冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性與血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9及超敏C反應(yīng)蛋白濃度的關(guān)系△

宋 穎，李曉燕

（濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院，濟(jì)南250031）

·實(shí)驗(yàn)研究·

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性與血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9及超敏C反應(yīng)蛋白濃度的關(guān)系△

宋 穎，李曉燕

（濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院，濟(jì)南250031）

目的 探討冠狀動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）斑塊穩(wěn)定性與血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metallo?proteinase-9，MMP-9）及超敏C反應(yīng)蛋白（high sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）濃度的關(guān)系。方法 按照隨機(jī)分組方法將56只大白兔劃分為2組：A組為AS研究組40只，A組分為A1亞組（斑塊破裂組）、A2亞組（斑塊未破裂組）；B組為參照組16只。A組采用（標(biāo)準(zhǔn)顆粒+1%膽固醇）進(jìn)行喂養(yǎng)+球囊損傷，B組采用標(biāo)準(zhǔn)顆粒喂養(yǎng)。在研究期間，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)A、B兩組血清MMP-9和hs-CRP濃度及血脂的變化情況。結(jié)果 研究期間，B組兔的體質(zhì)量與A1、A2亞組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始、實(shí)驗(yàn)第14周末，B組血脂指標(biāo)變化不明顯，A2和A1亞組的血脂指標(biāo)由實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)到實(shí)驗(yàn)第14周末呈上升趨勢(shì)；實(shí)驗(yàn)第14周末，B組與A1、A2亞組的血脂濃度比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；但是A2亞組和A1亞組血脂濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在第4周時(shí)，B組與A1亞組、A2亞組的血清MMP-9和hs-CRP濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在第10周時(shí)，B組、A2亞組和A1亞組的血清MMP-9和hs-CRP濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A1亞組血清MMP-9和hs-CRP濃度高于A2亞組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在第14周時(shí)，A1亞組和A2亞組的血清MMP-9和hs-CRP濃度均高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A1亞組血清MMP-9和hs-CRP濃度高于A2亞組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中A1、A2兩亞組的血清MMP-9、hs-CRP濃度均呈現(xiàn)升高趨勢(shì)（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)兔血清MMP-9濃度和hs-CRP濃度之間為正相關(guān)關(guān)系（r=0.967，P=0.001）。結(jié)論MMP-9和hs-CRP呈正相關(guān)關(guān)系，且兩者的濃度與AS斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)，斑塊越不穩(wěn)定，MMP-9和hs-CRP的濃度越高。

基質(zhì)金屬蛋白酶-9；超敏C-反應(yīng)蛋白；動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性

隨著人們生活水平的提高，其飲食習(xí)慣發(fā)生了很大變化，隨之而來(lái)的健康問(wèn)題越來(lái)越多，其中動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）疾病就是常見(jiàn)的一種，它是一種慢性炎癥性疾病，主要特點(diǎn)就是造成“穩(wěn)定斑塊”向“不穩(wěn)定斑塊”轉(zhuǎn)變，最終造成如急性心腦血管疾病等嚴(yán)重的后果［1］。本研究探討AS斑塊穩(wěn)定性與血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix me?talloproteinase-9，MMP-9）及超敏C反應(yīng)蛋白（high sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）濃度的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

按照隨機(jī)分組方法將56只大白兔劃分為2組：A組為AS研究組40只，B組為參照組16只。A組采用（標(biāo)準(zhǔn)顆粒+1%膽固醇）進(jìn)行喂養(yǎng)+球囊損傷，標(biāo)準(zhǔn)顆粒+1%膽固醇進(jìn)行喂養(yǎng)14周；球囊損傷采用腹主動(dòng)脈內(nèi)膜方案。B組采用標(biāo)準(zhǔn)顆粒喂養(yǎng)。14周后采用組胺觸發(fā)的方法促使AS斑塊破裂，將A組40只兔子殺死后，觀察AS斑塊破裂情況，將斑塊破裂的劃入破裂組，即A1亞組，未破裂的劃入未破裂組，即為A2亞組。

1.2 藥物觸發(fā)

根據(jù)Constantinides等對(duì)實(shí)驗(yàn)兔藥物觸發(fā)方法：在實(shí)驗(yàn)14周后，對(duì)A組實(shí)驗(yàn)兔在殺死前的24 h和48 h分別注射0.15 mg/kg的中國(guó)斑點(diǎn)蝰蛇毒，30 min后再注射0.02 mg/kg的組胺。

1.3 方法

喂養(yǎng)方法：所有實(shí)驗(yàn)兔實(shí)行單籠飼養(yǎng)，每天密切觀察它們的進(jìn)食情況，并每周記錄其體質(zhì)量和定期檢查。血清炎性物質(zhì)檢測(cè)：分別在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前、第4周、第10周和第14周對(duì)所有實(shí)驗(yàn)兔抽取靜脈血，并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)血清MMP-9和hs-CRP的濃度。血液生化指標(biāo)檢測(cè)：分別在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前、第4周、第10周和藥物觸發(fā)前對(duì)所有實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)行血液生化檢測(cè)。檢測(cè)血清三酰甘油（triacylglycerol，TG），總膽固醇（total cholesterol，TC），低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C），高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以（±s）表示，采用LSD-t檢驗(yàn)及采用Oneway ANOVA方差分析檢驗(yàn)。兩變量的相關(guān)分析采用Bivariate過(guò)程的Pearson等級(jí)相關(guān)法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中 3組兔的體質(zhì)量、血脂濃度比較

如表1所示，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中B組兔的體質(zhì)量與A1亞組、A2亞組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A1亞組和A2亞組間兔的體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始、實(shí)驗(yàn)第14周末，B組血脂指標(biāo)變化不明顯，A2亞組和A1亞組的血脂指標(biāo)由實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)到實(shí)驗(yàn)第14周末呈上升趨勢(shì)；實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)3組血脂指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)第14周末，B組血脂指標(biāo)與A1亞組、A2亞組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但是A2亞組和A1亞組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見(jiàn)表2。

2.2 各時(shí)間點(diǎn) 3組血清基質(zhì)金屬蛋白酶- 9及超敏 C反應(yīng)蛋白濃度比較

在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)B組、A2亞組、A1亞組血清MMP-9和hs-CRP濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在第4周時(shí)，B組與A2亞組、A1亞組血清MMP-9和hs-CRP濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A1亞組血清MMP-9和hs-CRP濃度和A2亞組對(duì)比，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在第10周時(shí)，B組、A2亞組和A1亞組血清MMP-9和hs-CRP濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A1亞組血清MMP-9和hs-CRP濃度高于A2亞組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在第14周時(shí)A1和A2亞組的MMP-9和hs-CRP濃度均高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A1亞組的MMP-9和hs-CRP濃度高于A2亞組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。各時(shí)間點(diǎn)3組血清MMP-9和hs-CRP濃度比較，詳見(jiàn)表3。A1亞組和A2亞組血清MMP-9、hs-CRP濃度從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至第14周呈逐漸升高趨勢(shì)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中3組兔的體質(zhì)量比較 ［kg，±s］

表1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中3組兔的體質(zhì)量比較 ［kg，±s］

注：與B組比較，**P＜0.01

組別B組A2亞組A1亞組n 16 18 22實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)1.80±0.22 2.11±0.18**2.22±0.34**第14周末2.18±0.17 2.59±0.23**2.62±0.22**

表2 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)及第14周末3組的血脂指標(biāo)比較 ［mmol/L，±s］

表2 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)及第14周末3組的血脂指標(biāo)比較 ［mmol/L，±s］

注：與B組比較，**P＜0.01；與實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)同組比較，1）*P＜0.05

時(shí)間n實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)實(shí)驗(yàn)第14周末組別B組A2亞組A1亞組B組A2亞組A1亞組16 18 22 16 18 22 TG 0.75±0.31 0.48±0.18 0.48±0.18 0.68±0.06 1.13±0.09**，1）*1.11±0.80**，1）*TC 1.07±0.06 1.04±0.78 1.08±0.75 1.12±0.13 24.81±2.50**，1）*23.24±3.01**，1）*HDL-C 0.39±0.21 0.42±0.27 0.41±0.22 0.49±0.41 1.10±0.15**，1）*1.04±0.14**，1）*LDL-C 0.44±0.32 0.38±0.03 0.37±0.26 0.50±0.05 20.10±2.70**，1）*19.69±1.28**，1）*

表3 各時(shí)間點(diǎn)3組血清MMP-9和hs-CRP濃度比較 ［mmol/L，±s］

表3 各時(shí)間點(diǎn)3組血清MMP-9和hs-CRP濃度比較 ［mmol/L，±s］

注：與B組同項(xiàng)比較，**P＜0.01；與A2亞組同項(xiàng)比較，1）**P＜0.01；與實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)同組比較，aP＜0.05；與第4周同組比較，bP＜0.05；與第10周同組比較，cP＜0.05

指n MMP-9（ng/mL）hs-CRP（mg/L）組別B組A2亞組A1亞組B組A2亞組A1亞組16 18 22 16 18 22實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)11.94±1.91 11.43±1.25 11.54±1.80 8.02±0.34 8.12±0.52 8.06±0.74第4周11.03±2.70 14.56±2.46**，a 17.22±3.95**，a 8.10±0.46 12.03±1.15**，a 12.56±1.33**，a第10周10.97±2.86 33.65±4.15**，a，b 43.89±7.24**，1）**，a，b 8.44±0.83 21.84±1.86**，a，b 26.95±3.49**，1）**，a，b第14周10.84±1.65 40.48±2.99**，a，b，c 51.98±5.60**，1）**，a，b，c 8.23±0.67 26.57±1.40**，a，b，c 33.78±3.19**，1）**，a，b，c

2.3 相關(guān)分析結(jié)果

血清MMP-9和hs-CRP之間呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.967，P=0.001），見(jiàn)圖1。

3 討論

由于我國(guó)社會(huì)、經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人們的生活水平得到了很大提高，人們的生活方式和飲食習(xí)慣也發(fā)生了很大變化，我國(guó)的AS患者也隨之增多，并有逐年上升的趨勢(shì)［2］。AS對(duì)患者造成最主要的傷害是AS斑塊由“穩(wěn)定”轉(zhuǎn)變?yōu)椤安环€(wěn)定”，進(jìn)而造成一系列的疾病發(fā)生，如腦梗死、心腦血管疾病等［3-4］。

MMPs是一類以鋅離子為輔助因子的蛋白酶超家族，其主要作用是降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，在組織重構(gòu)過(guò)程中起著重要的作用［5］。MMPs的種類很多，有20多種，MMP-9是其中之一，其為明膠酶，如果Ⅳ型、Ⅴ型膠原及明膠被降解，可能造成AS的發(fā)生及發(fā)展［6］。Galis等發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠相比，MMP-9基因缺陷小鼠的血管平滑肌細(xì)胞遷移活性和膠原收縮能力均降低，表明MMP-9參與血管壁的基質(zhì)降解和重構(gòu)。相關(guān)研究表明，和正常動(dòng)脈壁相比，AS斑塊內(nèi)的MMP-2和MMP-9濃度升高、活性增強(qiáng)，這也預(yù)示著MMP-9通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)參與AS的發(fā)生及發(fā)展［7］。相關(guān)的實(shí)驗(yàn)報(bào)道也表明，MMP-9濃度和活性強(qiáng)度與斑塊的不穩(wěn)定有很大的關(guān)系［8］。Manginas等［9］相關(guān)報(bào)道稱，細(xì)胞外基質(zhì)降解和AS斑塊發(fā)生破裂都是由MMP-9濃度升高引起。本研究顯示，AS斑塊形成的第4周、10周及14周末，A1和A2亞組的血清MMP-9濃度在呈上升趨勢(shì)，A1和A2亞組與B組相比，MMP-9濃度較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 血清MMP-9和hs-CRP之間相關(guān)性散點(diǎn)圖

AS是一種慢性炎癥性疾病，可以通過(guò)對(duì)血清中的炎癥標(biāo)志物濃度的檢測(cè)來(lái)看出AS斑塊的發(fā)展程度［9］。正常情況下，C反應(yīng)蛋白在血清中濃度很低，當(dāng)在特異或者非特異性炎癥發(fā)生時(shí)，其濃度會(huì)增加，因此，其已經(jīng)在臨床中作為炎癥性疾病的檢測(cè)指標(biāo)［10］。hs-CRP是最敏感的檢測(cè)慢性炎癥反應(yīng)的指標(biāo)之一［11］。相關(guān)研究顯示，AS的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，hs-CRP發(fā)揮了很大的作用，增加了AS斑塊的不穩(wěn)定性［12］。有研究報(bào)道稱，和穩(wěn)定型心絞痛患者相比，急性冠脈綜合癥患者的C反應(yīng)蛋白濃度明顯增加，表明C反應(yīng)蛋白濃度升高時(shí)導(dǎo)致AS斑塊破裂，而兩者倒置。國(guó)內(nèi)、外研究表明，血清hs-CRP濃度的升高與斑塊的炎癥反應(yīng)有關(guān)，血清hs-CRP濃度高低可以反映斑塊的穩(wěn)定性［9］。本研究結(jié)果顯示，兔AS斑塊形成過(guò)程中的第4、10周和14周末，其hs-CRP濃度呈上升趨勢(shì)，A1和A2亞組與B組相比，hs-CRP濃度較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

本研究相關(guān)分析結(jié)果顯示，MMP-9和hs-CRP呈正相關(guān)關(guān)系，且兩者的濃度與AS斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)，斑塊越不穩(wěn)定，MMP-9和hs-CRP的濃度越高。

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Relationships between coronary atherosclerotic plaque stability with serum concentrations of matrix metalloproteinase-9 and high sensitivity C-reactive protein

SONG Ying，LI Xiao-yan
（General Hospital of Jinan Military Area，Jinan 250031，China）

ObjectivesTo evaluate and the relationships between coronary atherosclerosis（AS）plaque stability with serum concentrations of matrix metalloproteinase-9（MMP-9）and high sensitivity C-reactive protein（hs-CRP）.MethodsAccording to the random grouping method，56 rabbits were divided into two groups：40 rabbits were in A group［including A1 subgroup（plaque broken）and A2 subgroup（plaque not broken）］which was the AS study group，16 rabbits were in B group which was a reference group.Rabbits were treated with standard particle feeding+1%cholesterol+balloon injury in A group and rabbits were treated with standard particle feeding in B group.Serum con?centrations of MMP-9，hs-CRP and blood lipids were dynamicly monitored among the 3 groups.ResultsDifferences of body weight of rabbits between B group with A1 subgroup and A2 subgroup were significantly different during the study（P＜0.05）.Blood lipids concentrations in B group were not significantly different but they were uptrend in A1 sub?group and A2 subgroup from the beginning to the 14thweek in this study.Blood lipids concentrations in B group were significantly different with those of A1 subgroup and A2 subgroup（P＜0.05）at the 14thweek in this study，but they had no statistic difference between A1 subgroup and A2 subgroup（P＞0.05）.Serum concentrations of MMP-9 and hs-CRPin B group were significantly different compared with those in A1 subgroup and A2 subgroup in the 4thweek（P＜0.05）.Differences of concentrations of MMP-9 and hs-CRP among B group，A1 subgroup and A2 subgroup were significant at the 10thweek（P＜0.01），and concentrations of MMP-9 and hs-CRP in A1 subgroup were obvious higher than those in A2 subgroup（P＜0.01）.Concentrations of MMP-9 and hs-CRP in A1 subgroup and A2 subgroup were significantly higher than those in B group at 14thweek（P＜0.01），and those in A1 subgroup were obviously higher than those in A2 subgroup（P＜0.01）.Concentrations of MMP-9 and hs-CRP in A1 subgroup and A2 subgroup were uptrend during this study.Concentration of MMP-9 positively related with concentration of hs-CRP（r=0.967，P=0.001）.Conclusions Concentration of MMP-9 positively relates with concentration of hs-CRP，and they both closely relate to AS plaque sta?bility.The higher the concentrations of MMP-9 and hs-CRP are，the the more unstable the plaques are.

matrix metalloproteinase-9；high-sensitivity C-reactive protein；atherosclerotic plaque stability

R541.4

A

1007-9688（2017）05-0610-04

10.3969/j.issn.1007-9688.2017.05.28

貴州省科技計(jì)劃課題（項(xiàng)目編號(hào)：黔科合SY字【2010】）兩院合作項(xiàng)目；山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：ZR2010HM202）。

宋穎（1983-），女，住院醫(yī)師，研究方向?yàn)槔夏瓴W(xué)。

2016-07-14）