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    不同海拔燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的含量分析

    2021-08-18 10:17:56王靜怡何耀瑩段紅吉武正才
    中國民族民間醫(yī)藥 2021年11期
    關(guān)鍵詞:燈盞海拔收率

    王靜怡 郭 昕 馮 春 楊 利 何耀瑩 段紅吉 武正才

    云南植物藥業(yè)有限公司,云南 昆明 650109

    燈盞細(xì)辛為菊科植物短葶飛蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.) Hard.-Mazz]的干燥全草,主要分布于我國云南、貴州、四川等地,從采集樣品的最低海拔695 m,到最高海拔4041.6 m均有生長,是一種民間常用中藥。燈盞細(xì)辛具有散寒解表、祛風(fēng)除濕、活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)等功效。臨床主要用于治療缺血性腦血管疾病、冠心病、心絞痛等癥,其療效較好,毒副作用小,運(yùn)用范圍廣。燈盞細(xì)辛主要有效成分為黃酮類化合物燈盞花乙素。由于不同海拔的燈盞細(xì)辛藥材中主成分燈盞花乙素含量差異較大,為了采收到質(zhì)量較好的藥材,對(duì)藥材產(chǎn)地的選擇十分重要。通過對(duì)不同海拔的藥材進(jìn)行研究比較,找到收購的最佳產(chǎn)地及較適合于種植燈盞細(xì)辛的地理位置。

    1 儀器和試藥

    Agilent-1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司),BUCHI Rotavapor R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪),BP221D電子分析天平(德國塞多利斯), HS6150D 超聲波清洗器 (天津恒實(shí)), 0.5~5.0、6.4~8.0精密pH試紙(上海三愛思試劑有限公司);燈盞花乙素對(duì)照品(中國食品藥品檢驗(yàn)研究院,批號(hào)110842-201508),乙醇(色譜純),其它試劑均為分析純。9批不同產(chǎn)地不同海拔燈盞細(xì)辛藥材樣品(詳見燈盞細(xì)辛藥材樣品來源表1)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 提取方法工藝流程 燈盞細(xì)辛粉→乙醇回流→減壓濃縮→堿溶除膠→濾過→酸沉→濾過→沉淀醇溶→干燥→粗品→精制→成品。

    2.2 提取操作方法 取燈盞細(xì)辛粉200 g,用70%的乙醇回流提取3次(溶劑倍量5 N、5 N、4 N,回流時(shí)間2 h、2 h、1 h),減壓濃縮至(浸膏∶生藥=1∶1),用飲用水稀釋至浸膏2倍量,用10%NaOH溶液調(diào)pH7.0~7.2,靜置過夜,膠質(zhì)用120目篩網(wǎng)濾除,濾液用10%H2SO4調(diào)pH2.0~2.5,靜置過夜,濾過,沉淀用乙醇洗滌,干燥即得燈盞花素粗品。粗品用20倍純化水溶解,用10%NaOH溶液調(diào)pH 7.0~7.2,濾過,濾液用10%H2SO4調(diào)pH 2.0~2.5,靜置過夜,濾過,沉淀用少量乙醇洗滌,干燥即得燈盞細(xì)辛提取物。

    表1 燈盞細(xì)辛藥材樣品來源

    2.3 含量方法學(xué)考察與結(jié)果

    2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18,250 mm×4.6 mm,5 μm十八烷基鍵合硅膠色譜柱。流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶60),流速為每分鐘1.0 mL;柱溫40 ℃;檢測(cè)波長335 nm。理論塔板數(shù)按燈盞花乙素峰計(jì)算不得低于5000。

    2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取燈盞花乙素對(duì)照品10 mg,精密稱定,置100 mL量瓶中,加甲醇70 mL,超聲處理(功率300 W,頻率50 KHz)45 min,取出,放置室溫,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。

    2.3.3 供試品溶液的制備 取本品10 mg,精密稱定,置100 mL量瓶中,加甲醇70 mL,超聲處理(功率300 W,頻率50 KHz)45 min,取出,放置室溫,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取燈盞花乙素對(duì)照品約10 mg置100 mL量瓶中,加甲醇適量,超聲處理,以甲醇定容,取1、5、10、15、20 mL分別置于25 mL量瓶中,用甲醇定容,精密吸取5 μL,按色譜條件依次進(jìn)樣,記錄峰面積,以濃度(X)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,燈盞花乙素的回歸方程為Y=490816X+7770.9(r=0.9991),說明燈盞花乙素在0.2~4.0 μg線性良好。

    2.3.5 精密度考察 取燈盞花乙素對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得峰面積,其RSD為0.69%,方法精密度良好。

    2.3.6 重復(fù)性考察 取同一供試樣品6份,精密稱定,按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行含量測(cè)定。測(cè)得供試品RSD為1.79%,表明供試品的重現(xiàn)性良好。

    2.3.7 穩(wěn)定性考察 取同一燈盞細(xì)辛樣品溶液,分別在0、1、2、4、6、8 h依次注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析,結(jié)果RSD為1.97%,表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

    2.3.8 加樣回收率考察 精密稱取已知含量的燈盞細(xì)辛提取物樣品(3#號(hào)樣品)6份,分別精密加入一定量的燈盞花乙素對(duì)照品,按2.3.3制備供試品溶液,根據(jù)色譜條件進(jìn)樣,平均回收率為98.73%,RSD為1.08%,表明該方法回收率較好,方法可行。

    表2 加樣回收率

    2.3.9 樣品含量測(cè)定 取不同海拔的燈盞細(xì)辛提取物樣品,按照含量測(cè)定 “2.3.3”方法制備供試品溶液,分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 μL,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。

    3 結(jié)果

    3.1 不同海拔的燈盞細(xì)辛藥材中提取燈盞花乙素的收率及含量 相關(guān)數(shù)據(jù)詳見表3。

    表3 樣品結(jié)果

    3.2 不同海拔燈盞細(xì)辛藥材中提取的燈盞花乙素收率折線圖 如圖1所示。

    3.3 不同海拔燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素含量圖 如圖2所示。

    4 討論

    從圖1可以看出,海拔在1100~2126 m之間生長的4個(gè)燈盞細(xì)辛樣品中燈盞細(xì)辛提取物的提取收率為8‰~12‰,收率較高。海拔在1000 m以下2162 m以上生長的燈盞細(xì)辛樣品中燈盞細(xì)辛提取物的提取收率為5‰~8‰,收率較低。從圖2可以看出海拔在1100~2126 m之間生長的四個(gè)燈盞細(xì)辛藥材中盞花乙素的含量為3.4%~5.3%,海拔在1000 m以下2162 m以上生長的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的的含量為1.8%~3.3%。

    本研究證明,不同海拔生長的燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的提取收率及含量有差異,且摸索出海拔較低或者海拔較高的地方生長的燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的提取收率和含量都不高,海拔在1000~2000 m左右生長的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素含量較高。適合種植燈盞細(xì)辛的最佳地理位置為海拔在1000~2000 m左右的地方。

    各地收購的季節(jié)與當(dāng)?shù)氐牡乩砦恢糜嘘P(guān),溫差、陽光照射時(shí)間都會(huì)影響燈盞細(xì)辛的采收時(shí)間。為了研究不同海拔生長的燈盞細(xì)辛中對(duì)燈盞花乙素的含量,在采收時(shí)期和采收地點(diǎn)應(yīng)盡可能統(tǒng)一,采收時(shí)期都選擇盛花期,采收的地點(diǎn)都選擇向陽坡地。

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