王 波

(西安文理學院生物與環(huán)境工程學院基因工程實驗室， 陜西 西安 710065)

青風藤水煎液對蟾蜍坐骨神經(jīng)干電生理的影響*

王 波△

(西安文理學院生物與環(huán)境工程學院基因工程實驗室， 陜西 西安 710065)

目的探索青風藤對蟾蜍離體坐骨神經(jīng)干電生理特性的影響。方法40只蟾蜍隨機分成4組：任氏液對照組和青風藤低、中、高劑量組(0.2、0.10、0.05 g/ml)(n=10)，通過RM6240C多道生理信號采集處理系統(tǒng)記錄其在不同濃度青風藤水煎分別浸泡15 min和30 min時，動作電位的傳導速度、幅度和動作電位閾強度。結(jié)果與對照組相比，高劑量組的神經(jīng)干動作電位的傳導速度顯著減慢(P<0.01)，中、高劑量組的幅度顯著降低(P<0.01)，高劑量組的動作電位閾強度顯著增大(P<0.01)。結(jié)論動作電位傳導速度、幅度與青風藤劑量呈負相關(guān)，動作電位閾強度與青風藤劑量呈正相關(guān)。青風藤水煎液降低坐骨神經(jīng)的興奮性，阻滯動作電位的傳導，可能發(fā)揮抑制坐骨神經(jīng)痛的作用。

青風藤；坐骨神經(jīng)；動作電位；蟾蜍

青風藤(CaulisSinomenii)為多年生木質(zhì)藤本為防己科植物青藤、華防己或清風藤科植物清風藤等的干燥藤莖。青風藤味苦性平, 歸肝、脾經(jīng)。傳統(tǒng)醫(yī)學認為具有祛風濕、通經(jīng)絡、鎮(zhèn)痛、利小便之功效，用于治療風濕痹痛、關(guān)節(jié)腫痛、麻痹瘤癢、水腫等[1]。近年來，隨著青風藤具有抗炎[2, 3]、對嗎啡成癮后催促戒斷[4]以及保護腎臟[5]和心臟[6]等作用不斷發(fā)現(xiàn)，青風藤藥理學研究受到越來越多的關(guān)注。本文以蟾蜍坐骨神經(jīng)為研究對象，觀察在離體條件下青風藤對坐骨神經(jīng)干電生理的影響，進一步認識青風藤對坐骨神經(jīng)的作用機制，為其治療坐骨神經(jīng)痛的臨床應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

中華蟾蜍(Bufogargarizans)，體重(50.1±12.1)g，雌雄兼用，由西安文理學院動物中心提供。

1.2 材料

青風藤成藥(青藤堿含量約為95%)由西安市第五醫(yī)院提供。將青風藤成藥制成水煎液，于60℃以下水浴濃縮，制成1 g/ml 浸膏，冰箱保存?zhèn)溆?；浸泡時根據(jù)實驗確定劑量進行稀釋。RM6240多道生理信號采集處理系統(tǒng)(RM6240C，成都儀器廠)，神經(jīng)屏蔽盒(南京六合泉水教學實驗器材廠)。

1.3 實驗方法

蟾蜍40只隨機分組，通過常規(guī)方法[7]分離蟾蜍雙側(cè)后肢坐骨神經(jīng)干。先置于任氏液中穩(wěn)定15 min，然后隨機分成對照組(正常任氏液)、青風藤高、中、低劑量組分別任氏液為溶劑稀釋為0.2、0.10、0.05 g/ml(n=10)。每組坐骨神經(jīng)干分別浸泡在刺激液(對照為任氏液，實驗組分別是不同劑量青風藤溶液)15、30 min兩個時間段，然后將標本放置于神經(jīng)屏蔽盒中，中樞端標本接觸刺激電極，外周端接觸引導電極，分別記錄神經(jīng)干的動作電位的傳導速度、幅度(上下相總和)[8]及閾強度(測定神經(jīng)干興奮性的指標：興奮性=1/閾強度)。為保證測量條件的一致性，測量放置神經(jīng)干的位置需前后一致、環(huán)境溫度及濕度均保持恒定，全部檢測由同一人操作進行。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1青風藤溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)干動作電位傳導速度的影響

當浸泡15 min時，與對照組相比，隨著青風藤水煎液濃度的增大，神經(jīng)干動作電位傳導速度逐漸減小，中劑量組和高劑量組后動作電位傳導速度減小，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)；浸泡30 min時與對照組相比，低、中、高劑量組，傳導速度均顯著減少(P<0.05，P<0.01)。在同一條件下，青風藤水煎液對傳導速度的減緩具有劑量依賴性降低(P<0.05，P<0.01)。重復測量方差分析發(fā)現(xiàn)，與浸泡前相比，低劑量組和中劑量組浸泡15 min和30 min時動作電位傳導速度顯著減慢(P<0.05)，高劑量組浸泡15 min和30 min以后動作電位傳導速度出現(xiàn)極顯著的降低(P<0.01，表1)。

GroupBeforeimmersionImmersiontime15min30minControl15．57±2．4514．41±1．6115．43±1．99Lowdose15．69±1．9913．61±2．20?11．78±1．83?#△Middledose16．65±1．9312．47±1．21?#10．32±1．42??#△Highdose14．32±2．017．41±1．25??##5．63±1．37??##△△

*P<0.05,**P<0.01vsbefore immersion;#P<0.05,##P<0.01vsthe control group;△P<0.05,△△P<0.01vslow dose group

2.2青風藤溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)干動作電位幅度的影響

當分別浸泡15 min和30 min時，隨著青風藤劑量增加，動作電位的幅度逐漸顯著減小(P<0.05，P<0.01)；中、高劑量組之間動作電位幅度無明顯差異。低劑量組在15 min和30 min時動作電位幅度顯著降低(P<0.05)，而中、高劑量組的坐骨神經(jīng)干動作電位幅度出現(xiàn)極顯著降低(P<0.01)。在同一浸泡時間時，青風藤水煎液對動作電位幅度的減小與劑量呈負相關(guān)(P<0.05，P<0.05)。同一劑量的條件下，與浸泡前相比，低劑量組浸泡15 min和30 min時動作電位傳導速度顯著減慢(P<0.05)，中劑量組和高劑量組浸泡15 min和30 min以后動作電位傳導速度出現(xiàn)極顯著的降低(P<0.01，表2)。

GroupBeforeimmersionImmersiontime15min30min Control4．32±0．684．15±0．343．96±0．68Lowdose5．13±0．523．35±0．68?#3．07±0．45?#Middledose4．07±0．922．38±0．39??##2．22±0．67??##△Highdose4．94±0．541．33±0．34??##0．94±1．28??##△

*P<0.05,**P<0.01vsbefore immersion;#P<0.05,##P<0.01vscontrol group;△P<0.05vslow dose group

2.3青風藤溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)干動作電位閾強度的影響

隨著青風藤水煎液濃度的增大，動作電位閾強度逐漸增大，低劑量組動作電位的閾強度在浸泡15 min時無明顯變化，而在低劑量浸泡30 min時和中劑量組15 min時顯著增大(P<0.05)，中劑量組在浸泡30 min和高濃度組閾強度呈現(xiàn)極顯著增大(P<0.01)，而且動作電位的閾強度增大呈劑量依賴性降低(P<0.01，P<0.05)。同一劑量的條件下，與浸泡前相比，低劑量組浸泡30 min時和中劑量組浸泡15 min是動作電位閾強度顯著增加(P<0.05)，中劑量組浸泡30 min和高劑量組浸泡15 min和30 min以后動作電位傳導速度出現(xiàn)極顯著的降低(P<0.01，表3)。

GroupBeforeimmersionImmersiontime15min30minControl0．79±0．040．79±0．080．81±0．06Lowdose0．73±0．040．74±0．060．86±0．03?Middledose0．75±0．030．86±0．05?#0．97±0．03??#△Highdose0．76±0．041．00±0．08??##1．21±0．04??##△

*P<0.05,**P<0.01vsbefore immersion;#P<0.05,##P<0.01vsthe control group;△P<0.05vslow dose group

3 討論

我國對單味藥青風藤的研究起步較早。青風藤的有效成分為青藤堿、青風藤堿、雙青藤堿等，其中青藤堿是青風藤主要藥效成分，其他成分作用報道甚少。由于青藤堿化學結(jié)構(gòu)及鎮(zhèn)痛作用與嗎啡相似且無成癮性，故其在臨床上常用于止痛。雙氯芬酸為非甾體類化合物，是經(jīng)典的鎮(zhèn)痛藥物，一般作為青風藤藥效的平行藥物[9]。但本實驗僅檢測了青風藤對神經(jīng)干電生理特性的作用，沒有以鎮(zhèn)痛效應為藥效指標本，故沒有選擇使用平行藥物。目前青風藤對中樞有明顯的抑制作用已有報道[10]。但對外周神經(jīng)系統(tǒng)的作用未見報道。本研究首次報道了青風藤外周神經(jīng)坐骨神經(jīng)干的作用，對于該藥物的深層次研究起到推進作用。

坐骨神經(jīng)干動作電位的電生理特性能夠反映出神經(jīng)傳導功能的變化，本實驗采用青風藤水煎液浸泡檢測離體蟾蜍坐骨神經(jīng)干電生理特性變化，能反映且易于定量檢測，精確可靠。實驗發(fā)現(xiàn)，浸泡青風藤不同劑量、不同時間都導致坐骨神經(jīng)的電生理特性發(fā)生改變，使蟾蜍坐骨神經(jīng)傳導速度減慢并降低其幅度，其中高劑量組在30 min的作用顯著，提示高劑量長時間作用能更有效的降低坐骨神經(jīng)的興奮性。已有研究發(fā)現(xiàn)青藤堿的抗心律失?？赡軐κ壹〖毎c離子電流(INa)具濃度和頻率依賴性阻滯作用[11]。已有實驗表明，高滲鹽液對C類纖維動作電位的抑制作用可能是其產(chǎn)生臨床鎮(zhèn)痛效應的因素[12]。本實驗使用的青風藤水煎液雖然不是高滲溶液，但可能也是通過改變神經(jīng)，尤其是C類纖維的興奮維持的內(nèi)環(huán)境，使神經(jīng)纖維興奮的數(shù)量較少，因此神經(jīng)干復合動作電位的幅度減小，引起動作電位的閾強度增大。但在本實驗中尚未進一步細化A類和C類纖維來探討青風藤對這兩類神經(jīng)纖維的作用，有待進一步分離神經(jīng)干來檢測。

坐骨神經(jīng)痛主要是坐骨神經(jīng)局部及周圍結(jié)構(gòu)的病變對坐骨神經(jīng)的刺激壓迫與損害導致。目前坐骨神經(jīng)的傳導速度和動作電位幅度已被用來評價坐骨神經(jīng)損傷修復的觀察指標[13]，而且周昊等[14]已發(fā)現(xiàn)青風藤對坐骨神經(jīng)痛有較好療效。鎮(zhèn)痛作用主要體現(xiàn)在對“慢痛”的抑制方面，而神經(jīng)干中的C類纖維主要傳導“慢痛”。本實驗發(fā)現(xiàn)一定劑量的青風藤阻滯神經(jīng)沖動的傳導，提示青風藤治療坐骨神經(jīng)痛的機制之一可能是通過降低坐骨神經(jīng)中C類纖維細胞膜上的鈉離子通道的通透性，這可能是其發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應的電生理學基礎。

綜上所述，青風藤水煎液對坐骨神經(jīng)神經(jīng)興奮性表現(xiàn)出明顯地降低，表現(xiàn)為傳導速度減慢，幅度減小和閾電位強度的增大。這為今后青風藤治療坐骨神經(jīng)痛提供了新的思路，但具體機制有待進一步研究。

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EffectsofCaulisSinomeniidecoctiononelectrophysiologicalcharacterofsciaticnervetrunkoftoad

WANG Bo△

(Genetic Engineering Laboratory, College of Biological and Environmental Engineering, Xi’an University, Xi’an 710065, China)

Objective: To investigate the effects ofCaulisSinomenii(traditional Chinese medicine) on electrophysiological character of sciatic nerve trunk of toad.MethodsForty toads were randomly divided into four groups: Ringer’s solution (as a control group) and three experimental groups were treated with 0.20, 0.10, 0.05 g/mlCaulisSinomeniidecoction, each group was soaked for 15 and 30 min respectively. The conduction velocity, amplitude and threshold intensity of the sciatic nerves from each group were measured by RM6240C Physiological signals recording system．ResultsCompared with the control group, the conduction velocity in high dose group was significantly decreased(P<0.01), the amplitude of the action potential in medium and high dose groups were lower(P<0.01); but the threshold intensity of the nerve trunk action potential in high dose group was increased significantly compared with that in control group (P<0.01).ConclusionTheCaulisSinomeniidecoction can reduce the excitability sciatic nerve stem of toad and block the conduction of the action potential, which may play important roles in inhibiting of sciatica.

CaulisSinomenii； sciatic nerve； action potential;Bufogargarizans

Q422

A

1000-6834(2017)04-377-03

西安市科技計劃項目--西安文理學院科研創(chuàng)新基金專項項目(CXY1531WL17)

2016-06-20

2017-02-07

△

Tel: 15349270700; E-mail: wangb 2013@ 163.com

10.12047/j.cjap.5465.2017.091