金花葵不同部位化學(xué)成分分析

曹東怡　虞泓　曾文波

摘要[目的]比較金花葵不同部位化學(xué)成分差異，確定金花葵最佳藥用部位。[方法]采用分光光度法檢測金花葵不同部位（種子、果皮、花、莖、根）的總多糖、甘露醇、總黃酮和總皂苷的含量，并利用高效液相測定8種核苷類成分（尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2′-脫氧腺苷）。[結(jié)果]金花葵花的多糖、甘露醇、總黃酮、總皂苷含量均列前位，特別是總黃酮含量豐富；金花葵花的核苷類成分總含量也最高；而且花的化學(xué)成分含量與其余部位差距較大。[結(jié)論]金花葵花的有效成分含量較為豐富，是理想的藥用部位。

關(guān)鍵詞金花葵；不同部位；化學(xué)成分；藥用部位

中圖分類號S567.21文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）22-0090-03

Abstract[Objective]The research aimed to compare the chemical composition of different parts of A.manihot and determine the best medicinal parts of A.manihot.[Methods] Ultraviolet spectrophotometry was used to measure the total polysaccharides，manntiol，total flavanoids，and total saponins in different parts （seeds，pericraps，flowers，stems，roots） of A.manihot.And highperformance liquid chromatography was used to measure eight nucleosides （uracil，uridine，inosine，guanosine，adenine，thymidine，adenosine，2'-deoxyadenosine）.[Result] The polysaccharides，manntiol，total flavanoids，and total saponins in flowers of this herb were relatively higher，especially the total flavanoids.And the flower also showed the highest content of the eight nucleosides in this herb.Compared with other parts of A.manihot，the chemical components content in flowers was quite different from other parts of A.manihot.[Conclusion] The content of effective component was full of rich in the flowers，the flowers became useful as an important part of chemical constituent in A.manihot.

Key wordsAbelmoschus manihot；Different parts；Chemical constituents；Medicinal parts

金花葵[Abelmoschus manihot （Linn.） Medic]，別名菜芙蓉、野芙蓉、黏干或山榆皮，是一年生錦葵科秋葵屬植物。金花葵富含黃酮，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，阻止細(xì)胞的退化、衰老以及癌癥的發(fā)生，同時改善血液循環(huán)，可以降低膽固醇，從而降低心腦血管疾病的發(fā)病率[1]。研究還發(fā)現(xiàn)，金花葵含有豐富的活性成分，具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、降血脂、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用[2-6]，是極具開發(fā)價值的功能性食品。該研究擬對金花葵不同部位，包括種子、果皮、花、莖、根等開展功效成分比較研究，測定多糖、甘露醇、總黃酮等12個功效成分，并對不同部位成分含量進(jìn)行比較研究，以期為這一珍貴資源深入開發(fā)及市場化提供數(shù)據(jù)支撐。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

金花葵植株來自艾蘭匯公司金花葵種植基地，經(jīng)云南大學(xué)虞泓教授鑒定為金花葵[Abelmoschus manihot （Linn.） Medic]。植株采集后分為種子、果皮、花、莖、根5個部分，干燥后粉碎，儲于干燥器中備用。

1.2試驗(yàn)儀器

電子天平（德國Startorius集團(tuán)，BP221S）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠，JYT-20A）；漩渦混合器（江蘇海門市麒麟醫(yī)用儀器廠，QL-901）；紫外分光光度計（北京市普析通用儀器有限公司，T6新世紀(jì)）；電動離心機(jī)（上海精科儀器儀表有限公司，80-2）；艾柯超純水機(jī)（成都康寧實(shí)驗(yàn)專用純水設(shè)備廠，KI-QP-I-10）；循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，SHZ-DⅢ）；高速萬能粉碎機(jī)（北京中興偉業(yè)儀器有限公司，F(xiàn)W-100）；戴安高效液相色譜（戴安DIONEX公司，LPG-3400A 四元梯度泵，WPS-3000SL 自動進(jìn)樣器，PDA-3000 二極管陣列檢測器，TCC-3000柱溫箱，戴安原裝ACCLAIM C18色譜柱，5 μm，4.6 mm×250 mm，“變色龍”控制分析色譜工作站軟件）。

1.3試驗(yàn)試劑

硝酸鈉、硫酸鎂、磷酸氫二鉀、醋酸銨、冰醋酸、乙酰丙酮、高碘酸鉀、濃硫酸、鹽酸、無水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、苯酚、香蘭素、中性氧化鋁、D101型大孔樹脂等均為國產(chǎn)分析純，甲醇為色譜純（Fisher Scientific），L-鼠李糖為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司進(jìn)口分裝；甘露醇標(biāo)準(zhǔn)品、黃酮標(biāo)準(zhǔn)品和皂苷標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所，尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷和2′-脫氧腺苷的標(biāo)準(zhǔn)品均購自Sigma公司，純度為98%以上；水為蒸餾水。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1多糖的測定。

稱取樣品0.25 g左右放入心形瓶中，加入適量水在90 ℃水浴回流2 h后冷卻并過濾，定容至50 mL。取待測樣品溶液20 mL，放入蒸發(fā)皿中，在水浴70 ℃的條件下?lián)]干。將揮干后的剩余物用2 mL蒸餾水溶解轉(zhuǎn)移至15 mL離心管中，并加入10 mL無水乙醇，混勻，放置15～30 min。之后放入離心機(jī)中以4 000 r/min的速度離心10 min。取出離心管并棄掉上清液，再加入2 mL蒸餾水溶解沉淀物，加入10 mL無水乙醇混勻，重復(fù)上述步驟共3次。最后一次棄掉上清液后加入2 mL蒸餾水溶解沉淀物，定容至50 mL。之后取2 mL溶液至20 mL試管中，加入1 mL 50%苯酚溶液混勻，隨后快速加入7 mL濃硫酸，混勻，放于40 ℃水浴中 30 min，再置于冰水浴中5 min，再放至室溫。在490 nm處測定吸光度。進(jìn)行3組重復(fù)。以蒸餾水代替待測樣品溶液，用同樣方法操作作為空白對照[7]。

1.4.2甘露醇的測定。采用高碘酸鉀法[7]進(jìn)行測定。稱取0.25 g左右金花葵試樣，置于50 mL心形瓶中，加入適量水并回流2 h，過濾、定容至50 mL。隨后取出1 mL待測樣品溶液于試管中，加入1 mL高錳酸鉀溶液，室溫放置10 min，加入0.1% L-鼠李糖溶液2 mL并混合均勻，再加入新鮮配制的Nash溶液4 mL，混合均勻。之后在53 ℃水浴加熱15 min，顯色后冷卻。在412 nm處測出吸光度。試驗(yàn)重復(fù)3次。以蒸餾水代替待測樣品溶液，用同樣方法操作作為空白對照。

1.4.3總皂苷的測定。

準(zhǔn)確稱取樣品0.5000 g，加70%無水乙醇10 mL超聲提取90 min，冷卻后定容至刻度，搖勻，過夜，制得樣品溶液。層析：用5 mL注射器垂直固定，并以3∶1的比例裝填D101大孔樹脂∶中性氧化鋁。先用70%無水乙醇25 mL洗脫柱子，棄去洗脫液；再用25 mL蒸餾水洗脫柱子，棄去洗脫液；然后分別精確加入1 mL樣品溶液，用25 mL蒸餾水洗脫柱子，棄洗脫液，用25 mL的70%無水乙醇洗脫柱子并收集于蒸發(fā)皿中，蒸干。用高氯酸和5%香草醛-冰醋酸溶液（4∶1）1 mL洗凈蒸發(fā)皿，搖勻，并全部轉(zhuǎn)移至具塞試管中，于60 ℃水浴中加熱15 min，取出后立即用冰水冷卻，加冰醋酸5 mL，搖勻，蒸餾水作空白，于560 nm處測定各吸光度，進(jìn)行3組重復(fù)。以蒸餾水代替待測樣品溶液，用同樣方法操作作為空白對照[7]。

1.4.4總黃酮的測定。精密稱取待測樣品0.5000 g置于試管內(nèi)，加5 mL 70%乙醇到15 mL試管中混勻，室溫放置72 h，之后將其混勻后置于離心管中以4000 r/min離心10 min，取上清液至具塞比色管中，備用。取2 mL上述已經(jīng)制備好的供試品溶液，加入5% NaNO2溶液1 mL，搖勻，放置 6 min，加10% Al（NO3）3溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4% NaOH溶液10 mL，搖勻。然后加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，在508 nm處測定吸光度。重復(fù)3組。以蒸餾水代替待測樣品溶液，用同樣方法操作作為空白對照[7]。

1.4.5核苷類成分測定。

色譜條件：流動相為甲醇-水（10∶90）；流速1.0 mL/min；檢測波長260 nm；柱溫30 ℃。精密稱取樣品0.1000 g，加入3 mL 20%甲醇溶液，超聲處理60 min，取出，4 000 r/min離心15 min，吸取上清液過0.45 μm微孔濾膜，用于HPLC分析[8] 。

1.5數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。LSD法檢驗(yàn)差異顯著性。利用多糖、甘露醇、總皂苷、總黃酮和8種核苷類成分含量，對金花葵不同部位化學(xué)成分進(jìn)行Q-聚類分析。

2結(jié)果與分析

2.1金花葵不同部位多糖、甘露醇、總皂苷和總黃酮的含量

從表1可以看出，金花葵不同部位多糖含量從高到低依次為花、根、果皮、莖、種子；甘露醇含量從高到低依次為種子、花、莖、果皮、根；金花葵5個部位總皂苷含量平均值為10 000～12 000 μg/g，差異不顯著；總黃酮在金花葵不同部位分布從高到低依次為花、莖、果皮、根、種子。金花葵花的多糖、總黃酮含量在5個部位中均為最高，且顯著高于其他部位；甘露醇含量僅次于種子，總皂苷含量與其他部位并無差異，說明金花葵花是較理想的藥用部位。

2.2金花葵不同部位核苷類成分含量

從表2可以看出，金花葵不同部位所含有的8種核苷類成分種類不盡相同，而且含量差別也較大，其中2′-脫氧腺苷均未檢出。尿苷、鳥苷和腺嘌呤在5個部位均有分布，其中金花葵花的尿苷含量最高，為735.251 μg/g；金花葵種子鳥苷含量最高，為864.600 μg/g；金花葵花的腺嘌呤含量最高，達(dá)315.466 μg/g；而肌苷僅在金花葵根中檢出，含量較低，僅為69.840 μg/g。檢測的8種核苷類成分總含量中，金花葵不同部位從高到低依次為花、種子、根、莖、果皮。

2.3金花葵不同部位功效成分Q-聚類分析從圖1可以看出，與大支分開的是花，其余4個部位的化學(xué)成分含量聚為一支；其中根、果皮和莖又聚為一支。

3討論

金花葵在200多個秋葵植物中最具食用、藥用、保健價值[6]，含有黃酮類、多糖、甘露醇、不飽和脂肪酸、微量元素等活性成分[9]。目前金花葵黃酮類成分藥理研究較多，但金花葵總皂苷、核苷類等其他活性成分缺乏深入研究，且多種活性成分含量分布有待明晰。因此該研究針對不同部位檢測了多糖、甘露醇、總皂苷、總黃酮及8種核苷類物質(zhì)，共12種化學(xué)成分，較為全面地對金花葵的活性成分進(jìn)行分析，且明確了化學(xué)成分在不同部位的分布。

藥理試驗(yàn)證明，多糖、皂苷、黃酮類化合物以及核苷類成分均有抗氧化損傷、延緩衰老、抗腫瘤、抗癌抗菌、抗炎癥等生物活性作用[10-19]；甘露醇具有利尿、降低顱內(nèi)壓和眼內(nèi)壓、鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘等功效[20]。該研究結(jié)果顯示，金花葵花中多糖含量最高，達(dá)83 104.46 μg/g，且顯著高于其他部位；金花葵種子中甘露醇含量為32 561.17 μg/g，金花葵花的甘露醇含量為6 490.31 μg/g，顯著高于根、莖和果皮中甘露醇的含量，而其余3個部位甘露醇含量差異不顯著；總皂苷在檢測的5個部位中分布無顯著差異，平均含量在10 000～12 000 μg/g；金花葵花中總黃酮含量最高，達(dá)22 299.62 μg/g，其余部位總黃酮含量均低于4 000.00 μg/g，說明金花葵花是較好的總黃酮來源。在檢測的8種核苷類成分中，金花葵花的核苷類成分總量最高，達(dá)1 937.731 μg/g。同時Q-聚類分析顯示，金花葵花的化學(xué)成分含量與其他部位區(qū)別較高。另外有研究表明，金花葵不同部位金絲桃苷含量從高到低依次為花、葉、莖、根、種子[21]；而種子中的微量元素含量普遍高于花[22]，同時金花葵種子含有豐富的不飽和脂肪酸[23]。

綜上所述，金花葵花的有效化學(xué)成分含量較高，特別是總黃酮含量豐富，是較理想的藥用部位；同時金花葵花的化學(xué)成分含量與其他部位差別較大，因此對金花葵整株入藥或是花單獨(dú)入藥應(yīng)制定不同的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。而且根據(jù)不同的治療目的，可以選用不同部位的金花葵入藥以提高治療效果。鑒于金花葵含有眾多化學(xué)成分，應(yīng)對其生理活性、作用機(jī)理等做進(jìn)一步深入研究，為今后金花葵的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

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