馮了性跌打風(fēng)濕藥酒指紋圖譜的研究

●陳改敏

馮了性跌打風(fēng)濕藥酒指紋圖譜的研究

●陳改敏

目的：本文對馮了性風(fēng)濕跌打要就指紋圖譜進(jìn)行檢測的方法進(jìn)行論述。方法：對于馮了性跌打風(fēng)濕藥酒的指紋圖譜，采用HPLC方法進(jìn)行監(jiān)理，廚房中的直白哦成分，用量較大的包括麻黃、桂枝、陳皮、丁公藤等，采用對比參照的方法進(jìn)行研究，使用的指紋圖譜分析的軟件為重要色譜指紋圖譜相似度的評價系統(tǒng)。結(jié)果：以驗算鹽酸偽麻黃堿、桂皮醛、柚皮苷等為參照，對馮了性跌打風(fēng)濕藥酒進(jìn)行HPLC指紋圖譜的分析，確定了獨照指紋圖譜的相似度，藥酒的色譜圖、共有峰等。結(jié)論：采用HPLC法進(jìn)行馮了性跌打風(fēng)濕藥酒的指紋圖譜的評價，具有很好的重復(fù)性、穩(wěn)定性以及精密度，值得加以推廣使用。

馮了性風(fēng)濕跌打藥酒；HPLC法、指紋圖譜

1 儀器與材料

馮了性跌打風(fēng)濕藥酒指紋圖譜進(jìn)行測定的儀器，選用了高效液相色譜儀、電子天平等。對照東菪內(nèi)酯、桂皮醛等，采用藥品生物制品鑒定所進(jìn)行鑒定的方法，對國藥集團(tuán)生產(chǎn)的馮了性跌打風(fēng)濕藥酒進(jìn)行了檢測，要藥酒的規(guī)格為500ML每瓶（從S1-S10)，水位超純水，甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法和結(jié)果

(1)色譜條件采用的流動相為甲醇的醋酸磷酸，其中醋酸含量為0.1%，磷酸的含量為-0.1%，色譜柱為C18柱，流動相B采用梯度洗脫程序，按照體積進(jìn)行時間的設(shè)定，12%的流動相洗脫的時間為30分鐘，25%以內(nèi)的體積洗脫的時間最長為50分鐘，38%的流動相洗脫的時間最長為50-75分鐘，60%的流動相洗脫的時間最長為95分鐘，90%的流動洗脫的時間為100分鐘。對波長進(jìn)行檢測，300 nm的檢測時間為0-10分鐘，210 nm的檢測時間為10-20分鐘，800 nm的檢測時間20-100分鐘，進(jìn)行色譜測試的柱溫度為30攝氏度，流速為1ML/m in[2]。

馮了性風(fēng)濕跌打風(fēng)濕藥酒指紋圖譜

1-15 分別為鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、東莨菪苷、綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、柚皮苷、新橙皮苷、桂皮醛等，其余峰號未能歸屬

(2)取馮了性風(fēng)濕跌打藥酒。10 m L作為續(xù)濾液進(jìn)行供試品溶液的制備，加甲醇稀釋至刻度過 0．45 μm 微孔濾膜，置 20 m L量瓶中，按照精密量進(jìn)行搖勻。

精密稱取質(zhì)量濃度、體積分?jǐn)?shù) 80%甲醇水溶液溶解，包含了鹽酸偽麻黃堿( 40 μg /m L ）東莨菪內(nèi)酯( 40 μg /m L) 、鹽酸麻黃堿( 40 μg /m L)、綠原酸 ( 40 μg /m L) 、桂皮醛( 10 μg /m L)、新橙皮苷 ( 80μg /m L)、鹽酸偽麻黃堿、柚皮苷( 80 μg /m L) 、東莨菪苷( 212μg /m L) 對照品[3]。

(3)精密度試驗。將結(jié)果導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”，按“2．1”項下的色譜條件，取馮了性風(fēng)濕跌打藥酒 ，平行進(jìn)樣 6 次，按“2．2”項下方法進(jìn)行色譜峰匹配并制備供試品溶液，結(jié)果 15 個共有峰的相對峰面積 R SD 均 ＜ 5%，相對保留時間SD 均＜1%。

(4)穩(wěn)定性試驗。按“2．1”項下色譜條件，取馮了性風(fēng)濕跌打藥酒，分別于 0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣測定，相對峰面積 R SD 均 ＜ 5%，供試品溶液在24 h 內(nèi)進(jìn)行制備供試品溶液，結(jié)果 15 個共有峰的相對保留時間 R SD 均＜ 1%[4]。

(5)重復(fù)性試驗。按“2．2”項下方法，取馮了性風(fēng)濕跌打藥酒 ，分別進(jìn)行色譜條件下的進(jìn)樣，平行制備供試品溶液6 份，按“2．1”項下的結(jié)果 15 個共有峰的相對峰面積R SD 均＜5%，相對保留時間 R SD均＜1%，重復(fù)性良好[5]。

以馮了性風(fēng)濕跌打藥酒對東莨菪內(nèi)酯進(jìn)行的加樣回收率的實驗為例，按照色譜條件進(jìn)行含量的測定，操作進(jìn)行了重復(fù)的六次，按照供試品進(jìn)行了操作和制備，并進(jìn)行了回收率的計算。得到的結(jié)果如下：

加樣回收率實驗結(jié)果

（6）指紋圖譜的建立與評價。按上述色譜條件進(jìn)行測定以及自動匹配，供試品的 HPLC指紋圖譜導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”，選取“時間窗寬度”為 0．5 m in，對照指紋圖譜( R) 的相似度分別為 0．988、0．945、0．988、0．944、0．992、0．941、0．973、0． 987、0． 945、0． 983，生成馮了性風(fēng)濕跌打藥酒對照指紋圖譜，得到 S1 ～ S10 供試品的HPLC 指紋圖譜，設(shè)定 S10 為參照圖譜并計算相似度，將 S1 ～ S10 10 批馮了性風(fēng)濕跌打藥酒 樣 品 進(jìn)行了HPLC 指紋圖譜的對照，確定了 15 個共有峰。其中8 個色譜峰，分別為東莨菪苷、柚皮苷、東莨菪內(nèi)酯、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新橙皮苷、綠原酸、桂皮醛，根據(jù)色譜圖中各色譜峰的相對保留時間，對應(yīng)峰2、3、4、5、7、11、12、14，峰面積較大且穩(wěn)定，出峰時間適中，經(jīng)過采用紫外光譜比較以及對照品對照的方式，指認(rèn)出因圖譜中綠原酸分離度好，保留時間長，因此將其作為色譜參照峰[6]。

3 討論

比較了 Ecosil、Kromasil、Merck 3 種不同品牌型號的色譜柱，確定 210、300 nm 作為檢測波長。在用 DAD 檢測器對供試品溶液進(jìn)行檢測時，優(yōu)選了 Kromasil C18柱( 4．6 mm×250 mm，5 μm) 為試驗色譜柱。結(jié)果顯示在 300 nm 條件下酒中藥材用量較大的麻黃的指標(biāo)成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿出峰最豐富，故從色譜峰峰形、分離度等方面比較先后選擇了甲醇-0．1%甲酸、甲醇-0．2%醋酸等成分，明顯優(yōu)于360 nm 條件下的出峰情況。流動相的選擇采用甲醇-水-冰醋酸(32∶ 68∶ 0.16)、腈-0.1%磷酸水溶液，結(jié)果前者所得色譜基線不平，且藥酒內(nèi)各種元素的含量其相鄰雜質(zhì)不能得到較好的分離，且洗出較多雜質(zhì)，而進(jìn)行梯度洗脫，相鄰的雜質(zhì)峰分離度極佳，重現(xiàn)性強。作為流動相系統(tǒng)，藥在 210 nm 處出峰，譜峰分離較理想，0．1%磷酸 =1 ∶1，乙腈-0．1%磷酸、甲醇-0．1%，選擇甲醇和醋酸各0.1%，，色譜峰形好，洗脫能力強，基線平穩(wěn)色譜圖信息量大且分離效果好。

（作者單位：南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校）

南陽市2015年科技攻關(guān)項目，KJGG05

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