大孔樹脂結(jié)合蛋白純化對(duì)金銀花化學(xué)成分研究的可行性分析

黃廣君，梁錦添

(1.南寧學(xué)院 機(jī)電與質(zhì)量技術(shù)工程學(xué)院，廣西 南寧 530200；2.廣西大學(xué) 生命與科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530004)

大孔樹脂結(jié)合蛋白純化對(duì)金銀花化學(xué)成分研究的可行性分析

黃廣君1*，梁錦添2

(1.南寧學(xué)院 機(jī)電與質(zhì)量技術(shù)工程學(xué)院，廣西 南寧 530200；2.廣西大學(xué) 生命與科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530004)

在對(duì)金銀花研究現(xiàn)狀和價(jià)值進(jìn)行剖析的基礎(chǔ)上，提出以大孔樹脂結(jié)合蛋白純化技術(shù)，探索分離純化金銀花中綠原酸的工藝條件，并給出了綠原酸提取工藝流程圖。通過對(duì)金銀花化學(xué)成分及藥理價(jià)值研究的不斷深入，對(duì)增加金銀花的附加值，促進(jìn)當(dāng)?shù)卮迕衩撠氈赂坏牟椒ヒ约暗胤浇?jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。

金銀花；大孔樹脂；提取工藝

2010年新版《中華人民共和國藥典》中對(duì)金銀花和山銀花進(jìn)行了明確區(qū)分。按照2010版藥典規(guī)范，“忍冬科灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、華南忍冬或黃褐毛忍冬的干燥花蕾或帶初開的花”被稱為山銀花。只有忍冬科植物忍冬的花才能稱金銀花，山銀花不能入藥[1]。

然而，市場(chǎng)上受利益驅(qū)使，仍有部分不法分子和“黑心”商戶以次充好，以山銀花代替金銀花，有的是在金銀花里面添加了山銀花。如在2013年上半年，廣西醫(yī)藥食品行業(yè)風(fēng)波不斷的兩起事件：首先，廣藥集團(tuán)子公司廣西盈康藥業(yè)的供應(yīng)商廣東寶山堂制藥有限公司，硫磺熏制山銀花枝葉入藥事件被曝光；隨后，涼茶行業(yè)人士披露，采用山銀花代替金銀花實(shí)際上是涼茶行業(yè)中通行的慣例。這是因?yàn)榻疸y花的價(jià)格出現(xiàn)一路飆升的狀態(tài)，而且一直居高不下，相比金銀花來說，山銀花的產(chǎn)量較多，價(jià)錢也十分便宜，很多不法廠家和商販正是看重了這其中的巨大利潤，在售藥品時(shí)用山銀花代替金銀花，但兩者之間的差異使得它們?nèi)胨幒蟮乃幮в泻艽蟮牟顒e[2-3]。

1 金銀花的研究價(jià)值剖析

金銀花集觀賞、藥用、保健、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值于一身，市場(chǎng)對(duì)于金銀花的需求不斷加大，科研人員對(duì)金銀花的研究范疇也不斷擴(kuò)大，農(nóng)業(yè)人口特別是貧困山區(qū)人民更是將金銀花種植及加工產(chǎn)業(yè)作為改善家庭及區(qū)域經(jīng)濟(jì)條件的主要經(jīng)濟(jì)樹種，但由于各種原因的影響，在金銀花的生產(chǎn)加工中仍存在如下問題：①產(chǎn)品加工水平低下：金銀花加工農(nóng)戶以家庭作坊式的手工生產(chǎn)為主，加工方法原始，加工水平低下；②質(zhì)量難保證：金銀花加工人員大多是種植農(nóng)民，這部分人對(duì)金銀花生產(chǎn)加工專業(yè)知識(shí)知之甚少，加上文化水平有限，他們只能從事簡單操作加工，產(chǎn)品質(zhì)量很難保證；③種植方式不科學(xué)，繁殖主要采用種子播種和枝條扦插繁殖，不僅種子萌發(fā)率和枝條成活率低，且易攜帶病毒細(xì)菌，引起金銀花生產(chǎn)性能下降、生長不良、有效成分積累減少、植株及產(chǎn)品品質(zhì)降低。

金銀花的植物有多種，均來源于忍冬科忍冬屬的不同植物，目前國內(nèi)的主栽品種為忍冬與灰氈毛忍冬。長期從事金銀花研究的王冶教授認(rèn)為，忍冬的主要化學(xué)成份之一木犀草苷能顯著提高活性氧自由基水平，而灰氈毛忍冬中綠原酸含量高，能顯著清除體內(nèi)自由基，這就意味著金銀花的藥材道地性若干年后有可能要發(fā)生變化，意即南方的忍冬將成為金銀花的道地藥材。對(duì)金銀花的研究藥理活性成分的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定具有較高的理論科研價(jià)值和市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。

2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀

國內(nèi)外研究人員在對(duì)金銀花中活性成分進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，開展以金銀花為主要原料的日用品、保健食品研究[4-6]，歐洲已有把金銀花的主要活性成分綠原酸用于防止頭發(fā)損傷的染發(fā)劑和洗發(fā)液的專利產(chǎn)品，日本同樣利用綠原酸奇跡衍生物的抗氧化特性研制出了抗衰老的護(hù)膚用品。綠原酸在某些食品中取代或部分取代目前常用的人工合成的抗氧化劑；Hirazawa等人將綠原酸用于魚片的保鮮[7]，其效果要優(yōu)于茶葉提取物和 a-生育酸；添加了綠原酸的保健藥品具有清熱解毒養(yǎng)顏潤膚、解除煙酒過多等特點(diǎn)；德國 E.Eich 教授在研究有些植物次生代謝物作為抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑時(shí)，認(rèn)為綠原酸是最有希望成為抗艾滋病毒(HIV)的先導(dǎo)化合物[8]，同時(shí)病毒敏感性試驗(yàn)表明：金銀花醇提取液、水提取液、水超聲提取液均能顯著增強(qiáng)體外細(xì)胞抗腺病毒感染的能力，其中醇提取物抗病毒感染能力最強(qiáng)；體外實(shí)驗(yàn)表明，花和藤均對(duì)多種致病菌如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌等均有一定抑制作用，對(duì)肺炎球菌、腦膜炎雙球菌、綠膿桿菌，結(jié)核桿菌亦有效。水浸劑比煎劑作用強(qiáng)，葉煎劑比花煎劑作用強(qiáng)。若和連翹合用，抗菌范圍還可互補(bǔ)；與青霉素合用，能加強(qiáng)青霉素對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌作用，這可能是在抑制細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)合成上有協(xié)同的作用。

國內(nèi)雖對(duì)綠原酸的提取工藝有研究，但工藝過程繁瑣，產(chǎn)率低，作為醫(yī)藥中間體食品添加劑綠原酸市售價(jià)格1500～2000元/kg，一定程度上阻礙了其在藥品、保健品、花卉、飼料、化妝品和食品等行業(yè)的廣泛應(yīng)用[9-12]。因此通過對(duì)提取工藝、大孔樹脂型號(hào)、洗滌溶劑、萃取條件進(jìn)行研究，篩選獲得新的提純工藝，提高綠原酸純度及產(chǎn)量，以適合工業(yè)化大生產(chǎn)是非常必要而且可行的。

3 金銀花研究關(guān)鍵點(diǎn)

采用高效液相色譜法分離測(cè)定金銀花中活性成分-綠原酸、異綠原酸、黃酮含量，探索樣品中綠原酸、黃酮提取分離及定量條件；采用原子吸收光譜法測(cè)定金銀花中主要微量元素，探索樣品消化及測(cè)定條件；

以綠原酸為目標(biāo)成分，對(duì)金銀花的提取純化工藝進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)提取工藝、大孔樹脂型號(hào)、洗滌溶劑、萃取條件進(jìn)行研究，篩選獲得新的提純工藝，提高綠原酸純度及產(chǎn)量，以適合工業(yè)化大生產(chǎn)；

對(duì)綠原酸進(jìn)行抑菌特性研究，研究其對(duì)金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌等抑制作用。

深入調(diào)查廣西地區(qū)金銀花的生產(chǎn)、深加工現(xiàn)狀，初步探討與地方政府、企業(yè)合作進(jìn)行集金銀花種植、培育、收購、有效成分提取、深加工、銷售一體化經(jīng)營模式，促進(jìn)生態(tài)文明建設(shè)，將科技成果進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力的可行性研究。

以大孔樹脂結(jié)合蛋白純化技術(shù)，探索分離純化金銀花中綠原酸的工藝條件，大孔樹脂結(jié)合蛋白純化技術(shù)分離純化金銀花中綠原酸的工藝未見報(bào)導(dǎo)。擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問題：金銀花中微量元素的消化條件，確定主要實(shí)驗(yàn)參數(shù)；優(yōu)化金銀花中綠原酸的提取純化條件，摸索利用大孔樹脂純化綠原酸的工藝；確定金銀花中綠原酸類物質(zhì)的抑菌特性及規(guī)律。

圖1 綠原酸提取工藝流程圖

4 可行性分析

近年金銀花的市場(chǎng)行情穩(wěn)步上升，市場(chǎng)上出現(xiàn)了越來越多的金銀花產(chǎn)品，主要集中在藥品產(chǎn)業(yè)、保健品產(chǎn)業(yè)、花卉產(chǎn)業(yè)、飼料產(chǎn)業(yè)、化妝品產(chǎn)業(yè)和食品產(chǎn)業(yè)等六個(gè)方面。對(duì)金銀花化學(xué)成分及藥理價(jià)值研究的不斷深入，對(duì)增加金銀花的附加值，促進(jìn)當(dāng)?shù)卮迕衩撠氈赂坏牟椒ヒ约暗胤浇?jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。

[1] 方利娟. 藥用植物金銀花的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)探討[J].寧夏農(nóng)林科技，2013，54 (5)：27-28，114.

[2] 徐 永.金銀花與山銀花的鑒別[J].中醫(yī)中藥，2013(5)：173.

[3] 陳雅文. 淺談金銀花的化學(xué)成分、藥理作用和實(shí)用價(jià)值中藥研究[J].中國民間療法,2013,21(5):70-71.

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[9] 程 瑞，王 燕.金銀花的生物學(xué)功能及其在畜牧獸醫(yī)上的應(yīng)用前景[J].廣東飼料，2013，23(3)：42-44.

[10] 王蔚新，祝艷梅.桑葉金銀花復(fù)合保健飲料的研制[J].食品研究與開發(fā),2013,34 (7)：65.

[11] 王迎菊，王 凱，梁文紅.金銀花在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11(14)：68-71.

[12] 魯 斌，林 冰.金銀花口含片制備工藝及藥效研究[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2013,32(2)：150-152.

(本文文獻(xiàn)格式：黃廣君，梁錦添.大孔樹脂結(jié)合蛋白純化對(duì)金銀花化學(xué)成分研究的可行性分析[J].山東化工,2017,46(11):76-77,79.)

Feasibility Analysis of Chemical Constituents of Honeysuckle by Macroporous Resin-binding Protein Purification

HuangGuangjun1*,LiangJintian2

(1.School of Mechanical-Electronic and Quality Engineering,Nanning University,Nanning 530200,China; 2.College of Life Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530004,China)

Based on the analysis of the present situation and the value of honeysuckle,the technological conditions of separation and purification of chlorogenic acid from honeysuckle were explored by macroporous resin binding protein purification technology,and the chlorogenic acid extraction process flow chart was given. Through the deepening of the research on the chemical composition and pharmacological value of honeysuckle,it has important practical significance and market application value to increase the added value of honeysuckle,to promote the pace of local villagers' poverty alleviation and local economic development.

honeysuckle; macroporous resin; extracting technology

2016-12-01

南寧學(xué)院2013年度校級(jí)教授培育工程項(xiàng)目(2013JSGC-7)；南寧學(xué)院教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程項(xiàng)目(2014XJZDZY05)

黃廣君(1982—)，碩士，講師，研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)。

R284.2

A

1008-021X(2017)11-0076-02