手工MGIT液體培養(yǎng)基在臨床中的應(yīng)用

王龍剛 孫建文* 姜小華 王品領(lǐng)

（中國人民解放軍第八五醫(yī)院，上海 200235）

手工MGIT液體培養(yǎng)基在臨床中的應(yīng)用

王龍剛 孫建文* 姜小華 王品領(lǐng)

（中國人民解放軍第八五醫(yī)院，上海 200235）

目的手工MGIT液體培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌在一線結(jié)核定點(diǎn)醫(yī)院應(yīng)用效果評(píng)價(jià)。方法收集中國人民解放軍第八五醫(yī)院結(jié)核病中心1748例痰液標(biāo)本，分別接種傳統(tǒng)L-J培養(yǎng)基和MGIT液體培養(yǎng)基，比較兩種培養(yǎng)方法的檢出率和報(bào)陽時(shí)間。結(jié)果在1748份痰液標(biāo)本中：MGIT液體培養(yǎng)基檢出420例（24%），平均報(bào)陽時(shí)間18.5 d。L-J培養(yǎng)基檢出312例（17.8%），平均報(bào)陽時(shí)間30.5 d。結(jié)論手工MGIT液體培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌能快速檢出分枝桿菌，檢出率高，報(bào)陽時(shí)間短，能及時(shí)準(zhǔn)確的為臨床提供診斷依據(jù)，適合在一線臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。

結(jié)核??；MGIT液體培養(yǎng)基；臨床應(yīng)用

結(jié)核病作為一種古老的疾病，現(xiàn)在依然嚴(yán)重威脅著人類的健康，中國結(jié)核病的發(fā)病率位居世界第二，耐多藥結(jié)核發(fā)病率世界第一。結(jié)核病的早期發(fā)現(xiàn)對(duì)結(jié)核病的控制至關(guān)重要，而細(xì)菌學(xué)診斷在結(jié)核病的診斷和防控工作中起著重要的作用。在我國培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌使用最多的是L-J固體培養(yǎng)法，其培養(yǎng)周期長，平均報(bào)陽時(shí)間4周以上。手工MGIT液體培養(yǎng)系統(tǒng)，檢出率高，報(bào)陽時(shí)間短，無需昂貴儀器，操作簡便。將上述兩種培養(yǎng)方法結(jié)果進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)其分離培養(yǎng)效果。

1 材 料

1.1 標(biāo)本來源：解放軍第八五醫(yī)院結(jié)核病防治中心，按照《肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS288-2008）》，收集1748例有效樣本。

1.2 試劑和儀器：MGIT液體培養(yǎng)基、熒光判讀器、痰標(biāo)本前處理液、

50 mL離心管（BD公司提供），L-J培養(yǎng)基（上海疾控生物），萋尼氏染液（珠海貝索）。

2 方 法

2.1 標(biāo)本前處理：按照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》操作，采用NALC-NaOH法進(jìn)行標(biāo)本處理。用無菌吸管吸取干酪樣或膿性痰部分1～2 mL，移至50 mL無菌離心管中；視痰標(biāo)本性質(zhì)酌情加入1～2倍量的NALC-NaOH消化液（用時(shí)臨時(shí)配制），渦旋混勻15～20 s后室溫靜置15 min；加入pH 6.8 （PBS）至50 mL，混勻，3 000 g離心15 min，傾去上清液備用。

2.2 L-J培養(yǎng)基分離培養(yǎng)：每份經(jīng)NALC-NaOH法處理的標(biāo)本接2支改良L-J培養(yǎng)基，每支L-J培養(yǎng)基接種0.1 mL，放置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，接種后3、7 d分別觀察結(jié)果1次，然后每周觀察結(jié)果1次。發(fā)現(xiàn)菌落生長，經(jīng)抗酸染色證實(shí)為抗酸分枝桿菌后報(bào)告陽性，若為陰性報(bào)告污染。若觀察滿8周仍無菌落生長，可報(bào)告陰性。

2.3 手工MGIT分離培養(yǎng)：接種標(biāo)本前，在4 mL液體培養(yǎng)管中分別加入0.5 mL（OADC）營養(yǎng)添加劑和0.1 mL（PANTA）雜菌抑制劑，然后每管接種經(jīng)NALC-NaOH法處理的同份標(biāo)本0.5 mL，放置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。從培養(yǎng)的第2天開始，每天用熒光判讀儀對(duì)培養(yǎng)管進(jìn)行檢測。熒光判讀儀報(bào)告陽性者，對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行涂片，抗酸染色鏡檢證實(shí)為抗酸分枝桿菌后報(bào)告陽性，若為陰性報(bào)告，則報(bào)告污染。培養(yǎng)管連續(xù)培養(yǎng)、監(jiān)測6周時(shí)，若熒光判讀儀報(bào)告陰性，則標(biāo)本報(bào)告為陰性，并對(duì)培養(yǎng)管底部沉淀物進(jìn)行涂片及抗酸染色鏡檢，判斷是否為假陰性。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法培養(yǎng)陽性率比較：見表1。由表1可以看出，手工MGIT培養(yǎng)法培養(yǎng)陽性420例，陽性率24%，改良L-J培養(yǎng)出312例，陽性率17.8。2.2 兩種方法報(bào)陽時(shí)間比較：由表1，手工MGIT培養(yǎng)法平均報(bào)陽時(shí)間為平均18.5天，傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)法報(bào)陽時(shí)間為平均30.5天。

3 討 論

分枝桿菌培養(yǎng)被認(rèn)為是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)，在我國大多數(shù)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在采用的培養(yǎng)法主要還是L-J法。但分枝桿菌在L-J培養(yǎng)基上生長緩慢，而在液體培養(yǎng)基中能快速生長。MGIT液體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)結(jié)果觀察通過紫外線檢測熒光強(qiáng)度判斷陽性，MGIT液體培養(yǎng)基試管底部的硅樹脂內(nèi)嵌有熒光化合物，該熒光化合物可隨著微生物生長逐漸消耗掉氧氣分解而產(chǎn)生熒光，在微量細(xì)菌生長，肉眼未能觀察到時(shí)即產(chǎn)生熒光，顯示了MGIT液體培養(yǎng)基的特點(diǎn)。

表1 兩種方法培養(yǎng)陽性率與報(bào)陽時(shí)間的比較[n（%）]

通過本次實(shí)驗(yàn)可以看出無論在涂陽和涂陰標(biāo)本，手工MGIT培養(yǎng)系統(tǒng)在陽性檢出率和報(bào)陽時(shí)間上均占有優(yōu)勢，能夠更快的做出藥敏結(jié)果。當(dāng)然在污染率（MGIT污染率7.6%，L-J污染率4.7%）方面略高于改良L-J法，這要求在實(shí)驗(yàn)操作過程中嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，無菌操作。因此，在一線臨床實(shí)驗(yàn)中開展手工MGIT液體培養(yǎng)能為臨床醫(yī)師提供更快更準(zhǔn)確的細(xì)菌學(xué)診斷依據(jù)，確診結(jié)核病，為患者提供更好更優(yōu)質(zhì)的診療服務(wù)。

[1] 中國防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì).結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程[M].北京:中國教育文化出版社,2006.

[2] 李靜,桂曉紅,孫丕,等.MGIT液體培養(yǎng)基檢測分枝桿菌效果的評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011(2):111-114.

[3] 孫靈利,趙平,張建花,等.手工MGIT系統(tǒng)在基層結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室中檢測分枝桿菌的效果評(píng)價(jià)[J].中國防癆雜志,2013,35(12):1003-1006.

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Manual MGIT Liquid Medium in Clinical Application

WANG Long-gang, SUN Jian-wen, JIANG Xiao-hua, WANG Pin-ling

(85th Hospital of People 's Liberation Army, Shanghai 200235, China)

ObjectiveMmanual MIT liquid culture of Mycobacterium tuberculosis effect evaluation method applied in first-line tuberculosis hospitals.MethedCollect Tuberculosis Center of 85th Hospital of People 's Liberation Army 1748 cases of tuberculosis sputum samples inoculated Roche traditional medium and MGIT liquid medium. The detection rate comparison of two methods of cultivation and reported positive time.ResultsIn 1748 sputum specimens: MGIT liquid medium detected 420 cases (24%), with an average time of 18.5 days reported positive. L-J medium detected 312 cases (17.8%), the average time of 30.5 days reported positive.ConclusionManual MGIT liquid culture of Mycobacterium tuberculosis can be quickly detected mycobacteria detection rate, reported positive short time, be able to provide timely and accurate basis for clinical diagnosis, for the first-line clinical laboratory applications.

Tuberculosis; MGIT liquid medium; Clinical application

R521 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1671-8194（2017）23-0004-02

*通訊作者：E-mail:w080255@126.com