富硒大米肽體內(nèi)抗氧化活性研究

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(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院/環(huán)境食品學(xué)教育部重點實驗室,湖北武漢 430070)

富硒大米肽體內(nèi)抗氧化活性研究

秦蕓,石沛霖,劉維維,郭丹郡,何慧*

(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院/環(huán)境食品學(xué)教育部重點實驗室,湖北武漢 430070)

目的:比較普通大米肽、富硒大米肽和硒代蛋氨酸的體內(nèi)抗氧化活性。方法:將60只老齡(12月齡)雄性昆明小鼠和10只少齡(1月齡)雄性昆明小鼠分成7組(每組10只):老齡模型組(M組)、少齡對照組(YC組)、普通大米肽組(400 mg/kg·bw,Ⅰ組)、富硒大米肽組(400 mg/kg·bw,Ⅱ組)、硒代蛋氨酸組(2.5 μg/kg·bw,Ⅲ組)、富硒大米肽+硒代蛋氨酸組(200 mg/kg·bw+1.225 μg/kg·bw,Ⅳ組)和白藜蘆醇組(10 mg/kg.bw,PC組),其中富硒大米肽組、硒代蛋氨酸組以及富硒大米肽+硒代蛋氨酸組中的硒含量一致,連續(xù)灌胃30 d。結(jié)果顯示:與M組相比,YC組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、PC組小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性極顯著提高(p<0.01);YC組、Ⅰ組、Ⅳ組的還原型谷胱甘肽(GSH)含量顯著增加(p<0.05),Ⅱ組和PC組GSH含量極顯著增加(p<0.01);YC組、Ⅱ組、PC組的過氧化氫酶(CAT)活性顯著增加(p<0.05);Ⅲ組、Ⅳ組的肝勻漿中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性顯著提高(p<0.05),Ⅱ組的GSH-Px活性極顯著增加(p<0.01);Ⅱ組、Ⅳ組、PC組的T-AOC顯著增加(p<0.05);YC組、Ⅱ組的丙二醛(MDA)顯著減少(p<0.05),PC組的MDA極顯著減少(p<0.01);YC組、PC組的GSH顯著增加(p<0.05),Ⅱ組的GSH極顯著增加(p<0.01),以及胸腺、脾臟指數(shù)等指標(biāo)均有不同程度地改善。其中所有指標(biāo)以富硒大米肽組效果最好,抗氧化活性顯著高于同劑量的普通大米肽,大多數(shù)指標(biāo)也顯著優(yōu)于同等硒含量的硒代蛋氨酸組。結(jié)論:富硒大米肽中的硒與肽對增強(qiáng)抗氧化能力有一定的增效作用。

富硒大米肽,硒代蛋氨酸,抗氧化,增效作用

硒元素的生物化學(xué)功能有很多,其最主要的即為抗氧化作用,硒是構(gòu)成氧化還原功能的生物酶如谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和硫氧還蛋白還原酶的中心因子,其中硒以硒代半胱氨酸(SeCys)的形式參與構(gòu)成谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px),硒可清除體內(nèi)的自由基,保護(hù)生物體細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷[1-4]。硒通常是賦存于含硫的蛋白質(zhì)中,且有機(jī)硒的安全性高于無機(jī)硒[5]。富硒大米中有機(jī)硒的主要存在形態(tài)是硒蛋白,其中主要以硒代蛋氨酸(Se-Met)形式存在[6-7]。

大米肽具有一定的抗氧化能力,曹輝等[8]采用木瓜蛋白酶酶解大米蛋白,在最優(yōu)酶解條件下大米肽對DPPH自由基清除率為54.5%,DPPH自由基和羥自由基的IC50分別為1.738 mg/mL和0.238 mg/mL,有良好的清除能力,具有抗氧化性。王若蘭等[9]采用中性蛋白酶水解大米蛋白制備的大米抗氧化肽,對超氧陰離子自由基清除率達(dá)56.8%和羥基自由基清除率達(dá)到49.8%,具有一定的抗氧性。

邱偉芬等[10]從大米中獲得了含硒蛋白,又經(jīng)胰蛋白酶水解得到較高DPPH清除率的大米硒代多肽,對大米含硒多肽的體外抗氧化活性進(jìn)行了研究。但是目前關(guān)于富硒大米肽抗氧化研究多采用體外抗氧化測定方法,無法真實模擬體內(nèi)生理環(huán)境,且各種方法均僅測定了抗氧化能力中的某一方面,均無法模擬生理條件下的多條抗氧化途徑[11]。

本文以富硒大米蛋白為酶解對象,以抗氧化活性和水解度為篩選指標(biāo),經(jīng)復(fù)合蛋白酶水解后得富硒大米抗氧化肽。采用老齡小鼠模型,以少齡小鼠為對照,并以抗氧化性能優(yōu)異的白藜蘆醇為陽性對照,考察富硒大米抗氧化肽的體內(nèi)抗氧化效果,并與普通大米肽、硒代蛋氨酸進(jìn)行比較,以確定富硒大米肽中硒與大米肽對抗氧化活性的貢獻(xiàn),為富硒大米資源的高值化利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

普通大米與富硒大米 中國糧油食品有限公司;硒代蛋氨酸(純度≥98%) 湖北恩施硒谷源實業(yè)有限公司;白藜蘆醇(純度為98%) 上海源葉生物科技有限公司;復(fù)合蛋白酶(Protamex) 丹麥諾維信公司;SOD、T-AOC、GSH、CAT、GSH-Px、MDA試劑盒 南京建成生物工程研究所;SPF級雄性KM少齡小鼠10只,4～5周齡,體重(25±2) g,SPF級雄性KM老齡小鼠60只,52～53周齡,體重(50±10) g,動物及飼料 湖北省疾病預(yù)防控制中心實驗動物中心,實驗動物合格證號:SCXK(鄂)2015-0018。

超濾膜系統(tǒng)(截留相對分子質(zhì)量為5000 Da) 美國Millipore公司;Multiskan Go全波長酶標(biāo)儀 美國Thermo Fisher Scientific公司;AL204 電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司;TG16A高速離心機(jī) 湖南長沙平凡儀器有限公司;AFS-8220型原子熒光光度計 北京吉天儀器有限公司;高速粉碎機(jī) 上海頂帥電器有限公司;LGJ-12冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1 大米肽的制備 大米籽粒粉碎過80目篩,取一定量大米粉按照料液比1∶5 (w/v)加入堿液(0.2% NaOH)提取液,在40 ℃下攪拌提取1 h,將提取液在4000 r/min條件下離心15 min,取上清液,沉淀重復(fù)提取一次,合并兩次上清液后,加入1 mol/L HCl調(diào)pH至4.8左右沉淀蛋白,靜置1 h后4000 r/min離心15 min后取沉淀,通過冷凍干燥制得大米蛋白粉,取適量上述大米蛋白粉按底物濃度2.5%加水后于沸水浴中處理30 min,然后冷卻至50 ℃,pH調(diào)至7.00,按加酶量8000 U/g加入復(fù)合蛋白酶(酶活1.03×105U/g),邊攪拌邊加入0.1 mol/L NaOH溶液以維持pH為7.00,酶解反應(yīng)結(jié)束后90 ℃以上水浴15 min滅酶,充分冷卻至室溫后離心(4000 r/min)15 min,并取上清液選用截留分子質(zhì)量為5 kDa超濾膜分離,過膜后冷凍干燥,備用。

1.2.2 硒含量的測定 參照GB/T 21729-2008,氫化物發(fā)生-熒光光譜法:準(zhǔn)確稱取0.5 g樣本于錐形瓶中,精確到0.0001 g,加入10 mL濃硝酸、高氯酸按體積比4∶1(大米、蛋白、多糖樣本)或3∶2(土壤樣本)配制的混酸溶液,將錐形瓶封口后放置過夜。將錐形瓶放置于150 ℃電熱板上加熱至黃煙冒盡,有少量白煙冒出,剩余2 mL清亮溶液,加入10 mL 6 mol/L鹽酸溶液繼續(xù)加熱至溶液再次清亮,取下將溶液定容至25 mL。定容后的溶液過濾后,分別取3管每管5 mL于離心管中,加入0.4 mL濃鹽酸、0.2 mL鐵氰化鉀(100 g/L),靜置6 h。

取1 mg/mL硒單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋至0、10、20、50、100 μg/mL后各取10 mL分別加入0.4 mL鐵氰化鉀溶液、0.8 mL濃鹽酸。標(biāo)準(zhǔn)空白取50 mL蒸餾水,加入2 mL鐵氰化鉀溶液、4 mL濃鹽酸,靜置6 h。

儀器條件:負(fù)高壓250 V,硒燈電流50 mA,原子化器高度8 mm,載氣流量300 mL/min,屏蔽器流量800 mL/min,采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法,讀數(shù)時間15 s,自動進(jìn)樣,注入量0.5 mL。

出苗20天左右，引苗上架時期，根據(jù)田間土壤墑情，進(jìn)行第一次田間溝灌，該次灌水保證全田灌透但不翻廂，促進(jìn)底肥肥效發(fā)揮作用。四季豆灌水“澆莢不澆花”，花期一般不澆水，否則易引起落花落莢。結(jié)莢盛期是水分需求最大時期，該時期結(jié)合追肥灌水，每次灌水宜灌半溝水，以不翻廂為原則。

式(1)

式(1)中,X-樣品中硒含量(μg/g);c-測定用樣液中硒濃度(μg/L);V-樣液體積(mL);m-樣品質(zhì)量(g).

1.2.3 動物分組與喂養(yǎng) 60只老齡(12月齡)雄性昆明小鼠和10只少齡(1月齡)雄性昆明小鼠(18～22 g),適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后將老齡小鼠被隨機(jī)分成6組(每組10只):老齡模型組、普通大米肽組、富硒大米肽組、硒代蛋氨酸組、富硒大米肽+硒代蛋氨酸組和白藜蘆醇組。少齡雄性昆明小鼠作為對照組,其中老齡模型組和少齡對照組每日灌胃生理鹽水,其他各組每日分別灌胃400 mg/kg·bw普通大米肽、400 mg/kg·bw富硒大米肽、2.5 μg/kg·bw硒代蛋氨酸、200 mg/kg·bw富硒大米肽+1.225 μg/kg·bw硒代蛋氨酸、10 mg/kg白藜蘆醇。其中富硒大米肽組、硒代蛋氨酸組以及富硒大米肽+硒代蛋氨酸組中的硒含量一致。連續(xù)灌胃30 d,喂養(yǎng)普通飼料。

1.2.4 相關(guān)指標(biāo)的測定 禁食(不禁水)12 h并稱重后,處死所有小鼠,眼眶取血,血漿于3500 r/min,4 ℃低溫離心10 min,取上清液放置冰箱待測?？焖偃⌒叵?、脾臟和肝臟,用生理鹽水清洗,濾紙擦拭干凈水分稱重,計算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),肝臟和生理鹽水以1∶9比例制肝勻漿。按試劑盒說明書分別測定血清中SOD、GSH、CAT,肝勻漿中GSH-Px、MDA、GSH、T-AOC。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理,通過單因素分析組間LSD檢驗和Duncan氏多重比較對實驗結(jié)果進(jìn)行顯著性分析,p<0.05表示具有顯著差異,p<0.01表示具有極顯著差異,所有的實驗結(jié)果均以X±SD表示。

2 結(jié)果與分析

2.1富硒大米肽及普通大米肽的硒含量測定

用普通大米和富硒大米自制大米肽,通過原子熒光檢測普通大米肽和富硒大米肽硒含量分別為0.2949 mg/kg和2.3652 mg/kg。

2.2小鼠一般情況觀察

表1 實驗期間各組小鼠體重的變化Table 1 Weight changes of mice during the experiment(±s,n=10)

2.3小鼠血清中GSH含量及CAT、SOD活性測定結(jié)果

由表2的結(jié)果可知,少齡對照組小鼠的血清SOD極顯著高于老齡模型組(p<0.01),血清CAT活性和GSH含量顯著高于老齡模型組(p<0.05),說明老齡小鼠在衰老過程中抗氧化酶酶活明顯降低,非酶抗氧化物如GSH含量亦顯著減少。灌胃普通大米肽略提高血清SOD的活性,無顯著性差異,灌胃富硒大米肽組、硒代蛋氨酸組、富硒大米肽+硒代蛋氨酸組和白藜蘆醇組均可極顯著提高SOD的活性。普通大米肽組可顯著提高GSH的含量,灌胃同等劑量的富硒大米肽組卻能極顯著提高GSH的含量,提示硒在其中也發(fā)揮了重要作用。硒代蛋氨酸組對增加GSH的含量沒有達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著差異,與富硒大米肽組相比,富硒大米肽+硒代蛋氨酸組中富硒大米肽的量減半,其提高GSH的含量的能力似乎也減半,說明補(bǔ)充含硒肽在提高GSH含量方面比補(bǔ)充硒代蛋氨酸更為有效。灌胃普通大米肽、硒代氨基酸組、富硒大米肽+硒代氨基酸組對CAT的酶活提高效果不明顯,均沒有顯著差異,只有富硒大米肽組和白藜蘆醇組可顯著提高CAT的酶活(p<0.05)。說明富硒大米肽對提高血清中的CAT酶活和GSH含量的效果是優(yōu)于普通大米肽和硒代蛋氨酸的。陽性對照組白藜蘆醇(10 mg/kg)對SOD、CAT的活性和GSH的含量的提高均具有顯著的改善作用,但在提高GSH的含量方面不及富硒大米肽組。王馳等[12]給老齡鼠灌胃富硒玉米肽組,SOD活性均出現(xiàn)不同程度的提高,富硒玉米肽組SOD活性與模型組相比極顯著提高,效果顯著強(qiáng)于普通玉米肽,與本實驗結(jié)果一致。

表2 血清中GSH含量及SOD、CAT活性Table 2 Content of GSH and the activity of SOD,CAT in serum(±s,n=10)

注:*和**分別表示與老齡模型組相比有顯著差異(p<0.05)和極顯著差異(p<0.01),表3～表5同。

2.4小鼠肝勻漿中T-AOC活性MDA含量測定結(jié)果

結(jié)果如表3所示,少齡對照組與老齡模型組相比,其T-AOC的活力有所提高,但沒有達(dá)到顯著性差異,MDA的含量顯著降低(p<0.05),有研究表明隨著機(jī)體的衰老,體內(nèi)抗氧化能力下降,產(chǎn)自由基失去平衡,過氧化產(chǎn)物大量積累,導(dǎo)致MDA的含量逐漸增加[13]。與老齡小鼠模型組相比,灌胃普通大米肽或硒代蛋氨酸對提高T-AOC的活力無顯著改善(p>0.05);而灌胃富硒大米肽或白藜蘆醇或富硒大米肽+硒代氨基酸卻能顯著提高T-AOC的活力,其效果優(yōu)于少齡小鼠組,說明富硒大米肽中硒與肽可協(xié)同提高肝勻漿中T-AOC活性,具有良好的抗氧化作用。與老齡小鼠模型組相比,灌胃普通大米肽或硒代蛋氨酸或富硒大米肽+硒代蛋氨酸對降低MDA含量無顯著改善(p>0.05);而灌胃富硒大米肽可顯著降低MDA含量,白藜蘆醇組其MDA含量卻極顯著降低(p<0.01)。申佳佳等[14]研究表明,給藥組老齡小鼠肝臟中的MDA含量與未給藥組相比顯著下降,說明抗氧化物質(zhì)可降低MDA含量,與本實驗結(jié)果一致。

表3 肝勻漿中T-AOC活性及MDA含量Table 3 Content of MDA and the activity of SOD in liver homogenate(±s,n=10)

2.5小鼠肝勻漿中GSH含量和GSH-Px活性測定結(jié)果

由表4的結(jié)果可知,與老齡小鼠模型組相比,少齡小鼠對照組其肝勻漿中GSH含量顯著提高(p<0.05),GSH-Px活力有所提升,但無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(p>0.05);灌胃普通大米肽或硒代蛋氨酸或富硒大米肽+硒代蛋氨酸對GSH的含量的提升雖有所改善,但未達(dá)顯著水平,而灌胃富硒大米肽卻可極顯著提高GSH的含量(p<0.01),其效果優(yōu)于陽性對照組,再次說明富硒大米肽中硒與肽可協(xié)同提高GSH含量,具有一定抗氧化作用。灌胃白藜蘆醇可使GSH的含量顯著提高(p<0.05)。與老齡小鼠模型組相比,灌胃普通大米肽或白藜蘆醇,可提高其GSH-Px活力,但無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異;研究顯示硒是GSH-Px的活性中心,增加硒含量可提高GSH-Px活力[15],本實驗中灌胃富硒大米肽可極顯著提升GSH-Px活力,灌胃硒代蛋氨酸組和富硒大米肽+硒代蛋氨酸均顯著提升GSH-Px活力。王馳等[12]給老齡鼠灌胃富硒玉米肽、硒甲基硒代半胱氨酸(SeMeCys)和富硒玉米肽+SeMeCys均極顯著提升GSH-Px活力,與本實驗結(jié)果一致。

表4 肝勻漿中GSH含量及GSH-Px活性Table 4 Content of GSH and the activity of GSH-Px in liver homogenate(±s,n=10)

2.6小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)

結(jié)果由表5可知,相對于老齡小鼠模型組,少齡小鼠對照組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均極顯著增加(p<0.01),說明隨著機(jī)體的衰老,免疫器官顯著萎縮,免疫功能逐漸下降。與老齡小鼠模型組相比,硒代蛋氨酸組或富硒大米肽+硒代蛋氨酸組或白藜蘆醇組其脾臟指數(shù)均有所增加,但無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(p>0.05),普通大米肽組和富硒大米肽組其脾臟指數(shù)均顯著增加(p<0.05),除硒代蛋氨酸組和白藜蘆醇組其胸腺指數(shù)顯著增加外,普通大米肽組、富硒大米肽組、富硒大米肽+硒代蛋氨酸組小鼠胸腺指數(shù)均極顯著增加(p<0.01),說明灌胃普通大米肽、富硒大米肽均可以減緩由于衰老導(dǎo)致的小鼠胸腺和脾臟的萎縮。王燕等[16]研究發(fā)現(xiàn)隨著機(jī)體的衰老,老齡鼠的免疫器官萎縮,胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著下降,灌胃抗氧化藥物后顯著提高老齡鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),與本實驗結(jié)果一致。

表5 小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)Table 5 Thespleen index and thymus

3 討論

正常健康機(jī)體內(nèi)自由基的形成與清除處于一種動態(tài)平衡中,但隨著年齡增長,由于體內(nèi)抗氧化酶的活力下降,這種動態(tài)平衡就會被打破,致使自由基不能被有效清除,故在體內(nèi)積累,使組織器官受損,最終導(dǎo)致細(xì)胞衰亡和機(jī)體的衰老[17]。硒元素在機(jī)體內(nèi)主要是通過硒蛋白發(fā)揮抗氧化作用的,可清除體內(nèi)的自由基,阻止其對細(xì)胞、組織等造成的損傷[18]。硒還能影響自由基與非酶類抗氧化劑的代謝,當(dāng)抗氧化劑與硒結(jié)合后,能增強(qiáng)其抗氧化活性[19]。SOD 能清除體內(nèi)的超氧陰離子自由基,起到抗氧化作用[20]。CAT可以清除機(jī)體代謝過程中產(chǎn)生的過氧化氫,減少過氧化氫的毒性,并保護(hù)細(xì)胞免于活性氧的氧化損傷[21]。GSH-Px是體內(nèi)天然的抗氧化酶,硒是GSH-Px的活性中心,體內(nèi)硒含量的高低與GSH-Px活性有著密切的聯(lián)系,GSH-Px通過催化如下化學(xué)反應(yīng),清除脂質(zhì)過氧化物,2ROOH+2GSH→ 2ROH+GSSG+2H2O。本實驗中明顯看出,所有補(bǔ)充含硒物質(zhì)的組別,其GSH-Px活力均顯著提高。GSH是一種重要的抗氧化物質(zhì),維持著體內(nèi)的氧化還原平衡,本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充富硒大米肽組,無論是血清GSH指標(biāo),還是肝組織中GSH指標(biāo)均高于少齡小鼠組。印度學(xué)者Bhandarkar等[22]研究的藍(lán)藥睡蓮的提取物可以通過激活谷胱甘肽還原酶,催化GSSG還原為GSH,使四氯化碳致肝損傷鼠灌胃提取物后,其GSH的含量高于正常對照組。于國才[23]研究的結(jié)果表示,給玉米肽后,肝臟中的GSH含量高于正常組,減少了組織中還原性GSH的消耗,分析其原因是由于玉米肽具有還原性和清除羥基自由基的雙重作用。因此,我們推測富硒大米肽中,也存在一些還原性肽段,可以減少還原性GSH的消耗。

脾臟和胸腺是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的重要指標(biāo),有研究表明,抗氧化物可以提高胸腺和脾臟指數(shù),減緩衰老過程中免疫器官的萎縮,增強(qiáng)免疫功能[24]。白藜蘆醇是一種非黃酮類多酚化合物,廣泛存在于植物中,能有效清除自由基,抑制氫過氧化物的形成,對脂質(zhì)過氧化物有很強(qiáng)地抑制作用,具有顯著的抗氧化活性[25-26],故本文選用白藜蘆醇作為陽性對照,由本實驗結(jié)果知,白藜蘆醇對于老齡小鼠SOD、CAT的提升和MDA含量降低的幅度最大,效果最明顯,但是對增加血清和肝勻漿中的GSH的含量和提高T-AOC和GSH-Px的活力和胸腺及脾臟指數(shù)不及富硒大米肽。

同等劑量的富硒大米肽組與普通大米肽組相比,對各種指標(biāo)的改善幅度最為明顯,抗氧化效果明顯,說明硒起到了重要的抗氧化作用。相同硒含量的富硒大米肽組與硒代蛋氨酸組和富硒大米肽+硒代蛋氨酸組相比,提升SOD、胸腺指數(shù)能力相當(dāng),可顯著改善MDA含量、CAT和GSH-Px活力極顯著提升GSH含量,說明富硒大米肽的抗氧化能力強(qiáng)于普通大米肽、硒代蛋氨酸。

4 結(jié)論

連續(xù)給老齡小鼠灌胃普通大米肽(400 mg/kg·bw)、富硒大米肽(400 mg/kg·bw)以及硒代蛋氨酸(2.5 μg/kg·bw)、富硒大米肽(200 mg/kg·bw)+硒代蛋氨酸(1.225 μg/kg·bw)、白藜蘆醇(10 mg/kg·bw)30 d后,與老齡小鼠相比,各給藥組小鼠血清中SOD、GSH、CAT,肝勻漿中GSH-Px、MDA、GSH、T-AOC以及胸腺、脾臟指數(shù)等指標(biāo)均有所不同程度地改善,其中往往以富硒大米肽組效果最好,其抗氧化活性優(yōu)于普通大米肽,也常常優(yōu)于同等硒含量的硒代蛋氨酸,提示富硒大米肽中的硒與肽對增強(qiáng)抗氧化能力有一定的協(xié)同增效作用。

[1]Kryukov G V,Castellano S,Novoselov S,et al. Characterization of mammalian selenoproteomes[J]. Science,2003,300(5624):1439-1443.

[2]Liu K L,Zhao Y,Chen F S,et al. Purification,identification,andinvitroantioxidant activities of selenium-containing proteins from selenium-enriched brown rice[J]. Eur Food Res Technol,2012,234(1):61-68.

[3]Trevisan R,Mello D F,Fisher A S,et al. Selenium in water enhances antioxidant defenses and protects against copper-induced DNA damage in the blue mussel Mytilus edulis[J]. Aquatic Toxicology,2011,101(1):64-71.

[4]Hartikainen H.Biogeochemistry of selenium and its impact on food chain quality and human health[J]. JTraceElemMedBio,2005,18(4):309-318.

[5]李頌,衣喆,王春玲,等. 微量元素硒的營養(yǎng)價值及應(yīng)用. 食品研究與開發(fā),2014,35(20):120-123.

[6]Carey A M,Lombi E,Donner E,et al. A review of recentdevelopments in the speciation and location of arsenic andselenium in rice grain[J]. Anal Bioanal Chem,2012,402(10):3275-3286.

[7]Fang Y,Zhang Y F,Catron B,et al. Identification of selenium compounds using HPLC-ICPMS and nano-ESI-MS in selenium-enriched rice via foliarapplication[J]. Journal of Analytical AtomSpectrometry,2009,24(12):1657-1664.

[8]曹輝,馬海樂,曲文娟,等. 大米蛋白的木瓜酶酶解及其水解物的抗氧化活性[J]. 中國糧油學(xué)報,2009(07):10-13.

[9]王若蘭,楊壯,周菲. 中性酶從米糠中制取抗氧化活性肽的研究[J]. 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報,2008,29(6):1-4.

[10]邱偉芬,羅佩竹,方勇,等. 大米源硒代多肽的酶法制備及其抗氧化活性的研究[J]. 中國糧油學(xué)報,2013(4):1-7.

[11]王曉宇,杜國榮,李華. 抗氧化能力的體外測定方法研究進(jìn)展[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報,2012(3):247-252.

[12]王馳,張久亮,堯詠,等. 富硒玉米蛋白水解物抗氧化活性研究[J]. 中國糧油學(xué)報,2017(2):49-56.

[13]龍萌. 酵母硒和茶多酚對團(tuán)頭魴生長、抗氧化性能及抗應(yīng)激的影響[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

[14]申佳佳,苑隆國,李電東,等. 紅景天苷對自然衰老小鼠模型的抗衰老作用研究[J]. 中國醫(yī)藥生物技術(shù),2012(6):412-417.

[15]Liu K L,Zhao Y,Chen F S,et al. Purification and identification of Se-containing antioxidative peptides from enzymatic hydrolysates of Se-enriched brown rice protein[J]. Food Chemistry,2015,187(15):424-430.

[16]王燕,趙毅. 左歸飲對老年小鼠抗氧化作用及胸腺脾臟指數(shù)的影響[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志,2007(3):67-69.

[17]趙彩紅. 小鼠自然衰老模型的血脂水平及抗氧化能力的評價[J]. 醫(yī)學(xué)理論與實踐,2007(7):745-746.

[18]Hartikainen H. Biogeochemistry of selenium and its impact on food chain quality and human health. J Trace Elem Med Bio,2005,18(4):309-318.

[19]Shen Q,Zhang B,Xu R,et al. Antioxidant activityinvitroof the selenium-contained protein from the Se-enriched Bifidobacterium animalis 01. Anaerobe,2010,16(4):380-386.

[20]曾滿紅,黃清松,張德興. 紅景天總黃酮對自然衰老大鼠抗氧化和免疫功能的影響[J]. 解剖學(xué)研究,2012(2):135-137.

[21]孫顯. 銅、鎘離子對萼花臂尾輪蟲(B.calyciflorus)毒性及SOD、CAT酶活的影響[D].南京:南京師范大學(xué),2012.

[22]Bhandarkar MR,Khan A. Antihepatotoxic effect of ymphaea stellata willd.,against carbon tetrachloride-induced hepatic damage in albino rats[J]. Journal of Ethnopharmacology,2004,91(1):61-64.

[23]于國才. 新型高活性玉米醒酒保肝肽的制備、活性與結(jié)構(gòu)[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

[24]俞浩,張孝林,毛斌斌,等. 牯嶺勾兒茶多糖對老齡小鼠免疫功能及抗氧化能力的影響[J]. 食品工業(yè)科技,2014(5):350-353.

[25]孟雪蓮,楊靜玉,吳春福. 白藜蘆醇的藥理學(xué)作用研究進(jìn)展[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2008,25:51-54.

[26]裴玲,張雪娜. 白藜蘆醇清除自由基活性的密度泛函理論研究[J]. 分子科學(xué)學(xué)報,2016(4):346-352.

Antioxidantactivityoftheselenium-richedricepeptidesinvivo

QINYun,SHIPei-lin,LIUWei-wei,GUODan-jun,HEHui*

(College of Food Science and Technology,Huazhong Agricultural University/Key Laboratory of Environmental Food Science of Ministry of Education,Wuhan 430070,China)

Objective:To compare the antioxidant activity of the ordinary rice peptides,selenomethionine and selenium-riched peptides. Methods:The mice(12 months of age)were administrated by the gavage of ordinary rice peptides(400 mg/kg·bw,Ⅰ group),selenium-riched peptides(400 mg/kg·bw,Ⅱ group),selenomethionine(2.5 μg/kg·bw,Ⅲ group),selenium-riched peptides(200 mg/kg·bw)+selenomethionine(1.225 μg/kg·bw,Ⅳ group)and resveratrol(10 mg/kg·bw,PC group)for 30 d respectively in different groups. The selenium content of Ⅱ group,Ⅲ group and Ⅳ group was same. Results:It showed that compared with the model group,YC group、Ⅱ group、Ⅲ group、Ⅳ group、PC group showed highly significant improvement on SOD in the serum(p<0.01);YC group、Igroup、Ⅳ group showed significant improvement on GSH in the serum(p<0.05),Ⅱ group and PC group showed highly significant improvement on GSH(p<0.01);YC group、Ⅱ group、PC group showed significant improvement on CAT in the serum(p<0.05);Ⅲ group、Ⅳ group showed significant improvement on GSH-Px in liver homogenateand(p<0.05),II group showed highly significant improvement on GSH-Px(p<0.01);Ⅱ group、Ⅳ group、PC group showed significant improvement on T-AOC in liver homogenateand(p<0.05);YC group、Ⅱ group showed significant decrease on MDA in liver homogenateand(p<0.05),PC group showed highly significant decrease on MDA(p<0.01);YC group、PC group showed significant improvement on GSH in liver homogenateand(p<0.05),II group showed highly significant improvement on GSH(p<0.01),and thymus and spleen index showed different degrees of improvement. The effect of selenium-riched peptides was almost the best,which the antioxidant activities of selenium-riched peptides were significantly higher than that of the ordinary rice peptides and most indexes of selenium-riched peptides were also significantly better than the same selenium content of selenomethionine. Conclusion:It suggested that selenium and peptides in selenium-riched rice peptides had a certain synergy effect on improving antioxidant activities.

selenium-riched rice peptide;selenomethionine;antioxidant;synergy

2017-03-29

秦蕓(1992-),女,碩士研究生,研究方向：功能活性肽,E-mail:936525300@qq.com。

*通訊作者:何慧(1960-),女,博士,教授,研究方向：功能活性肽,E-mail:hehui@mail.hzau.edu.cn。

TS218

:B

:1002-0306(2017)17-0305-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.17.060