談化工檢驗(yàn)薄層色譜分離技術(shù)

尹輝

摘 要：薄層色譜與紙色譜相比，具有分析時(shí)間較短、分離能力較強(qiáng)，檢出靈敏度較高的特點(diǎn)。薄層色譜實(shí)現(xiàn)了儀器化，自動化程度提高，測定精度及靈敏度都有很大提高，至今仍充滿活力。

關(guān)鍵詞：化工；檢驗(yàn)；薄層；色譜；分離技術(shù)

平面色譜法又包括紙色譜法和薄層色譜法。薄層色譜法是用載板上涂布或燒結(jié)一薄層物質(zhì)作為固定相的液相色譜法。應(yīng)用最多的是以硅膠為固定相的吸附薄層色譜法。

薄層色譜與紙色譜相比，具有分析時(shí)間較短、分離能力較強(qiáng)，檢出靈敏度較高的特點(diǎn)。60年代以來已取代了部分紙色譜的工作。又由于薄層色譜實(shí)現(xiàn)了儀器化，自動化程度提高，測定精度及靈敏度都有很大提高，至今仍充滿活力。

1 薄層色譜分離原理

將樣品溶液點(diǎn)于預(yù)先涂布有固定相（如硅膠）薄層板一端適當(dāng)?shù)奈恢?，將板置于層析缸中，使點(diǎn)有試樣的一端浸人流動相（展開劑）中，由于薄層的毛細(xì)管作用，展開劑沿薄層漸漸上升，試樣的各組分沿著薄層在固定相和流動相之間不斷發(fā)生溶解、吸附、再溶解、再吸附。由于各組分的分配系數(shù)不同使它們在薄層上移動的距離也不同，從而達(dá)到分離。展開劑上升到一定距離時(shí)，從層析缸中取出薄層板。如果組分是有色的，就可以看到各個色斑，如果組分無色，要用物理的或化學(xué)的方法顯色，得到一個薄層色譜圖。

2 薄層色譜操作方法

薄層色譜的實(shí)驗(yàn)步驟有：制板、點(diǎn)樣、展開、顯色、定性和定量。

2.1 薄層板的制備

將平板玻璃裁成正方形或長方形，一般分析用20cm×20cm和20cm×10cm兩種。將玻璃片洗凈烘干。通常采用濕法制板，它具有薄層牢固、可批量制備、展開后便于保存、分離效果好等優(yōu)點(diǎn)。

2.2 點(diǎn)樣

樣品用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑制成溶液，濃度約為0.5～2mg/mL。點(diǎn)樣量為0.5-5uL，在距薄層板底邊1cm處點(diǎn)樣，原點(diǎn)直徑在3～4mm。手工點(diǎn)樣用微量注射器。如用點(diǎn)樣儀點(diǎn)樣，樣量精確、形狀整齊一致，能提高定量分析的準(zhǔn)確度。

2.3 展開

展開的實(shí)驗(yàn)操作是，將點(diǎn)樣后的薄層板置于密閉的層析槽中，下端浸入展開劑高度不應(yīng)超過0.5cm。展開距離一般為10～15cm，根據(jù)溶劑移動的方向分為上行展開和下行展開。另外，還可利用多次展開、雙向展開等方法得到不同的層析結(jié)果。

2.4 定位與顯色

確定被分離組分的位置稱為定位。展開后的薄層板自槽中取出，室溫下?lián)]發(fā)去溶劑。若被分離組分本身有顏色，它們的位置根據(jù)有色的斑點(diǎn)即可確定。無色的化合物可采用物理檢出法、化學(xué)檢出法、酶與生物檢出法和放射檢出法來定位。

2.5 定性

試樣與標(biāo)準(zhǔn)品同板作對照試驗(yàn)，二者只f值相同且顯色特性相同，可初步認(rèn)為是同一化合物。必要時(shí)采用其他方法加以驗(yàn)證。

2.6 定量

樣品組分經(jīng)薄層分離后，可用以下兩種方法定量。

2.6.1 洗脫法。把組分斑點(diǎn)的吸附劑取出，用溶劑洗脫后，用其他方法測定。如分光光度法、熒光等方法測定。此法操作復(fù)雜，效率較低。

2.6.2 原位法。即在薄層上組分斑點(diǎn)位置進(jìn)行測定。又分為目測法、測面積法和薄層掃描儀掃描定量法。

結(jié)束語

薄層色譜用于定量分析時(shí)，最好采用高效薄層色譜法，即采用分離效率高、展開距離短，靈敏度高的高效薄層板。且點(diǎn)樣、展開、顯色、定量均使用儀器。高效薄層色譜法的應(yīng)用大大提高了薄層分析的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度。

參考文獻(xiàn)

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