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    雞源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

    2017-10-11 02:54:58金福源朱國良江蘇省蘇州市吳江區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所盛澤分所215200
    中國畜禽種業(yè) 2017年7期
    關(guān)鍵詞:阿莫西林硫酸耐藥性

    金福源 朱國良(江蘇省蘇州市吳江區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所盛澤分所 215200)

    姚小兵 陳永中 李明觀 徐國東(江蘇省蘇州市吳江區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所黎里分所 215200)

    夏曉潮(廣東省茂名市林業(yè)有害生物防治檢疫管理辦公室 525000)

    雞源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

    金福源 朱國良(江蘇省蘇州市吳江區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所盛澤分所 215200)

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    雞大腸桿菌病是雞感染致病性大腸桿菌后所引發(fā)的局部或者全身性敗血癥癥狀的疾病,臨床菌株易對抗生素藥物產(chǎn)生耐藥性,實驗數(shù)據(jù)表明,除頭孢喹肟和硫酸粘菌素外,大多數(shù)臨床分離株都對所選藥物產(chǎn)生一定耐藥;藥敏試驗表明,復(fù)方類抗生素相比單方抗生素對大腸桿菌病的治療效果要明顯;臨床上遇到本病時建議在成本可控的范圍內(nèi)采用復(fù)方類抗生素或聯(lián)合用藥的方案進行治療。

    雞;大腸桿菌;藥敏試驗;耐藥性;分析

    大腸桿菌為革蘭氏染色呈陰性、中等大小的桿菌,需氧或微厭氧,在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長良好,在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上可長成紅色菌落,在伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基上形成黑色帶金屬光澤的菌落。目前針對大腸桿菌病的防治措施是使用抗菌藥物。由于抗生素大量使用以及耐藥菌株的不斷增加,大腸桿菌感染的趨勢不但沒有下降反而有所上升,給廣大養(yǎng)殖戶帶來較大損失。筆者通過對全國規(guī)?;B(yǎng)殖場的疑似大腸桿菌病的發(fā)病雞進行菌株分離鑒定,經(jīng)藥敏試驗篩選出對大腸桿菌敏感的藥物供大家選擇,并就雞源大腸桿菌的耐藥情況給大家作一下交流。

    1 本病流行特點及防治現(xiàn)狀

    雞大腸桿菌病是臨床嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)的細菌病之一,可導(dǎo)致雞急性敗血癥、氣囊炎、關(guān)節(jié)滑膜炎、全眼球炎、輸卵管炎、腹膜炎、臍炎和腫頭腫臉綜合征等病癥,尤其以蛋雞和雛雞發(fā)病更為嚴重。雞感染后,一般不單獨發(fā)病,往往繼發(fā)于新城疫、馬立克氏病、傳染性支氣管炎等病毒性疾病。本病發(fā)病率較高。在雞群中可達11~69%,死亡率為3.2~72.9%,給養(yǎng)殖戶帶來較大的經(jīng)濟損失。

    上世紀50年代禽致病性大腸桿菌幾乎沒有耐藥性,60年代的分離株對鏈霉素、四環(huán)素產(chǎn)生耐藥性,70年代對氨芐西林,氯霉素,磺胺甲基異惡唑等產(chǎn)生耐藥性,80年代至90年代對阿莫西林、慶大霉素、卡那霉素、萘啶酸、頭孢噻吩等產(chǎn)生耐藥性。隨著時間推移,大腸桿菌的耐藥率大幅度上升,多重耐藥菌株劇增,耐藥譜增寬。

    2 臨床菌株的分離以及藥敏試驗

    對來自全國各地區(qū)的疑似雞大腸桿菌病的病例進行臨床診斷,并無菌采集典型患雞的心、肝、脾、十二指腸等病料進行分離鑒定和藥敏試驗,具體過程如下。

    2.1 分離培養(yǎng)

    取病料無菌操作,分別畫線接種于血平板、伊紅美藍和麥康凱培養(yǎng)基上,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16~24h,觀察單個菌落的生長情況。

    2.2 進一步分離純化

    挑取單個菌落接種至伊紅美藍和麥康凱培養(yǎng)基上進一步分離純化,37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16~24h后觀察結(jié)果。

    2.3 涂片染色鏡檢

    取分離純化后的單個菌落進行涂片,革蘭氏染色,在油鏡下觀察細菌的形態(tài)及染色特性。

    2.4 菌液配置

    取分離純化后的單個菌落,無菌接種于2ml的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中37℃震蕩培養(yǎng)16h得到菌液。

    2.5 藥敏試驗

    按K2B紙片擴散法將被檢細菌無菌接種于普通瓊脂平板上,間隔一定距離,然后用無菌鑷子將藥敏紙片放于固體培養(yǎng)基表面并輕壓,使紙片與培養(yǎng)基表面完全緊貼。避免出現(xiàn)抑制圈重疊。一般各紙片中心相距應(yīng)大于24mm,可在平皿中央貼一片,外周等距離貼4片。貼完紙片的平皿靜置15min后再置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h,觀察并記錄抑菌圈的直徑,結(jié)果判斷依據(jù)《紙片法抗菌藥物敏感試驗操作標準(第4版)》進行。

    3 臨床菌株的鑒定及耐藥判定

    3.1 菌落的形態(tài)及培養(yǎng)特征

    在麥康凱和伊紅美藍培養(yǎng)基上在分離出呈圓形、邊緣整齊、隆起、呈紫黑色并帶有金屬光澤的菌落,在麥康凱培養(yǎng)基上形成中等大小、表面光滑濕潤的紅色菌落,符合大腸桿菌的菌落特征。

    3.2 鏡檢特征

    取單個菌落,涂片,經(jīng)革蘭氏法染色,普通光學顯微鏡下觀察,可見視野中的菌落均為兩端鈍圓,多數(shù)散在排列的革蘭氏陰性桿菌。

    3.3 藥敏判定標準

    將符合上述特征的菌株收集并進行藥敏試驗,依據(jù)抑菌圈直徑的大小來判定藥敏結(jié)果,敏感度根據(jù)表1來進行判斷。

    表1 藥敏試驗敏感性判定標準

    4 結(jié)果及分析

    4.1 單方藥物的藥敏結(jié)果及分析

    本次試驗分別對江蘇、廣東、北京、河南、河北等17個省市地區(qū)的130株大腸桿菌陽性菌株,選取市場上常見的治療大腸桿菌的抗生素進行藥敏試驗,結(jié)果如表2所示。其中,臨床分離的130株大腸桿菌,對阿莫西林、氨芐西林、林可霉素和氟苯尼考的耐藥率都達到了100%,頭孢喹肟對大腸桿菌最敏感,高敏菌株比例達100%,這可能與頭孢喹肟為四代頭孢類藥物,上市時間短且價格昂貴造成普及率不高有關(guān);其次為硫酸粘菌素,硫酸黏菌素對敏感菌的細胞膜具有較強的吸附作用,使細胞膜的表面張力降低,通透性增加,細胞膜破裂,菌體內(nèi)物質(zhì)外漏,導(dǎo)致細菌死亡;大觀霉素不具有高敏作用,中敏率為63.8%,耐藥率為36.2%。因此,從價格和藥物敏感性來講,單方藥物治療大腸桿菌病時,可優(yōu)先選用硫酸粘菌素。

    表2 單方藥物藥敏試驗結(jié)果

    4.2 復(fù)方藥物的藥敏結(jié)果及分析

    復(fù)方藥物通常指含有本身無抗菌活性但可增加主藥敏感性的活性成分,如舒巴坦本身無抗菌活性,但與內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)用后藥效增強幾倍甚至幾十倍。復(fù)方藥物的藥敏試驗結(jié)果如表3所示,可以看出,阿莫西林與克拉維酸合用后可使大腸桿菌對阿莫西林的耐受性從100%降低到6.9%,頭孢噻呋與舒巴坦合用可使大腸桿菌對藥物的耐受性從83.3%降低到30%,頭孢哌酮與他唑巴坦合用可使大腸桿菌對藥物的耐受性從63.3%降低到15%,氨芐西林與舒巴坦合用可使大腸桿菌對藥物的耐受性從100%降低到26.9%。阿莫西林西林克拉維酸合用對大腸桿菌的效果最好,頭孢噻呋舒巴坦合用,以及頭孢哌酮他唑巴坦合用效果也理想,但考慮到頭孢類產(chǎn)品價格較貴,宜首選阿莫西林克拉維酸。氨芐西林與舒巴坦與合用后效果不如其他3種方案,原因可能是有些大腸桿菌臨床菌株對其敏感性并未完全恢復(fù),同時也表明雞大腸桿菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥機制可能不止一種。

    表3 復(fù)方藥物藥敏試驗結(jié)果

    4.3 聯(lián)合用藥對大腸桿菌臨床菌株的敏感性分析

    兩種或兩種以上藥物同時使用,不僅可以增加抗生素對大腸桿菌的敏感性,還可以降低抗生素的用藥量。本試驗將阿莫西林與硫酸粘菌素、林可霉素與大觀霉素,氟苯尼考與多西環(huán)素,硫酸粘菌素與恩諾沙星等幾種抗生素兩兩聯(lián)合用藥后,對大腸桿菌臨床菌株產(chǎn)生明顯的抑制作用,結(jié)果如表4所示,可以看出阿莫西林與硫酸粘菌素、林可霉素和大觀霉素、氟苯尼考與多西環(huán)素、硫酸粘菌素與恩諾沙星合用以后,比各個藥物單用效果要好,聯(lián)用以后呈協(xié)同作用,尤其以硫酸粘菌素和恩諾沙星合用效果最佳,比各個藥物單用效果增強20多倍,雖然硫酸粘菌素單用時效果也很好,但是其對腎臟和神經(jīng)系統(tǒng)有一定副作用,因此,將硫酸粘菌素和其他抗生素聯(lián)合用藥,不僅可以增強療效,還可以減輕副作用,降低用藥成本。

    表4 聯(lián)合用藥藥敏試驗結(jié)果

    5 討論

    從全國分離的菌株藥敏試驗結(jié)果來看,雞源大腸桿菌都易產(chǎn)生不同程度的耐藥性,許多抗生素逐漸低效或無效,臨

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