氣相色譜法同時測定中藥口服液體制劑中的丙酸山梨酸苯甲酸

曾波，陳睿彥，李艷，陳明涓

(昭通市食品藥品檢驗所，云南 昭通 657000)

·中藥工業(yè)·

氣相色譜法同時測定中藥口服液體制劑中的丙酸山梨酸苯甲酸

曾波，陳睿彥，李艷，陳明涓

(昭通市食品藥品檢驗所，云南 昭通 657000)

目的：建立同時測定中藥口服液體制劑中丙酸、山梨酸、苯甲酸含量的分析方法。方法：采用氣相色譜—火焰離子化檢測器(FID)對3種化合物進行檢測，經(jīng)毛細管柱DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)分離后用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行定量分析。結(jié)果：丙酸、山梨酸及苯甲酸在25～400 μg·mL-1線性關(guān)系良好(相關(guān)系數(shù)均≥0.999)，檢出限分別為0.6、0.5、1.3 μg·mL-1。實樣測定時，加樣回收率分別為97.95%～102.75%(RSD=1.71%)、96.28%～102.37%(RSD=1.85%)和97.65%～103.51%(RSD=1.98%)。結(jié)論：本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于測定中藥口服液體制劑中丙酸、山梨酸、苯甲酸的含量。

毛細管柱氣相色譜；中藥口服液體制劑；丙酸；山梨酸；苯甲酸

中藥口服液體制劑因其含水量相對較高、所含營養(yǎng)物質(zhì)豐富，故易被微生物污染[1-2]。為保證此類制劑安全有效，需向其添加適量的防腐劑以抑制微生物的生長繁殖，從而達到有效的防腐目的[3]。然而防腐劑選擇不當(dāng)或超劑量使用會對人們的身體健康造成損害[4]，為中藥口服液體制劑開發(fā)其防腐劑的含量測定方法，對保障臨床用藥安全具有重要意義。丙酸、山梨酸及苯甲酸是中藥口服液體制劑中3種常見的防腐劑，現(xiàn)有文獻報道檢測中藥口服液體制劑中山梨酸、苯甲酸的含量[5-8]，但尚未見同時測定這3種防腐劑含量的文獻報道。本文建立了鹽酸酸化樣品，乙醚提取，毛細管柱分離的樣品測試方法，可同時測定丙酸、山梨酸及苯甲酸，為在中藥口服液體制劑中控制這3種防腐劑含量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫7890A型氣相色譜儀，配有自動進樣器和火焰離子化檢測器；Agilent OpenLAB CDS化學(xué)工作站；天平AB265-S(德國梅特勒公司)。

丙酸(AccuStandard，批號：20742，純度：100%)；山梨酸(Dr.Ehrenstorfer，批號：20531，純度：99.0%)；苯甲酸(Dr.Ehrenstorfer，批號：71105，純度：99.5%)；乙醚(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號：20141215，分析純)；鹽酸(重慶川東化工集團有限公司化學(xué)試劑廠，批號：20090422，分析純)；水為超純水。

中藥口服液體制劑為4個品種：益氣養(yǎng)血口服液(批號：20741221)、雙黃連口服液(批號：15083131)、健兒消食口服液(批號：14119004)、抗病毒口服液(批號：20140305)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-WAX石英毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣為高純氮氣(純度≥99.999%)；進樣方式：不分流進樣；進樣體積1 μL；恒流模式：載氣流速為2.0 mL·min-1；氫氣流速：45 mL·min-1；空氣流速：400 mL·min-1；進樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：250 ℃；柱溫采用程序升溫：初始溫度40 ℃，以5 ℃·min-1升至130 ℃，再以10 ℃·min-1升至200 ℃，保持6 min；后運行：220 ℃，5 min。

2.2 溶液的配制

對照品儲備液：精密稱取丙酸、山梨酸、苯甲酸對照品各10 mg于10 mL量瓶中，加乙醚溶解并稀釋至刻度，搖勻，得各組分質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的對照品儲備液。

供試品溶液：精密量取供試品2 mL，置于50 mL比色管中，加入6 mol·L-1鹽酸0.5 mL，搖勻。再加入20 mL乙醚，振搖3 min后靜置5 min，取上清液待測。對定量時超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的供試品溶液用乙醚準(zhǔn)確稀釋后再測定。

2.3 專屬性試驗

在上述色譜條件下，丙酸、山梨酸與苯甲酸的色譜峰能完全分離，保留時間分別為15.0、24.6、28.3 min，見圖1。

2.4 重復(fù)性試驗

精密量取2.5中對照品溶液，按照2.1的色譜條件重復(fù)進樣5次，丙酸、山梨酸、苯甲酸峰面積RSD分別為1.3%、1.3%和1.8%。

注：A.對照品溶液；B.供試品。圖1 益氣養(yǎng)血口服液GC圖

2.5 精密度試驗

取對照品儲備液適量，加乙醚配制成低、中、高3個質(zhì)量濃度(25、100、400 μg·mL-1)的溶液?？疾旆椒ǖ娜諆?nèi)和日間精密度(RSD)。結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗

取2.5中對照品溶液，分別于0、6、12、24、48 h測定，丙酸、山梨酸、苯甲酸峰面積的RSD分別為1.3%、1.4%、2.0%。表明3種成分在48 h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.7 線性關(guān)系考察

分別精密量取不同體積的丙酸、山梨酸與苯甲酸對照品儲備液，加乙醚稀釋成丙酸、山梨酸與苯甲酸含量分別為25、50、100、200、400 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取1 μL注入氣相色譜儀，以各組分的峰面積Y為縱坐標(biāo)，進樣質(zhì)量濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表2。

表2 各成分回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.8 檢出限及定量限

取2.7中溶液，逐級稀釋成系列濃度，分別進樣1 μL，當(dāng)峰高為基線噪音的3和10倍量時，測得丙酸、山梨酸與苯甲酸的檢出限分別為0.6、0.5、1.3 μg·mL-1；定量限分別為1.8、1.6、4.4 μg·mL-1。

2.9 加樣回收率試驗

取已知丙酸、山梨酸及苯甲酸含量的樣品(批號：20741221)9份，按高、中、低濃度分別精密加入混合對照品溶液10、20、30 mL，按2.2方法制備供試品溶液。精密吸取1 μL注入氣相色譜儀，測定含量，計算回收率，結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗結(jié)果(n=3)

2.10 樣品含量測定

照2.2方法制備供試品溶液，對4種口服液中丙酸、山梨酸及苯甲酸含量進行測定，每份樣品平行測定2次，取平均值。結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 前處理方法的建立

有文獻報道樣品用鹽酸溶液酸化乙醚提取后，將提取液濃縮近干，經(jīng)丙酮溶解待測。作者用乙醚提取后取上清液直接進樣，結(jié)果準(zhǔn)確可靠且便捷。

3.2 色譜柱的選擇

測試HP-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)、DB-17(30 m×0.25 mm×0.25 μm)和DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)不同極性色譜柱對丙酸、山梨酸、苯甲酸的分離效果，發(fā)現(xiàn)DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)對這三種物質(zhì)的分離效果最佳。

3.3 與高效液相色譜法的比較

林清荷等[9]建立了用高效液相色譜法同時測定丙酸、山梨酸、苯甲酸的方法，將之與本法比較：1)高效液相色譜法的流動相需要磷酸鹽緩沖液，需要調(diào)節(jié)pH至2.5，過程繁瑣、費時費力。而本法只需用高純氮氣作載氣；2)高效液相色譜法提取樣品時需加入水、磷酸溶液，再加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，遠不如本法一步提取簡便；3)高效液相色譜法需要較昂貴的二極管陣列檢測器(非普通的紫外檢測器)，而本法中采用的FID檢測器，普通的氣相色譜儀一般都有配備。

本方法首次建立了同時測定中藥口服制劑中3種防腐劑的含量測定方法，方法學(xué)考察表明，該方法操作簡單，準(zhǔn)確可行?！吨腥A人民共和國藥典》2015版第四部規(guī)定了山梨酸、苯甲酸的限量為0.3%[10]，而對丙酸尚未作出明確規(guī)定；參照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》GB 2760-2014[11]，在食品中丙酸最大限量一般為0.25%。可見，本方法完全可以滿足實際檢測的需要。

[1] 畢殿洲.藥劑學(xué)：第四版[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1999.

[2] 常兆生，于靜波.恰當(dāng)使用防腐劑 確?？诜嘿|(zhì)量[J].中成藥，1990，13(2)：40-41.

[3] 錢木水，葉興法，倪赤杭.液體制劑中防腐劑選用的體會[J].海峽藥學(xué)，2009，21(3)：32-34.

[4] 丁茂柏.防腐劑：過量使用有危害[J].安全與健康，2011，26(17)：54.

[5] 李玉琴，崔英杰，賈寶秀，等.場強放大樣品進樣-毛細管電泳技術(shù)對中藥制劑中苯甲酸與山梨酸的測定[J].分析測試學(xué)報，2010，29(8)：832-836.

[6] 李玉琴，賈寶秀，崔英杰，等.液體中藥制劑中苯甲酸和山梨酸含量的高效毛細管電泳法測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21(10)：2532-2533.

[7] 韓訓(xùn)萍.液體制劑中山梨酸和苯甲酸的含量測定[J].中成藥，1988，11(7)：11-12.

[8] 黎清金，吳佳，林向陽，等.氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測定食品中的防腐劑苯甲酸和山梨酸[J].農(nóng)產(chǎn)品加工學(xué)刊，2009，(6)：102-104.

[9] 林清荷.高效液相色譜法同時測定糕點中丙酸鈣(鈉)、雙乙酸鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸[J].福建輕紡，2012，25(12)：45-47.

[10] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[11] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn):GB 2760—2014[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

SimultaneousDeterminationofPropionicAcid，SorbicAcidandBenzoicAcidinOralLiquidPreparationofTraditionalChineseMedicinebyCapillaryGasChromatography

ZENGBo，CHENRuiyan，LIYan，CHENMingjuan

(ZhaotongInstituteforFoodandDrugControl，Zhaotong，Yunnan657000，China)

Objective：To develop a method for the simultaneous determination of propionic acid，sorbic acid and benzoic acid in oral liquid formulations.Methods：The three compounds were determined by gas chromatography with flame ionization detector and DB-wax capillary column(30 m×0.25 mm×0.25 μm).Results：Within the range from 25 μg·mL-1to 400 μg·mL-1(r≥0.999)，a good relationship was presented between the injected amounts and peak areas for propionic acid，sorbic acid and benzoic acid.The recoveries ranged from 98.0% to 102.8%，with RSD of less than or equal to 2.0%.Conclusion：The method is suitable for the determination of propionic acid，sorbic acid and benzoic acid in oral liquid preparation of traditional Chinese medicine.

Capillary column gas chromatograph；oral liquid preparation of traditional Chinese medicine；propionic acid；sorbic acid；benzoic acid

2016-02-15)

*

曾波，主管藥師，研究方向：食品藥品檢驗檢測；Tel：(0870)3156097，E-mail：279466525@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.3.027