刷牙對(duì)酸蝕后釉質(zhì)表面磨損程度的研究

陳麗培慈向科歐曉艷

1.鄭州市口腔醫(yī)院兒童口腔科，鄭州 450000；2.南昌大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔預(yù)防科，南昌 330000

刷牙對(duì)酸蝕后釉質(zhì)表面磨損程度的研究

陳麗培1慈向科2歐曉艷2

1.鄭州市口腔醫(yī)院兒童口腔科，鄭州 450000；2.南昌大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔預(yù)防科，南昌 330000

目的比較經(jīng)檸檬酸酸蝕后的釉質(zhì)塊在不同再礦化時(shí)間后，刷牙對(duì)其表面磨損深度的影響。方法60個(gè)釉質(zhì)塊平均分為A～F共6組，分別安置在10個(gè)志愿者的腭基托上。實(shí)驗(yàn)第1天，志愿者口腔中佩戴腭基托24 h，其后3 d，每天進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)2次。步驟如下：首先，用蜂蠟覆蓋F組釉質(zhì)塊，將腭基托置于50 mL檸檬酸溶液中酸蝕2 min，然后取出腭基托，沖洗，并將F組釉質(zhì)塊蜂蠟去除；其他組為酸蝕后經(jīng)過不同的再礦化時(shí)間后刷牙（A組：0 min；B組：20 min；C組：40 min；D組：60 min；E組：酸蝕并且再礦化，但不刷牙；F組：不酸蝕，再礦化，刷牙）。進(jìn)食及清潔時(shí)取出腭基托，其余時(shí)間均需佩戴腭基托。通過表面輪廓儀測(cè)量釉質(zhì)塊的磨損深度，并用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察其表面形貌。。結(jié)果酸蝕后經(jīng)過不同時(shí)間的再礦化，刷牙對(duì)釉質(zhì)塊表面造成的磨損深度不同，各組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SEM結(jié)果顯示，釉質(zhì)酸蝕后再礦化時(shí)間越短，刷牙后表面凹陷越大越深越多，表面形態(tài)越粗糙。結(jié)論 釉質(zhì)被酸蝕后，在唾液中再礦化時(shí)間增加，立即刷牙會(huì)對(duì)釉質(zhì)表面形成較大的磨損，60 min后再刷牙可以有效減少刷牙對(duì)酸蝕釉質(zhì)的磨損。

刷牙磨損； 酸蝕； 再礦化； 含氟牙膏

牙齒酸蝕癥是指在沒有細(xì)菌參與的情況下，由于酸的化學(xué)侵襲或螯合作用，牙體表面硬組織局部性、病理性、慢性進(jìn)行性喪失的一種疾病。早期釉質(zhì)脫礦可以被唾液再礦化修復(fù)，但如果在進(jìn)食酸性飲料后立刻刷牙，就會(huì)導(dǎo)致牙齒結(jié)構(gòu)的不可逆性喪失[1]。本研究目的是測(cè)定酸蝕后經(jīng)過不同再礦化時(shí)間再刷牙對(duì)釉質(zhì)造成的磨損深度，并進(jìn)行組織學(xué)和形態(tài)學(xué)的觀察，為口腔保健提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 志愿者的選擇及培訓(xùn)

經(jīng)南昌大學(xué)附屬口腔醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，征集10名志愿者，要求符合如下條件：1）年齡為20～30歲，身體健康，無(wú)全身系統(tǒng)性疾病；2）牙列完整，咬合良好，無(wú)活躍性齲壞，無(wú)牙周疾病；3）近1個(gè)月內(nèi)無(wú)口腔及上呼吸道感染。

志愿者試驗(yàn)期間需佩戴腭基托。試驗(yàn)前對(duì)志愿者進(jìn)行培訓(xùn)，反復(fù)訓(xùn)練，刷牙采用統(tǒng)一方法和統(tǒng)一力度，受試期間不使用任何抗齲或抗菌成分的藥物及漱口水，避免食用高氟食品、酸性食品及一切零食。進(jìn)食時(shí)間和口腔清潔時(shí)間需將實(shí)驗(yàn)腭基托取下來，置于50 mL人工唾液中，進(jìn)食后用大量自來水漱口以清潔口腔（600 mL自來水漱口1 min），然后重新佩戴腭基托，除了這兩個(gè)時(shí)間段，其余時(shí)間腭基托均佩戴在口腔內(nèi)。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1 釉質(zhì)塊的制備 收集新鮮拔除、健康無(wú)齲的正畸減數(shù)年輕前磨牙80顆，經(jīng)體視顯微鏡觀察，要求無(wú)齲、無(wú)裂紋、無(wú)釉質(zhì)發(fā)育不全等其他異常。牙齒清潔干凈，金剛砂片切取頰面釉質(zhì)，砂紙拋光釉質(zhì)面，制備成厚約2 mm、大小約5 mm×5 mm的釉質(zhì)標(biāo)本塊。超聲清洗、干燥，用維氏顯微硬度計(jì)HVS-1000進(jìn)行3次顯微硬度測(cè)定，挑選出顯微硬度值最接近計(jì)算平均值的60個(gè)釉質(zhì)塊進(jìn)行研究[2]。將標(biāo)本浸入10%甲醛溶液溶液（pH=7）中7 d，然后浸入0.1%麝香草酚飽和水溶液中待用。

1.2.2 檸檬酸溶液的配置 將0.042 g C6H8O7·H2O檸檬酸顆粒（分析純）加入到200 mL蒸餾水中，充分混勻、溶解，配置成濃度為0.001 mol·L-1、pH值約為3.20的實(shí)驗(yàn)用檸檬酸溶液。

1.2.3 人工唾液的配置 采用ISO/TR1027:1993標(biāo)準(zhǔn)配置人工唾液：NaCl 0.4 g、KCl 0.4 g、CaCl2·2H2O 0.759 g、NaH2PO4·2H2O 0.78 g、Na2S·2H2O 0.005 g、Urea 1 g，溶于1 000 mL蒸餾水中，調(diào)整pH值至7.0，高壓消毒，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 牙膏和牙刷的選擇 牙膏選擇高露潔含氟牙膏（氟質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.14%），牙刷選擇Oral-b軟毛牙刷。

1.2.5 口內(nèi)腭基托的制備及實(shí)驗(yàn)分組 為每個(gè)志愿者制作腭基托，上頜磨牙區(qū)制備6個(gè)6 mm×6 mm×2 mm的凹陷，隨機(jī)選擇釉質(zhì)塊樣本，用蜂蠟固定于6個(gè)凹陷處，釉質(zhì)面朝外，近遠(yuǎn)中邊緣用樹脂固定，留下3 mm×5 mm的中央?yún)^(qū)域開窗區(qū)。60個(gè)釉質(zhì)塊共分為A、B、C、D、E、F共6組，每組10個(gè)樣本。

1.2.6 唾液獲得性膜形成 實(shí)驗(yàn)第1天，志愿者在口腔中佩戴各自的腭基托（24 h），以便釉質(zhì)塊表面形成唾液獲得性膜。

1.2.7 酸蝕釉質(zhì) 實(shí)驗(yàn)第2天上午8:00進(jìn)行第1次實(shí)驗(yàn)。將腭基托從口內(nèi)取出，沖洗，吹干，F(xiàn)組釉質(zhì)塊表面覆蓋薄層蜂蠟，將腭基托置于50 mL檸檬酸溶液中酸蝕2 min，然后取出沖洗，并將F組釉質(zhì)塊表面的蜂蠟去除。

1.2.8 再礦化與釉質(zhì)磨刷 酸蝕后A組立即進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)。取豌豆大?。s0.3 g）牙膏，用牙刷對(duì)各個(gè)釉質(zhì)塊統(tǒng)一方向統(tǒng)一力度（輕輕按壓，使牙刷毛與釉質(zhì)塊成45°角，從釉質(zhì)塊近中向遠(yuǎn)中方向拂刷）磨刷40次（每秒刷1次，共40 s），然后沖洗干凈。志愿者口含20 mL雪碧，5 s后吞咽，而后將腭基托置入口腔內(nèi)。再礦化20 min后將腭基托裝置從口內(nèi)取出，沖洗干凈，對(duì)B組進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（方法同A組），然后沖洗干凈，將腭基托重新置入口腔內(nèi)。再礦化40 min后對(duì)C組進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（方法同A組），然后沖洗干凈，將腭基托重新置入口腔內(nèi)。再礦化60 min后對(duì)D組進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（方法同A組），然后沖洗干凈，將腭基托重新置入口腔內(nèi)。E組進(jìn)行酸蝕和再礦化，但是不進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)。不同實(shí)驗(yàn)組的具體方法見表1。

表 1 實(shí)驗(yàn)分組及處理措施Tab 1 Experimental groups and treatment measures

1.2.9 循環(huán)操作 重復(fù)上述步驟1.2.7和1.2.8，完成一次完整的釉質(zhì)酸蝕后刷牙再礦化實(shí)驗(yàn)，每天進(jìn)行兩次（上午8:00和下午8:00），共進(jìn)行3 d；在第6次刷牙實(shí)驗(yàn)后，取出各個(gè)釉質(zhì)塊。

1.2.10 表面輪廓儀測(cè)量磨損深度 用AMBIOS-XP2型表面輪廓儀測(cè)量各個(gè)釉質(zhì)塊的磨損深度。樹脂覆蓋的面作為基準(zhǔn)面，取釉質(zhì)塊中1/3處基準(zhǔn)面和釉質(zhì)塊刷牙磨損面之間的高度差作為磨損深度。輪廓儀針尖在釉質(zhì)塊表面走過的距離中記錄3個(gè)讀數(shù)，取其平均值。單位為μm。

1.2.11 掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）觀察表面形貌 各組標(biāo)本在FEI Quanta-200F型環(huán)境SEM下進(jìn)行觀察，觀察釉質(zhì)塊的表面形貌。

1.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用SAS 9.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入和統(tǒng)計(jì)分析，6組間比較采用秩和檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用LSD法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 磨損深度

各組的磨損深度見表2：隨著釉質(zhì)酸蝕后再礦化時(shí)間的增加，釉質(zhì)表面的磨損深度逐漸減小，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。分析結(jié)果可見：1）刷牙會(huì)對(duì)酸蝕后的釉質(zhì)表面造成磨損，A、B、C、D組釉質(zhì)表面磨損深度與對(duì)照組E組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；2）酸蝕對(duì)釉質(zhì)表面磨損有影響，A、B、C、D組與對(duì)照組F組比較，磨損深度增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 SEM觀察

圖 1 各組的表面形貌 SEM × 8 000Fig 1 The surface morphology in different groups SEM × 8 000

SEM下各組的表面形貌見圖1：酸蝕后立即進(jìn)行刷牙（A組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)大量密集不平整的凹陷，凹陷程度較深；酸蝕后再礦化20 min再進(jìn)行刷牙（B組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)散在分布凹陷，凹陷數(shù)量較A組的少，凹陷程度也較A組稍淺；酸蝕后再礦化40 min（C組）再進(jìn)行刷牙的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)少量凹陷；酸蝕后再礦化60 min再進(jìn)行刷牙（D組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)較淺的散在的小凹陷；只進(jìn)行酸蝕和再礦化，不進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（E組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)小的點(diǎn)狀的凹陷；只進(jìn)行再礦化和刷牙，不進(jìn)行酸蝕（F組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)較平整光滑的表面，無(wú)明顯凹陷。通過觀察6組釉質(zhì)塊的SEM圖片可以看出，釉質(zhì)被酸蝕后再礦化時(shí)間越短，其表面凹陷越大越深越多，表面形態(tài)越粗糙。

表 2 酸蝕后不同再礦化時(shí)間對(duì)磨損深度的影響Tab 2 The different time of enamel remineralization after acid etching to the influence of the enamel surface wear depth n=10,±s

表 2 酸蝕后不同再礦化時(shí)間對(duì)磨損深度的影響Tab 2 The different time of enamel remineralization after acid etching to the influence of the enamel surface wear depth n=10,±s

注：6組間比較，F(xiàn)=52.449，P＜0.001；a：與A組比較，P＜0.05；b：與B組比較，P＜0.05；c：與C組比較，P＜0.05；d：與D組比較，P＜0.05；e：與E組比較，P＜0.05。

組別磨損深度/μm A 6.76±1.05 B 6.08±0.89aC 5.27±0.56abD 4.35±0.46abcE 1.24±0.29abcdF 0.69±0.14abcde

3 討論

酸性食物和酸性飲料的消費(fèi)量增加已成為酸蝕癥患病率上升的一個(gè)重要影響因素[3]，牙酸蝕癥已成為一種常見的口腔疾病。當(dāng)進(jìn)食酸性食物或碳酸飲料后，釉質(zhì)局部微環(huán)境的pH值下降至低于5.5時(shí)，硬組織中羥磷灰石晶體溶解破壞，表面脫鈣不僅直接導(dǎo)致釉質(zhì)的損失，同時(shí)也降低釉質(zhì)表面的硬度和彈性模量，因此酸蝕后的釉質(zhì)比起正常的釉質(zhì)，更容易受到磨損和磨耗。

為了研究酸蝕癥和刷牙磨損之間的關(guān)系，眾多研究者設(shè)計(jì)出了各種不同的實(shí)驗(yàn)方法來進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)環(huán)境基本分為口腔內(nèi)實(shí)驗(yàn)、口腔外實(shí)驗(yàn)和口腔內(nèi)外聯(lián)合實(shí)驗(yàn)?？谇煌鈱?shí)驗(yàn)由于要借助于人工唾液，而不同配比的人工唾液對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)有不同的影響[4]，而且，口腔環(huán)境的復(fù)雜性和多樣性使得體外無(wú)法準(zhǔn)確模擬口腔環(huán)境，而在實(shí)驗(yàn)過程中，為了不使口腔中的其他牙齒處在被酸蝕的環(huán)境中，酸蝕釉質(zhì)又不可能在口腔內(nèi)進(jìn)行，因此，建立口腔內(nèi)外聯(lián)合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ拖到y(tǒng)具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)采取口腔內(nèi)外聯(lián)合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑢⒂再|(zhì)塊通過腭基托固定，再礦化步驟在口腔內(nèi)進(jìn)行，而酸蝕和刷牙磨損在口腔外進(jìn)行。

在酸蝕發(fā)生的最初階段，釉質(zhì)發(fā)生軟化，酸使釉質(zhì)結(jié)構(gòu)完整性發(fā)生改變，同時(shí)機(jī)械強(qiáng)度降低。在這個(gè)階段，軟化的釉質(zhì)可以實(shí)現(xiàn)再礦化[5]。對(duì)軟化釉質(zhì)再礦化最重要的因素是唾液和氟化物[6]。有研究[7]認(rèn)為，唾液在碳酸飲料酸蝕釉質(zhì)脫礦過程中通過多種方式發(fā)揮著保護(hù)牙齒的作用。在口腔內(nèi)，牙齒表面被覆著由唾液蛋白組成的獲得性膜。這層獲得性膜作為物理屏障，有保護(hù)釉質(zhì)表面、抵抗酸蝕的作用，作為化學(xué)屏障，有緩沖飲料、降低飲料和牙齒界面pH值的作用[8-9]。此外，當(dāng)飲料在口內(nèi)吞咽時(shí)，唾液的分泌可以緩沖口腔內(nèi)pH值、促進(jìn)酸在口內(nèi)的消除，減少飲料作用于牙齒的時(shí)間，從而減少牙齒脫礦[10]。唾液的緩沖能力是對(duì)抗酸蝕癥發(fā)病機(jī)制中最重要的生物因子[11]。唾液中過飽和狀態(tài)的鈣和磷酸鹽，以及堿性或中性環(huán)境，是使早期軟化釉質(zhì)再礦化的先決條件[12]。唾液中鈣磷等常見離子的含量會(huì)對(duì)釉質(zhì)和牙本質(zhì)的礦物質(zhì)產(chǎn)生影響，導(dǎo)致礦物質(zhì)的溶解減慢[13]。研究[14-15]顯示，隨著再礦化時(shí)間的延長(zhǎng)，刷牙對(duì)釉質(zhì)牙本質(zhì)表面造成的磨損深度逐漸減小，得出的結(jié)論是，進(jìn)食酸性飲料后60 min再刷牙對(duì)牙齒有較好的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果和以往的研究結(jié)果一致，即隨著酸蝕后再礦化時(shí)間的延長(zhǎng)，刷牙對(duì)釉質(zhì)表面的損傷深度逐漸減小。

氟化物是公認(rèn)的預(yù)防齲病的有效方法，其對(duì)酸蝕牙齒是否具有保護(hù)作用是近年研究的熱點(diǎn)。氟的酸蝕抑制作用機(jī)制主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面，一方面氟離子（F-）與羥磷灰石晶體中的OH-發(fā)生交換，或者與口腔中的Ca2+和PO43-結(jié)合形成氟磷灰石，氟磷灰石晶體在酸液中溶解的臨界pH值顯著低于羥磷灰石晶體，能提高牙齒的抗酸能力；另一方面，F(xiàn)-與游離Ca2+能結(jié)合生成氟化鈣沉淀（CaF2），阻止Ca2+的流失，為牙齒提供一個(gè)Ca2+的儲(chǔ)庫(kù)，當(dāng)酸攻擊釉質(zhì)時(shí)，釉質(zhì)表面沉積的CaF2顆粒能夠中和酸，緩沖口腔pH，成為酸攻擊時(shí)的暫時(shí)屏障[16-17]。含氟牙膏是一種非常普及的家庭及個(gè)人口腔衛(wèi)生保健措施，使用含氟牙膏可大大提高口腔或牙面的氟離子水平，甚至在刷牙后10 h仍有明顯效果。有研究[18]表明，酸蝕牙齒在刷牙時(shí)，使用含氟牙膏能夠增強(qiáng)軟化釉質(zhì)的再礦化作用，與不含氟牙膏相比，能夠減少對(duì)釉質(zhì)面的磨損[19]，從而對(duì)酸蝕的釉質(zhì)起到更好的保護(hù)作用。Magalh?es等[20]發(fā)現(xiàn)，對(duì)酸蝕后的釉質(zhì)刷牙時(shí)，使用質(zhì)量濃度0.11%的含氟牙膏與非含氟牙膏相比，釉質(zhì)磨損程度大約降低30%。Moretto等[21]研究發(fā)現(xiàn)，與含0.11%氟化物牙膏相比，0.5%氟化物牙膏能明顯降低酸蝕后釉質(zhì)的磨損。然而Rios等[22]研究發(fā)現(xiàn)，使用不含氟牙膏和含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.11%、0.5%的含氟牙膏對(duì)酸蝕后釉質(zhì)的磨損并沒有明顯差異。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，即使使用含氟牙膏，在進(jìn)食酸性飲料1 h后刷牙，對(duì)釉質(zhì)也有一定的磨損。

綜上所述，酸蝕和刷牙磨損相互促進(jìn)，被檸檬酸酸蝕過的釉質(zhì)，刷牙是導(dǎo)致其表面釉質(zhì)喪失的重要因素之一。釉質(zhì)被檸檬酸酸蝕后立即刷牙對(duì)其損害最大，對(duì)釉質(zhì)表面造成的磨損深度最大，可導(dǎo)致釉質(zhì)表面粗糙不平整，形成密集的凹陷，因此進(jìn)食碳酸飲料或酸性食物后，不建議立即刷牙，即使使用含氟牙膏，間隔60 min刷牙造成的釉質(zhì)磨損深度依然較不酸蝕直接刷牙造成的磨損深度大。唾液對(duì)酸蝕后的釉質(zhì)再礦化有重要作用，被檸檬酸酸蝕過的釉質(zhì)，經(jīng)過的唾液再礦化時(shí)間越久，刷牙對(duì)其造成的磨損深度越小；唾液對(duì)酸蝕后釉質(zhì)的再礦化作用并不能完全抵消刷牙對(duì)其的磨損作用，但是進(jìn)食酸性飲料60 min后再刷牙可以有效減少刷牙對(duì)酸蝕釉質(zhì)的磨損。

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（本文編輯 吳愛華）

Brushing abrasion of the enamel surface after erosion

Chen Lipei1, Ci Xiangke2, Ou Xiaoyan2.
(1. Dept. of Pediatric

Dentistry, Zhengzhou Stomatological Hospital, Zhengzhou 450000, China; 2. Dept. of Preventive Dentistry, The Affiliated Stomatological Hospital of Nanchang University, Nanchang 330000, China)

ObjectiveA study was conducted to compare the effect of different enamel remineralization periods after erosion on the depth of brushing abrasion.MethodsTen volunteers were selected for a 4-day experiment. A total of 60 enamels were randomly assigned into six groups (A-F) and placed in intraoral palatal devices. On the frst day, the palatal devices were placed in oral cavity (24 h) . On the following three days, brushing experiments were performed extraorally, two times per day. The specifc experimental method of brushing follows these next steps. First, the group F specimens were covered with a flm of wax, and then acid etched for 2 min. Subsequently, the flm of wax was detached. The groups from A to D were brushed after remineralization at the following time intervals: group A, 0 min; group B, 20 min; group C, 40 min; group D, 60 min. Erosion and remineralization were performed on group E, but without brushing. Remineralization was performed on group F, but without acid etching and brushing. The depth of enamel abrasion was determined by a mechanical proflometer. The surface morphology of the enamel blocks was observed using a scanning electron microscope.Results1) The depth of abrasion was different in varied enamel remineralization time after acid etching. The statistical signifcant differences between groups were as follows. 2) When the time of enamel remineralization after acid etching was short, the surface depression in the electron microscope was deep, and the surface morphology was rough.ConclusionBrushing immediately after acid etching would cause much serious abrasion to the enamel surface. Brushing after 60 min can effectively reduce the abrasion of acid etching enamel.

brushing wear; acid etching; remineralization; fuoride toothpaste

R 781.2

A

10.7518/hxkq.2017.04.007Supported by: Jiangxi Provincial Department of Education Project (14100). Correspondence: Ou Xiaoyan, E-mail: ouxiaoyan68@aliyun.com.

2017-01-11；

2017-04-02

江西省教育廳課題（14100）

陳麗培，住院醫(yī)師，碩士，E-mail：hnxmclp@163.com

歐曉艷，主任醫(yī)師，碩士，E-mail：ouxiaoyan68@aliyun. com