玉露增殖培養(yǎng)試驗報告

應(yīng)冬勤　陳依桃　林昱

摘要：以玉露的幼嫩花為試材進行增殖培養(yǎng)試驗，結(jié)果表明，玉露適宜分化增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L，芽多苗壯，生根培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L，生根快，10天生根率達86%。玉露試管苗移栽基質(zhì)以過篩的沙壤土：草糞=2：1為宜，栽后少澆水并遮蔭，移栽成活率達90%以上。

關(guān)鍵詞：玉露；莖尖培養(yǎng)；增殖培養(yǎng)

1試驗材料

玉露的幼嫩花莖。

2試驗方法

2.1無菌材料的獲得 將選取的玉露幼嫩花莖小心剝?nèi)グ~，先用適量的洗潔精清洗，倒去洗滌劑，然后流水沖洗2h。在超凈工作臺上用75%的酒精浸泡60s，無菌水沖洗2-3次后，再用0.1%HgCI浸泡3-5min，并添加1滴吐溫；然后用無菌水沖洗4-5次。將消毒后的材料置于無菌盤內(nèi)，剪切成1cm左右的小段，放入無菌錐形瓶中封好瓶口備用。

2.2培養(yǎng)基的篩選 以MS基本培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在多次試驗的基礎(chǔ)上，確定誘導培養(yǎng)基：MS+NAA0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L；增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；生根培養(yǎng)基：I/2MS+NAA0.25mg/L，以上培養(yǎng)基均添加3%的蔗糖，6%的瓊脂，pH5.8。

2.3培養(yǎng)條件 培養(yǎng)溫度（25±2）℃，光照強度2000-3000Lx，光照時間12h/d，大約15-25d后，試管中接種的外植體就可以膨大，形成愈傷組織。愈傷組織的形成標志著接種的外植體的生長狀態(tài)已脫離分化狀態(tài)，開始重新恢復分生能力。愈傷組織形成1周后，就可將愈傷組織轉(zhuǎn)管進行繼代培養(yǎng)或分化培養(yǎng)。

2.4愈傷組織繼代培養(yǎng) 將愈傷組織在接種室無菌環(huán)境下，從玻璃瓶中取出，用鑷子和解剖刀清除附著在愈傷塊上的培養(yǎng)基，直到愈傷塊上無殘留培養(yǎng)基為止。然后用解剖刀將愈傷組織切成小塊，再接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基的玻璃瓶中，在與誘導愈傷組織相同的培養(yǎng)基下繼續(xù)培養(yǎng)。幾天后，玻璃瓶中的小愈傷塊即可逐漸長大。通過愈傷組織的繼代培養(yǎng)，原來接種的1個玉露莖尖組織可以繁殖出大量的新組織，這些新材料可用于分化培養(yǎng)。

2.5愈傷組織分化培養(yǎng) 在無菌環(huán)境下，將愈傷組織從玻璃瓶中取出，用鑷子和解剖刀剔除組織上的培養(yǎng)基，并切成小接種塊接種到分化培養(yǎng)基的玻璃瓶中，分化培養(yǎng)的條件和愈傷組織培養(yǎng)相同。大約30-50d后，愈傷組織就可以分化出芽，并長出新葉片。當幼苗分化出一定數(shù)量或長到一定高度后，將這些小幼苗在無菌室取出，進行下一步的生根培養(yǎng)或重新誘導分化。

2.6誘導生根培養(yǎng) 當玻璃瓶中幼苗的葉片長到3cm左右時，將幼苗在無菌室取出，放人生根培養(yǎng)基玻璃瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件與分化培養(yǎng)相同。大約半個月左右，幼苗便可以生根。

2.7煉苗 幼苗具有2-3條根，根長1-2cm時，幼苗的形體已顯健壯，便可將幼苗取出轉(zhuǎn)移至溫室或塑料大棚內(nèi)。用清水清洗附在幼苗根上的殘留培養(yǎng)基（注意：一定要清洗干凈，否則會導致爛根）。將洗干凈的幼苗整齊地排好，用清水噴濕，在溫度15-25℃、濕度60%-80%的條件下煉苗24h，也可視情況而定縮短為12h。當幼苗莖葉顏色加深，根系顏色變?yōu)辄S褐色并延長、伴有新根長出時表示煉苗成功。

2.8移栽 煉苗后，將幼苗進行移栽。先在由蛭石組成的馴化苗圃中進行馴化，每天定時給幼苗噴施培養(yǎng)液和清水，大約15-20d后，便可移栽至基質(zhì)以過篩的沙壤土：草糞=2：1的苗圃中。根據(jù)幼苗大小在苗圃中劃出深1-3cm的小溝，深度以葉片不接觸基質(zhì)為宜，株距以苗不相互接觸為宜，以細霧狀噴水，基質(zhì)表面不積水為度。成活率達90%以上。

3結(jié)果分析

3.1叢生芽的誘導

把2-3cm的玉露幼芽接種于6種不同增殖培養(yǎng)基內(nèi)，20d基部變黑，出現(xiàn)淡黃色幼芽原基，30d以后發(fā)育成芽，50d左右可以分切，進行繼代培養(yǎng)。表1為接種50d的結(jié)果。結(jié)果表明，玉露分化增殖培養(yǎng)中，以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA濃度1.0mg/L，NAA 0.5mg/L為宜，叢生芽多而壯，是玉露最佳的分化增殖培養(yǎng)基，單芽增殖了17個，苗高為5.2cm，6號培養(yǎng)基的幼苗有玻璃化現(xiàn)象。

3.2玉露生根培養(yǎng) 將叢生芽分切成單芽，接種于6種培養(yǎng)基內(nèi)，每瓶接種4個芽，每種培養(yǎng)基接種30瓶，并觀察其生根情況。在接種后10d、15d、50d觀察玉露生長發(fā)育情況。結(jié)果表明，3號和5號培養(yǎng)基生根最快，4號培養(yǎng)基生根最晚；1號、2號、3號培養(yǎng)基苗長勢一般，4號、5號6號培養(yǎng)基苗較鍵壯。說明玉露生根培養(yǎng)要求營養(yǎng)元素以MS為宜，1/2MS表現(xiàn)營養(yǎng)不足，添加生長素NAA的濃度不宜超0.3mg/L較好，濃度過高會抑制根的分化生長。最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L，接種10天生根率達86%。

3.3移栽后的管理 苗床基質(zhì)保持濕潤，避免積水，以防爛根。每月施1次腐熟的稀薄液肥和0.1%多菌靈混合液。施肥時注意肥水不要濺到葉上，否則會形成斑點，影響觀賞。夏季高溫時植株呈半休眠狀態(tài)，生長緩慢或停滯，可移至通風、涼爽處養(yǎng)護，避免暴曬和長期淋雨，不可澆水過多，停止施肥。玉露對光線較敏感，若光照較強會導致葉片生長不良呈淺紅褐色；栽培場所太過于蔭蔽，又會造成株形松散、不緊湊，葉片透明度變差；在半陰處生長的植株，葉片相對會比較肥厚、飽滿，透明度也會增高，因此可以放在光線明亮，無直射陽光的地方進行養(yǎng)護，入秋天氣涼爽后可恢復正常的肥水管理。冬天要求充足的光照，如果最低溫度不低于13℃，可以繼續(xù)澆水，讓植株生長，但是不要施肥。

4討論與結(jié)論

玉露分化增殖培養(yǎng)中，以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA 1.0mg/L，NAA 0.5mg/L為宜，叢生芽多而壯。

玉露較易生根，有無激素均能長根，但生根的快慢和多少各不相同。試驗結(jié)果表明，玉露生根培養(yǎng)以MS為基本培養(yǎng)基，1/2MS表現(xiàn)營養(yǎng)不足，添加生長素NAA的濃度不宜超0.3mg/L，過高抑制根的分化生長。最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L，接種10天生根率達86%。玉露試管苗移栽基質(zhì)以過篩的沙壤土：草糞=2：1為宜，栽后少澆水并遮蔭，移栽成活率達90%以上。