李雪蓮 楊芬紅 戴婉波
【摘要】 目的 探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)在稽留流產(chǎn)患者外周血中的表達(dá)情況。
方法 30例稽留流產(chǎn)患者作為觀察組, 30例自愿進(jìn)行人工流產(chǎn)的健康早孕者作為對(duì)照組, 利用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)兩組研究對(duì)象外周血中CD4+CD25+Treg表達(dá)情況, 計(jì)算得出CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例, 并進(jìn)行組間比較。結(jié)果 對(duì)照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為(5.31±2.61)%, 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為(4.07±1.67)%, 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 CD4+
CD25+Treg降低可能參與了稽留流產(chǎn)發(fā)生過程, 而其水平在妊娠早期表達(dá)明顯升高, 可能是與正常妊娠的維持以及母胎免疫耐受調(diào)節(jié)等有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 稽留流產(chǎn);外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞;表達(dá)
DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.25.060
稽留流產(chǎn)是婦產(chǎn)科常見病和多發(fā)病之一, 目前發(fā)病原因不明。母胎界面的免疫失衡是較為公認(rèn)的發(fā)病原因。而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell, Treg) 是調(diào)控母胎界面局部免疫耐受形成的重要因素, 對(duì)正常免疫耐受和妊娠的維持起重要作用。Treg為CD4+CD25+T細(xì)胞, 具有免疫負(fù)性調(diào)節(jié)功能。研究發(fā)現(xiàn), 在小鼠孕早期轉(zhuǎn)移體外擴(kuò)增的Treg細(xì)胞可保護(hù)胚胎避免自然流產(chǎn)發(fā)生。既往研究資料顯示, CD4+CD25+Treg細(xì)胞與母體對(duì)胎兒的耐受程度有一定影響[1, 2]。為了研究CD4+CD25+Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)發(fā)生的過程中是否發(fā)揮作用, 本研究將檢測(cè)CD4+CD25+Treg在稽留流產(chǎn)患者和健康早孕者外周血中的表達(dá)情況, 從而初步探討其在稽留流產(chǎn)中的作用?,F(xiàn)報(bào)告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 選取2016年12月~2017年3月本院婦科門診收治的稽留流產(chǎn)患者30例作為觀察組, 年齡20~34歲, 平均年齡(27.30±4.21)歲, 孕周6~10周;并選擇同期在本院自愿進(jìn)行人工流產(chǎn)的健康早孕者30例作為對(duì)照組, 年齡19~34歲, 平均年齡(26.07±4.07)歲, 孕周5~10周。兩組研究對(duì)象年齡、孕周等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。
1. 2 檢測(cè)方法 選用美國(guó)BD公司C6型流式細(xì)胞儀、日本久保田4000型臺(tái)式離心機(jī)、美國(guó)Peprotech公司的PMA(10X)、Ionomycin(10X)、Brefeldin A(10X)Fixation/Permeabilization
Concentrate、Fixation/Permeabilization Diluent、Permeabilization Buffer工作液(1X)、相關(guān)熒光標(biāo)記流式抗體Anti human CD4-FITC, Anti-Human CD25 PE-Cyanine7及同型對(duì)照抗體等完成檢測(cè)。具體檢測(cè)步驟:所有受試者均抽取2.0 ml外周靜脈血, 并且給予20 μl/ml劑量的肝素抗凝處理后, 在6 h內(nèi)完成檢驗(yàn)。CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并計(jì)算得出結(jié)果。所有操作步驟均需要嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行, 并且保證在無菌環(huán)境中完成。
1. 3 觀察指標(biāo) 對(duì)比兩組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例。
1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
對(duì)照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為(5.31±2.61)%, 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為(4.07±1.67)%, 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.19, P<0.05)。
3 討論
稽留流產(chǎn)是早期自然流產(chǎn)的一種, 在臨床上常常發(fā)生。臨床主要表現(xiàn)為停經(jīng)、陰道少量流血, B超提示未見心管波動(dòng), 胚胎發(fā)育小于孕周等影像學(xué)表現(xiàn)。目前, 其發(fā)病的機(jī)制尚未完全明確。隨著研究的深入, 越來越多的證據(jù)表明, 母胎免疫失調(diào)在早期自然流產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用。但是目前尚無關(guān)于Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)中的作用研究。
現(xiàn)代生殖免疫學(xué)研究指出, 母胎免疫耐受與正常妊娠維持具有密切相關(guān)性, 如果母體免疫耐受機(jī)制平衡被打破, 則會(huì)導(dǎo)致病理性妊娠, 例如流產(chǎn)等的發(fā)生。也有學(xué)者指出, 細(xì)胞因子在妊娠成功過程中具有重要影響[3]。Treg細(xì)胞是近年來發(fā)現(xiàn)的一種T細(xì)胞, 是具有調(diào)節(jié)功能的成熟T細(xì)胞亞群, 最早發(fā)現(xiàn)于腫瘤疾病和免疫性疾病中。隨著臨床研究的深入和分子生物學(xué)的進(jìn)展, Treg細(xì)胞在機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)維持、移植耐受、腫瘤免疫、過敏反應(yīng)及微生物感染等方面的調(diào)節(jié)功能逐漸被證實(shí)。Treg細(xì)胞對(duì)于外周血中T細(xì)胞的穩(wěn)定, 有著一定的維持作用, 在免疫耐受的發(fā)生過程中有著重要的作用?,F(xiàn)階段的研究發(fā)現(xiàn), CD4+CD25+Treg具有免疫抑制調(diào)節(jié)功能, 與母胎免疫耐受的形成具有相關(guān)性[4, 5]。有研究發(fā)現(xiàn)Treg數(shù)量的異常可能參與了自然流產(chǎn)的發(fā)生[6-9]。本研究結(jié)果顯示, 對(duì)照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為(5.31±2.61)%, 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為(4.07±1.67)%, 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 這與其他相關(guān)文獻(xiàn)研究結(jié)果相符[10], 說明CD4+CD25+Treg水平與稽留流產(chǎn)的發(fā)生有一定聯(lián)系, 其水平降低可能是導(dǎo)致稽留流產(chǎn)發(fā)生的原因。endprint
綜上所述, CD4+CD25+Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)、健康早孕孕婦之間的表達(dá)存在明顯差異, CD4+CD25+Treg細(xì)胞降低可能參與了稽留流產(chǎn)發(fā)生過程, 而其水平在妊娠早期表達(dá)升高, 可能是與正常妊娠的維持以及母胎免疫耐受調(diào)節(jié)等有關(guān), 可在臨床上對(duì)其進(jìn)行檢測(cè), 為稽留流產(chǎn)的診斷和預(yù)防提供指導(dǎo)。
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[收稿日期:2017-05-15]endprint