靈芝孢子粉對癲癇大鼠腦組織BDNF與livin的影響

劉 輝

（江蘇省南通衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學校 護理系，江蘇 南通 226001）

靈芝孢子粉對癲癇大鼠腦組織BDNF與livin的影響

劉 輝

（江蘇省南通衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學校 護理系，江蘇 南通 226001）

目的研究靈芝孢子粉對癲癇大鼠腦組織BDNF與livin的影響，探討靈芝孢子粉保護癲癇大鼠腦細胞的可能機制。方法對健康雄性Wistar大鼠36只進行建模，隨機分成對照組（生理鹽水腹腔注射+生理鹽水灌胃），模型組（PTZ腹腔注射+生理鹽水灌胃），靈芝孢子粉組（PTZ腹腔注射+靈芝孢子粉灌胃），每組各12只，采用免疫組織化學方法檢測3組腦組織BDNF與livin水平。結(jié)果BDNF與livin在大鼠皮質(zhì)區(qū)、海馬區(qū)均可見表達。與對照組和模型組比較，靈芝孢子粉組的BDNF、livin表達水平明顯增加（P＜0.05）。結(jié)論BDNF與livin的表達可能在癲癇發(fā)病過程中扮演著重要的角色，推測靈芝孢子粉通過調(diào)控BDNF與livin表達來減少腦細胞損傷及凋亡，進而對癲癇腦組織起到保護作用。

靈芝孢子粉；癲癇；大鼠；腦組織；BDNF；livin

癲癇屬于臨床一大頑疾，其具體病因尚不清楚[1]。我國近年來癲癇發(fā)病人數(shù)呈日益上升的趨勢，一些癲癇患者雖然經(jīng)過正規(guī)治療，病情有所好轉(zhuǎn)，但是有一部分患者為“難治”癲癇[2]，病情難以得到控制。相關(guān)研究表明[3]，癲癇腦損傷是誘發(fā)癲癇發(fā)作之主要因素，也是癲癇難治、癲癇致殘之主要因素。靈芝孢子粉在免疫調(diào)節(jié)以及神經(jīng)系統(tǒng)保護等方面具有重要的作用，但是關(guān)于其對癲癇腦細胞之保護作用的研究尚少。本文主要揭示靈芝孢子粉對癲癇大鼠腦組織BDNF與livin的影響，探討靈芝孢子粉保護癲癇大鼠腦細胞的可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料：靈芝孢子粉：購自山東云海靈芝專業(yè)合作社；戊四氮（PTZ）：購自上海博頓生物化工有限公司；兔抗大鼠BDNF、livin多克隆抗體：購自艾美捷科技有限公司。DAB 顯色試劑盒：購自北京百奧萊博科技有限公司。

1.2 實驗動物分組：健康雄性Wistar大鼠36只，體質(zhì)量152～234 g，普通級動物，由某醫(yī)科大學動物實驗中心提供。實驗過程中大鼠的處置符合動物倫理學標準。依據(jù)體質(zhì)量把36只大鼠隨機分成3組：分成對照組（生理鹽水腹腔注射+生理鹽水灌胃），模型組（PTZ腹腔注射+生理鹽水灌胃），靈芝孢子粉組（PTZ腹腔注射+靈芝孢子粉灌胃），每組各12只。

1.3 取材：將3組大鼠麻醉后進行斷頭處死操作，低溫下快速取腦，并分離出海馬組織，運用中性甲醛溶液對其行24 h以上的固定操作，接著采用PBS水給予沖洗5次，使用酒精梯度實施脫水之后，運用石蠟進行包埋大腦皮質(zhì)和海馬組織，采用錫紙包裹好之后置入冰箱中待測。

1.4 BDNF與livin的測定：使用免疫組織化學方法測定各組大鼠大腦皮質(zhì)和海馬組織中的BDNF、livin水平，操作步驟分別嚴格按照兔抗大鼠BDNF、livin試劑盒說明書操作。染色切片在BI-2000醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)顯微鏡下觀察，呈棕黃色顆粒者為陽性。每張切片觀察10個有代表性的視野，并計數(shù)每一個視野的陽性細胞數(shù)以檢測BDNF與livin的表達情況。

1.5 統(tǒng)計學處理：應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計分析軟件包進行統(tǒng)計分析。計量資料采用（x-±s）表示，組間比較采用t分析，計數(shù)資料采用χ2分析，均以α=0.05作為檢驗水準，P＜0.05具有統(tǒng)計學差異。

2 結(jié) 果

2.1 各組大腦組織BDNF表達水平比較：與對照組和模型組比較，靈芝孢子粉組的BDNF表達水平明顯增加（P＜0.05），見表1。BDNF在大鼠皮質(zhì)區(qū)的表達見圖1；BDNF在大鼠海馬區(qū)的表達見圖2。

表1 各組大腦組織BDNF表達水平比較（個/視野，x-±s）

圖1 BDNF在大鼠皮質(zhì)區(qū)的表達

圖2 BDNF在大鼠海馬區(qū)的表達（DAB，X400）

2.2 各組大腦組織livin表達水平比較：與對照組和模型組比較，靈芝孢子粉組的livin表達水平明顯增加（P＜0.05），見表2。livin在大鼠皮質(zhì)區(qū)的表達見圖3；livin在大鼠海馬區(qū)的表達見圖4。

3 討 論

癲癇發(fā)作主要是因為腦部神經(jīng)元發(fā)生異常放電，同時中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)興奮性異常，致使大腦發(fā)生短暫性的功能障礙[4-5]。腦源性神經(jīng)生長因子（BDNF）屬于一種重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)元生長等過程中具有十分重要的作用[6-8]。本研究顯示，BDNF在大鼠皮質(zhì)區(qū)、海馬區(qū)均可見表達。與對照組和模型組比較，靈芝孢子粉組的BDNF表達水平明顯增加（P＜0.05）。說明，靈芝孢子粉能夠促進癲癇大鼠腦組織中BDNF的表達，并能夠延長BDNF的表達時程，進而對大腦起到一定的保護作用。

表2 各組大腦組織livin表達水平比較（個/視野）

圖3 livin在大鼠皮質(zhì)區(qū)的表達（DAB，x100）

圖4 livinF在大鼠海馬區(qū)的表達（DAB，x200）

相關(guān)研究表明[9-10]，Livin在脾、卵巢、肺與腦等組織中存在表達，但是在正常組織中的表達比較少。同時，Livin也屬于抗損傷因子，可以促進癇性腦損傷的恢復。本研究顯示， 與對照組和模型組比較，靈芝孢子粉組的livin表達水平明顯增加（P＜0.05）。研究提示，靈芝孢子粉可以通過提高livin的表達，來降低大腦腦組織損傷。

綜上所述，靈芝孢子粉可能是通過提高BDNF與livin的表達，而發(fā)揮出對神經(jīng)元的保護作用，對癲癇具有良好的治療效果。

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R742.1 文獻標識碼：B 文章編號：1671-8194（2017）23-0022-02

江蘇省衛(wèi)生科研項目JZ201319