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    HPLC法測定丹燈通腦片中葛根素的含量

    2017-09-20 12:35:39童艷
    東方食療與保健 2017年5期
    關鍵詞:腦片葛根素乙腈

    童艷

    黑龍江省濟仁藥業(yè)有限公司 150000

    HPLC法測定丹燈通腦片中葛根素的含量

    童艷

    黑龍江省濟仁藥業(yè)有限公司 150000

    目的:通過使用HPLC這一測定方式對丹燈通腦片之中所含有的葛根素進行分析。方法:使用Gemini類型色譜柱,并使用乙腈物質,百分之一的磷酸溶液來作為梯度洗脫物質,同時在整個實驗的過程之中保持整體流速為一摩爾每分鐘,設定相應的檢測波長度為三百一十八納米,在實驗過程之中維持實驗柱的溫度為三十五攝氏度。實驗結果:葛根素物質以及阿魏酸物質在二十一毫克每毫升到二百一十毫克每毫升的濃度數(shù)值范圍內其數(shù)據(jù)分析表封面面積和濃度數(shù)值表現(xiàn)出了良好的線性關系。結論:這種物質分析、檢測的方式在實驗之中表現(xiàn)出了實驗方式簡便、整體實驗速度快、實驗結果準確性高、試驗再現(xiàn)性良好的特點,所以這一方法也就成為了分析丹燈通腦藥物之中相應的葛根素物質的了優(yōu)秀技術。

    丹燈通腦片;HPLC法;葛根素

    由于目前社會之中生活、工作方面的節(jié)奏較快,并且一部分在工作之中超負荷進行,所以也就容易導致身體健康受到不同程度的影響,甚至在長時間的影響之下會出現(xiàn)的冠心病等類型的疾病,使得人們的正常生活受到較大影響,甚至在危險的情況下還會造成的人們生命安全方面的危險。為了有效的治療這種疾病,目前出現(xiàn)了丹燈通腦片這種藥物,這種藥物是中醫(yī)治療理念和現(xiàn)代只要科技相結合的產物,這一藥物的原藥方在我國出現(xiàn)的時間較早,在和現(xiàn)代化的只要技術相互融合之后實現(xiàn)了批量化的生產,通過這一藥物的使用能有效的治療患者自身出現(xiàn)的腦中風疾病、冠心病癥狀、心絞痛癥狀等癥狀,能改善顱腦內血液循環(huán),增加動脈血氧含量。增加腦和心臟冠狀動脈的血流量,增強心肌對缺血、缺氧的耐受性;增強血液內溶纖酶的活性,改善血液粘度;抑制血小板集聚和凝血過程;擴張周圍血管,改善毛細血管通透性,增加局部血流量,改善人體微循環(huán),在這一藥方之中含有較多的藥材,而其中最為主要的就是葛根藥物以及川芎藥物,從現(xiàn)代化制藥理論的基礎上對這些藥物進行分析就會發(fā)現(xiàn)這其中雖為重要的元素就葛根素物質以及阿魏酸物質,同時在進行丹燈通腦片這一藥物檢驗的過程中也主要是對這兩種進行檢驗。在本次實驗的過程之中主要是對藥物之中的葛根素進行相應的檢驗。

    1.實驗儀器以及藥物

    島津LC-20AT型高效液相色譜儀,BS-124S電子分析天平;Ⅺ對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110752-200511,供含量測定用),Ⅻ對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110773-200612,供含量測定用);丹燈通腦軟膠囊 3批(云南某藥廠,批號:C1306031,C1306005,C1306052);乙腈(色譜純,國藥集團化學試劑有限公司),磷酸(分析純,國藥集團化學試劑有限公司),二次重蒸水(自制)。

    2.實驗方法以及相應結果

    2.1 實驗條件

    使用Gemini類型色譜柱,并使用乙腈物質,百分之一的磷酸溶液來作為梯度洗脫物質,同時在整個實驗的過程之中保持整體流速為一摩爾每分鐘,設定相應的檢測波長度為三百一十八納米,在實驗過程之中維持實驗柱的溫度為三十五攝氏度。

    2.2 對照作用溶液標準

    量取葛根素相應的對照物質其質量二十一毫克左右,在經過精確稱量之后再使用一百毫升的容量瓶進行定容操作,方便后續(xù)的實驗使用。取Ⅻ對照品約13.0mg,精密稱定,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密吸取 20mL置上述溶液,用甲醇稀釋至刻度,即得混合對照品儲備液(1),葛根素和Ⅻ的濃度分別為 210.0mg·L-1和26.0mg·L-1;取葛根素對照品約70.0mg,精密稱定,置50mL量瓶中用甲醇溶解,取; 阿魏酸對照品約7.0mg,精密稱定,置25mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,再從中精密吸取25mL,置上溶液,用甲醇稀釋至刻度,即得混合對照品儲備液(2),葛根素和; 阿魏酸的濃度分別為1.4g·L-1和0.14g·L-1。2.3供試品溶液的制備取膠囊內容物約 0.2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇溶液 100mL,密塞,稱定重量,加熱回流 30min,冷卻至室溫,稱定重量,用70%甲醇溶液補足減失重量,搖勻,靜置,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.4 陰性對照溶液的制備按處方比例分別稱取除川芎以外的其余藥味和除葛根以外的其余藥味,按照制備工藝制成相應的陰性樣品,并按“供試品溶液的制備”項下方法操作,作為陰性對照溶液。

    2.5 方法學考察

    2.5.1 線性關系考察

    精密稱取葛根素對照品,加30%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別精密吸取0.5、1、2、3、4、5ml至10ml量瓶中,加30%乙醇稀釋至刻度,搖勻,分別精密吸取10μl,注入液相色譜儀,按以上方法測定峰面積,并以峰面積的積分值為縱坐標,對照品進樣量為橫坐標建立標準曲線,計算回歸方程,葛根素回歸方程為:y=4×106X-1.34×105(r=0.9999),葛根素在 0.1696μg~1.6960 μg范圍內呈良好的線性關系。

    2.5.2 精密度試驗

    取“線性關系考察”項下的對照品儲備液(1)6.0mL置10mL量瓶的對照品溶液20μL,在上述色譜條件下重復測定6次,記錄峰面積。Ⅺ和Ⅻ峰面積的RSD分別為1.7%與1.9%

    2.5.3 專屬性試驗

    精密吸取供試品溶液、“精密度試驗”項下的對照品溶液和陰性對照溶液各 20μL,注入液相色譜儀,結果陰性對照液在與對照品峰相應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn),表明陰性對照無干擾。

    2.5.4 穩(wěn)定性試驗

    取批號:C1306031供試品,按“供試品溶液的制備”項下方法得到供試品溶液,分別于0、2、4、8、12和24h進樣,按照上述色譜條件進樣分析。Ⅺ和Ⅻ峰面積的RSD分別為1.7%和1.8%。

    2.5.5 重復性試驗稱取同一批號的樣品6份,按“供試品溶液制備”項下方法操作,平行制備供試品溶液。依次進樣,以色譜峰面積按外標法計算。Ⅺ平均含量為81.46mg·g-1,RSD為1.4%;Ⅻ平均含量為7.217mg·g-1,RSD為1.2%。

    2.5.6 加樣回收率試驗稱取 0.1g已知含量的供試品(批號:C1306031)9份,精密稱定,按低、中、高濃度分別精密加入混合對照品儲備液(2),每一濃度3份,照“供試品溶液的制備”項下方法操作,所得供試品溶液并進樣分析,

    3 討論

    3.1 流動相的選擇實驗首先采用等度洗脫比較了甲醇—水、甲醇—磷酸水溶液、乙腈—水、乙腈—磷酸水溶液等不同系統(tǒng)和比例的流動相,結果表明,Ⅺ和Ⅻ與相鄰雜質峰分離效果不理想,經過不斷地探索,最終采用乙腈和0.1%磷酸水溶液梯度洗脫,兩組份與相鄰雜質峰分離效果理想。

    3.2 提取條件的選擇實驗中曾選用甲醇、70%甲醇、30%甲醇和30%乙醇超聲提取。結果表明甲醇和70%甲醇的提取效率相當且最高。又比較了超聲和加熱回流兩種提取方法的提取效果,結果表明加熱回流比超聲提取效果好,于是最終選擇70%甲醇加熱回流,提取完全。通過建立丹燈通腦片的含量測定指標,對丹燈通腦的質量進行控制,使產品的質量均一性生產各批次之間的差異性有了有效控制,對臨床用藥和產品治療法作用的一致性,有了可靠的保證。

    [1]邱震,周正華,杜安全.HPLC法測定參蘇感冒片中葛根素的含量[J].安徽醫(yī)藥,2007,11(1):29.

    [2]孫旌文,馬洪濤,許世輝.HPLC法測定安胎丸中阿魏酸的含量[J].安徽醫(yī)藥,2010,14(3):296-297.

    [3]宋金春,唐開勇.通脈口服液的質量標準研究[J].中國藥房,2006,17(22):1730-1732.

    [4]趙曉莉,崔小兵,狄留慶.HPLC法測定葛根素葡萄糖注射液中葛根素及 3'-甲氧基葛根素含量[J].中國藥學雜志,2000,7

    R473.5

    A

    1672-5018(2017)05-214-01

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