8單抗，室溫、避光、溫育15 min。分為2管，每管加入上述已染色的全血100 μL編號為a和b，分別加入固定液100 μL，室溫，避光溫育15 min，再各自分別加入PBS 3 mL，1 200轉(zhuǎn)/min離心5 min，除去上清液。各自再加入破膜劑100 μL，同時在a管中加入10 μL PE-IgG1同型對照抗體，b管中加入10 μL PE-IgG1抗IL-17流式抗體，室溫，避光溫育15 min，每管中加入PBS 3 mL，1 200轉(zhuǎn)/min離心5 min，除去上清液，加入0.5 mL PBS重懸細(xì)胞，上機檢測。

1.2.3 血清中IL-17的檢測采清晨空腹靜脈血5 mL，離心、取血清，采用ELISA法檢測患者血清及健康組血清中IL-17的水平，操作嚴(yán)格按試劑說明書進行。ELISA試劑盒為晶美生物工程有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 16.0軟件進行分析，計量資料以表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 輕度兒童斑禿患者外周血與健康對照組比較外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平增高（P=0.025<0.05）；重度兒童斑禿患者外周血與健康對照組比較，外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平增高（P=0.011<0.05）；重度兒童斑禿患者與輕度兒童斑禿患者比較，外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17水平增高（P=0.018<0.05）。見表1。

2.2 穩(wěn)定期兒童斑禿患者外周血與健康對照組比較外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平增高（P=0.029<0.05）；活動期兒童斑禿患者外周血與健康對照組比較，外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平增高（P=0.015<0.05）；活動期兒童斑禿患者與穩(wěn)定期兒童斑禿患者外周血比較，外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平增高（P=0.023<0.05）。見表2。

表1 輕中度兒童斑禿外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17濃度比較

表2 活動期與穩(wěn)定期兒童斑禿外周血Th17細(xì)胞比例及IL-17濃度比較

3 討論

目前國內(nèi)外多數(shù)學(xué)者認(rèn)為斑禿是一種T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，近年對斑禿的研究也主要集中在細(xì)胞免疫與斑禿發(fā)病的關(guān)系方面。已有研究發(fā)現(xiàn)斑禿皮損毛囊周圍浸潤的T淋巴細(xì)胞及細(xì)胞因子在斑禿發(fā)病中起著重要的作用，主要由T淋巴細(xì)胞中Th1型細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)，Th1/Th2細(xì)胞功能失衡和斑禿的發(fā)生有關(guān)[5-6]。

Th17細(xì)胞是一種近年新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群，是一種新型的CD4+效應(yīng)T細(xì)胞，在炎癥性疾病及自身免疫病的發(fā)病機制中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用。Th17細(xì)胞是獨立于Th1/Th2型細(xì)胞的一種新型T細(xì)胞，它不同于傳統(tǒng)的Th1、Th2細(xì)胞，因分泌特征性介質(zhì)IL-17誘導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)而得名，并且在自身免疫性疾病、腫瘤和移植排斥等疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。IL-17是Th17細(xì)胞發(fā)揮其生物學(xué)作用的關(guān)鍵性效應(yīng)因子，它是一種強大的前炎癥細(xì)胞因子。

國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在斑禿患者的頭皮中，特別是在毛囊周圍，有Th17細(xì)胞浸潤[7]，IL-17A和腫瘤壞死因子α水平較對照組升高[8]。國內(nèi)柳小婧等[9]研究發(fā)現(xiàn)斑禿患者外周血Thl7細(xì)胞比例較健康對照顯著升高，病程≤6個月患者Thl7細(xì)胞水平顯著高于病程＞6個月患者，活動期高于非活動期，斑禿復(fù)發(fā)患者Th17細(xì)胞比例高于初發(fā)患者，提示復(fù)發(fā)患者的自身免疫狀態(tài)更加值得注意。劉官智等[10]研究發(fā)現(xiàn)斑禿活動期組外周血清IL-17水平明顯高于穩(wěn)定期組和正常對照組，斑禿穩(wěn)定期組血清IL-17水平亦明顯高于正常對照組，初步表明Th17細(xì)胞因子可能參與了斑禿的發(fā)病。

筆者研究發(fā)現(xiàn)，兒童斑禿患者外周血Th17細(xì)胞比例、IL-17水平與正常對照組比較，顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；重度斑禿患者與輕度斑禿患者比較，活動期斑禿患者與穩(wěn)定期斑禿患者比較，均顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步證實兒童斑禿患者的發(fā)生、病情的活動性及嚴(yán)重程度與Th17細(xì)胞比例及IL-17水平有一定的關(guān)系。

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Th17 cells and IL-17 in Percipheral Blood of Patients with Childhood Alopecia Areata

Su Xiangchuan,Shi Qingqing,Ren Xiaoli,Hu Yayu,Chen Xiang'en,Chen Jian
Taizhou Municipal Hospital in Zhejiang Province,Taizhou 318000,China

ObjectiveIn order to investigate the variations of Th17 and IL-17 in peripheral blood of the patients with childhood alopecia areata and explore their significances.MethodsThe percentages of Th17 cells in peripheral blood of patients with childhood alopecia areata were detected by flow cytometry,the levels of IL-17 were detected by ELISA.Meanwhile,healthy chilidren were taken as controls.ResultsThe percentags of Th17 cells and the levels of IL-17 were increased in patients with childhood alopecia areata compared with those of healthy controls（P<0.05）.The percentages of Th17 cells and the levels of IL-17 were higher in the severe alopecia areata than the mild alopecia areata of childhood（P<0.05）.The percentages of Th17 cells and the levels of IL-17 were higher in the active phase group than those in the stable phase group（P<0.05）.ConclusionTh17 cell and IL-17 may play an important role in the onset,development of patients with childhood alopecia areata.

Alopecia areata;T Helper Type 17 Cells;Interleukin-17

R758.71

A

1672－0709（2017）04-0298－03

2016-12-06）